Bactérias del Tracto Urinario.

PRACTICA #9
BACTERIAS DEL TRACTO URINARIO.
OBJETIVO DE LA PRACTICA.
Conocer la técnica de conteo e identificación de bacterias patógenas en orina.
INTRODUCCION.
La demostración en orina de bacterias en números elevados, por métodos de
cultivo adecuados, es la única forma en que puede hacerse un diagnóstico
específico de bacteriuria.
Para el óptimo aislamiento de bacterias del tracto urinario y a fin de reducir la
contaminación potencial, se debe lavar la zona periuretral y el perineo con agua
jabonosa y enjuagar bien con s.s.f. estéril o agua. Se colecta sólo la porción media
de la micción en un recipiente estéril.
En pacientes sin infecciones del tracto urinario, el recuento es nulo o a lo sumo de
muy pocas colonias. En los que pacientes con infecciones el recuento es
comúnmente mayor de 100,000 organismos por ml. Este número es uno de los
indicadores de condición patológica en el tracto urinario. Los recuentos
intermedios no deben ser frecuentes si el procedimiento de recolección de orina
se lleva a cabo correctamente. El aislamiento de tres o más especies bacterianas
también indica que la muestra fue recolectada incorrectamente.
Las bacterias frecuentemente encontradas como patógenas del tracto urinario son
bacterias entéricas gramnegativas, estreptococos, estafilococos; otras pueden ser
neiserias, lactobacilos y mycobacterias. Puede haber micosis por levaduras como
Candida. En los casos de uretritis pueden encontrarse asociadas Clamidias, pero
es necesario usar otros métodos para detectarlas.
MATERIALES Y METODOS.
Es conveniente que cada alumno trabaje su propia muestra de orina. En cada
equipo debe haber una muestra positiva.
I. Técnica de dilución con asa calibrada:
1. En la orina previamente homogenizada se introduce el asa calibrada y se saca,
cuidando que se forme una película.
2. Se toma una asada de orina con el asa calibrada de 0.001 ml y se siembra una
placa de agar-sangre, estriando una línea recta en el centro de la placa.
Enseguida se estría toda la placa con una asa regular, cruzando la línea central,
para obtener aislamiento de las bacterias. Se inocula en forma igual una placa de
agar-sangre y una de agar-EMB.
3. Todas las placas se incuban a 35 C durante 24 hs.
4. Se cuentan las colonias en las placas.
5. En cada caso, el número de colonias es equivalente al número de bacterias,

que será multiplicado por 1000 que es el múltiplo de la dilución (porque se
inocularon 0.001 ml), para dar una estimación del número de bacterias por ml de
orina.
5. Si el conteo lo amerita, se continúa la identificación de las bacterias, tomando
en cuenta el crecimiento en las placas de EMB, sangre y chocolate. El
crecimiento en cada medio selectivo dará la pauta para sospechar de una bacteria
patógena ene special, desarrollando las pruebas bioquímicas correspondientes.
II. Método de las diluciones y vaciado en placa.
1. Siembre por estría cruzada una asada de orina en agar-sangre, otra en EMB.
2. Se hacen diluciones de la orina con una pipeta de l ml estéril, diluyendo con 9
ml de s.s.f. estéril (l:10, 1:100, 1:1000, 1:10,000).
3. De cada dilución se va colocando 1 ml en una caja de Petri vacía y estéril.
Enseguida se adiciona medio de tripticasa- agar-soya fundido tibio. Se mezcla
cuidadosamente sin mojar los bordes de las cajas. Se dejan solidificar e incuban a
37 C, 24 hs.
4. Se cuenta el número de colonias y se multiplica por el número de la dilución
para obtener el número de colonias / ml de orina.
5. Si el conteo lo amerita, se continúa la identificación de las bacterias, tomando
en cuenta el crecimiento en las placas de EMB, sangre y chocolate, haciendo las
pruebas bioquímicas correspondientes..
RESULTADOS, DISCUSION Y CONCLUSIONES.
Compare los resultados de las pruebas negativas con los de las positivas y
discuta. Obtenga conclusiones. Interprete los resultados del conteo en su muestra
problema, así como el complemento con la identificación de la bacteria
involucrada.
CUESTIONARIO.
1. Investigue y describa las tecnicas de identificación de Clamydya y de
Mycobacterium tuberculosis .