Documento completo - SeDiCI - Universidad Nacional de La Plata

Cloruro de Calcio (CaCl2•2H20), 0,196 g de Bicarbonato de Sodio (NaHCO3) y 0,080
g de Ácido Etilén-Diamino-Tetraacético (EDTA). Se ajustaba el pH a 7,0± 0,1 con
HCl o NaOH si así se requería. Las hidras antes de llevar a cabo las pruebas de
toxicidad eran transferidas a un medio de cultivo sin EDTA, y en estas mismas
condiciones se realizaba el ensayo.
Cultivo y mantenimiento
Se utilizaron recipientes circulares de vidrio, tipo Petri, de aproximadamente 20 cm
de diámetro con medio (véase Medio de cultivo) hasta 3 cm del borde del recipiente.
Los mismos se mantuvieron a 20± 2 °C, bajo una intensidad luminosa aproximada de
800 lux y un fotoperíodo de 16 h de luz y 8 h de oscuridad. Los cultivos se
alimentaron con nauplios de Artemia sp, por lo menos cuatro días a la semana, y la
limpieza se realizaba alrededor de cuatro a cinco horas posterior a proveer el alimento.
Alimentación y limpieza
Para hacer eclosionar los quistes de Artemia, se colocaban en 500 mL de una solución
salina (10 g NaCl/l) dentro de un recipiente casero. El mismo estaba construido con
una botella plástica transparente e invertida, con aireación constante desde la base e
iluminación continua con una lámpara de 100 watts sobre el recipiente a una distancia
conveniente para conseguir una temperatura de 28± 2 °C. Una vez que los quistes
eclosionaban, se detenía el burbujeo de aire. Después de cinco minutos, los quistes no
eclosionados sedimentaban y los nauplios formaban una nube que flotaba cerca del
fondo del recipiente. Estos nauplios, eran filtrados y se transferían a otro recipiente
con las mismas dimensiones, con medio de cultivo de Hydra (véase Medio de
cultivo). Se dejaban reposar, se tomaban los nauplios de Artemia con una pipeta
Pasteur y se procedía a alimentar a las hidras. Una vez alimentado el cultivo, se
esperaba cuatro a cinco horas y se limpiaba el cultivo para eliminar los residuos de la
digestión y los nauplios excedentes. La limpieza se efectuaba reemplazando todo el
medio de cultivo con medio fresco. Durante el cambio, las hidras se recuperaban al
filtrar el medio de desecho con un tamiz. Terminada la limpieza, se colocaban los
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