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FACTORES IMPORTANTES DEL METODO :
La FASE SOLIDA es un inmunoabsorvente donde se inmoviliza el antigeno 0
el anticuerpo en una cantidad que pueda ser reproducible. En la actualidad se
emplean placas de polivinilo 0 poliestireno.
Los ANTISUEROS se producen generalmente en conejos y su purificaci6n, asf
como el esquema de inmunizaci6n dependen del tipo de antfgeno empleado.
Se toma el suero cuando la producci6n de IgG es elevada y se realiza una
absorci6n del suero para evitar reacciones no especificas cuando sea
necesario.
EI CONJUGADO es uno de los factores mas importantes del metodo de
ELISA. La enzima que forma el conjugado debe mantener su actividad y el
anticuerpo sus propiedades inmunol6gicas. La enzima debe ser altamente
reactiva, estable, pura econ6mica y con gran actividad especifica.
EI SUSTRATO debe permitir la detecci6n de la enzima que esta formando el
conjugado, debe ser especifico y reproducible, ser facil de preparar, poco
nocivo, los productos de la hidr61isis deben ser solubles y con un coeficiente de
extinci6n alto. EI tiempo de reacci6n enzima - sustrato se determina
experimentalmente.
Los LAVADOS se realizan despues de los periodos de incubaci6n para
eliminar 10 no fijado y 10 que esta en exceso. Para ello se emplea agua
destilada, soluci6n salina 0 PBS, todo conteniendo tween 20 que es un
detergente bio/6gico no i6nico que elimina tambien lipopolisacaridos
bacterianos (Briuns 1978).
MATERIALES Y METODOS
METODOS DE PURIFICACION EMPLEADOS
Para purificar la anti-PMSG partimos de sueros de conejos inmunizados con
PMSG purificada en nuestro laboratorio, y empleamos los siguientes metodos
cromatograticos:
Metodo I : Purificaci6n de anti - PMSG par cromatografia de afinidad utilizando
como matriz Sepharosa 4B activada con bromuro de cian6geno y conteniendo
PMSG comercial como ligando.
Metodo II: Purificaci6n de anti - PMSG por cromatografia de afinidad
utilizando como matriz Sepharosa proteina G.
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