comparación entre marcadores microbianos - Inia

20 M.D. CARRO
que presenta una menor precisión, pero que requiere un equipo menos costoso y más fácil
de manejar (Proksch, 1972). Otro inconveniente del 15 N es el alto precio del isótopo, el
cual varía en función del enriquecimiento de la fuente. Por ejemplo, 1 g de 15 NH 4 Cl (Sigma-Alldrich
Química, S.A.) con un enriquecimiento del 98 y del 10 % cuesta aproximadamente
40.000 y 1.800 pesetas, respectivamente. La cantidad mínima necesaria para
marcar los microorganismos ruminales suele ser de 80 mg de 15 N por cada 100 g de N en
la ración, por lo que el uso del 15 N en estudios in vivo se ve limitado en muchos casos por
razones económicas. Sin embargo, estas razones no limitan su uso en estudios in vitro, en
los que la cantidad necesaria es mucho menor (1 g de 15 NH 4 Cl con un enriquecimiento
del 98 % permite realizar varios experimentos in vitro, dependiendo del número de tratamientos
y de réplicas). En cualquier caso, el 15 N es uno de los métodos más seguros y fiables,
y es recomendado como uno de los métodos de elección para determinar la síntesis
de proteína microbiana (Broderick y Merchen, 1992).
Los resultados obtenidos en los diferentes estudios en los que se han comparado el 15 N
y las purinas son contradictorios. Pérez et al. (1996a) observaron que los valores de síntesis
microbiana en ovejas que recibían heno de alfalfa suplementado con diferentes cantidades
de cebada (0, 220, 400 y 550 g/día) eran entre un 14 y un 22 % menores cuando se utilizaban
las purinas como marcador que cuando se utilizaba 15 N. De acuerdo con estos resultados,
Calsamiglia et al. (1996) observaron que las purinas subestimaban la síntesis microbiana
entre un 1yun18%,encomparación con el 15 N, en fermentadores continuos que recibían
una ración basal suplementada con diferentes concentrados proteicos. Por el contrario,
Carro y Miller (1999a) obtuvieron valores entre un 15 y un 17 % mayores con purinas que
con 15 N al determinar la síntesis microbiana en un fermentador semicontinuo al que se le
administraba una ración basal con un contenido mínimo de purinas (pared celular suplementada
con cuatro fuentes nitrogenadas diferentes). De forma similar, Tejido et al. (2001)
observaron que las purinas sobreestimaban la síntesis microbiana entre un 19 y un 47 %
comparadas con el 15 N cuando ambos marcadores se utilizaron para cuantificar el crecimiento
microbiano in vitro sobre sustratos que no contenían purinas (almidón y celulosa).
Carro y Miller (1999a) y Tejido et al. (2001) atribuyeron los mayores valores obtenidos con
las purinas a una pérdida de purinas en el proceso de aislamiento de los extractos bacterianos,
tal y como ya ha sido comentado anteriormente. Otros autores (Cecava et al., 1991)
han observado también una sobreestimación de la sínteis microbiana con las bases púricas
en estudios in vivo, y la han atribuido al efecto de las purinas del alimento que no son degradadas
en el rumen. A pesar de las diferencias obtenidas en los valores absolutos de síntesis
microbiana en los diferentes estudios, en los trabajos de Pérez et al. (1996a) y Carro y
Miller (1999a) se observó una correlación significativa entre los valores obtenidos para
cada ración con los dos marcadores, si bien esta relación no fue significativa en los trabajos
de Calsamiglia et al. (1996) y Tejido et al. (2001).
35
S
De forma similar a la descrita para el 15 N, el 35 S se infunde en el rumen en forma de
sales (principalmente Na 2
35
SO 4 ) y es incorporado a la proteína de los microorganismos a
través de la síntesis de novo de aminoácidos azufrados (cistina y metionina), aunque también
puede incorporarse a otros compuestos azufrados como la coenzima A (Broderick y
Merchen, 1992). Los protozoos son marcados indirectamente cuando engullen y digieren