comparación entre marcadores microbianos - Inia

6 M.D. CARRO
la proteína, los aminoácidos que llegan al duodeno pueden tener tres orígenes diferentes:
la proteína microbiana sintetizada en el rumen, la proteína del alimento que no ha sido degradada
y la proteína endógena (descamaciones celulares, jugos digestivos, etc.). La proteína
microbiana constituye, generalmente, una proporción considerable del flujo duodenal
de nitrógeno (N) aminoacídico en los animales rumiantes. Así, se calcula que cuando
los animales reciben raciones convencionales, la proteína microbiana representa entre el
40 y el 90 % de los aminoácidos que llegan al intestino delgado (Schniffen y Robinson,
1987), aunque en ocasiones puede alcanzar el 100 % (AFRC, 1992; Stern et al., 1994).
Debido al papel que juegan los microorganismos ruminales en la digestión de las estructuras
de la pared celular de los vegetales y a que la proteína microbiana tiene una gran calidad,
las raciones de los rumiantes deben ser formuladas para permitir el crecimiento óptimo
de estos microorganismos.
La cuantificación de la síntesis de proteína microbiana y la determinación de la degradación
de la proteína de los alimentos en el rumen son dos puntos críticos en todos los
sistemas de valoración nutritiva para los animales rumiantes (Clark et al., 1992), y cobran
especial relevancia en el caso de los animales que presentan altos niveles de producción,
ya que un aporte insuficiente de aminoácidos puede limitar la misma (Nocek y Russel,
1988). Uno de los mayores impedimentos para obtener información fiable sobre estos dos
aspectos es la falta de un método simple y preciso para determinar la síntesis de proteína
microbiana. La cuantificación del crecimiento microbiano en el rumen se puede llevar a
cabo únicamente mediante la utilización de marcadores microbianos (Schönhusen et al.,
1995). Generalmente se utilizan animales provistos de cánulas en el rumen y el duodeno,
y se determina el flujo duodenal de N no amoniacal (NNA). Posteriormente, es necesario
diferenciar el origen del N (microbiano, alimenticio y endógeno), y para ello se determina
la relación marcador/N en la digesta duodenal y en una muestra de microorganismos aislados
del rumen o del duodeno de los animales. La relación entre ambos valores (marcador/N
en la digesta duodenal / marcador/N en los microorganismos) representa la fracción
nitrogenada de la digesta duodenal que es de origen microbiano. El resto del N que llega
al duodeno corresponde a la fracción proteica del alimento no degradada en el rumen y a
las secreciones y descamaciones endógenas. Este procedimiento in vivo es el más ampliamente
aceptado, pero presenta tres puntos conflictivos. El primero de ellos es la cuantificación
de la digesta duodenal. Esta cuantificación puede realizarse mediante una colección
total de la digesta en animales provistos de cánulas reentrantes, ya que éstas permiten
recoger la digesta, muestrearla y volverla a introducir en el duodeno. Sin embargo, este
tipo de cánulas no es muy utilizado, debido a que su implantación exige un doble corte en
la pared del duodeno, lo que afecta a la inervación del intestino y a su motilidad (Wenham
y Whyburn, 1980). Por ello es más frecuente el uso de cánulas simples o en T. Estas cánulas
únicamente permiten el muestreo de la digesta duodenal en momentos puntuales, y
para cuantificar el total de la digesta es necesario utilizar marcadores de flujo, lo que añade
nuevas imprecisiones al proceso. Cada marcador presenta una serie de ventajas e inconvenientes
(Warner, 1981), pero el método más utilizado actualmente es la técnica del
doble marcador propuesta por Faichney (1975), que combina un marcador de la fase sólida
y otro de la líquida.
Un segundo punto conflictivo es el aislamiento de una fracción microbiana representativa
de toda la población ruminal. En la mayoría de los estudios en los que se ha determinado
la síntesis de proteína microbiana in vivo, la muestra de microorganismos que se
toma como referencia se ha aislado de la fase líquida del rumen, debido a que éste es el