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Para purificar la PMSG empleada como recubrimiento em el ELISA se utiliz6 la cromatograffa de intercambio i6nico con CM y SP Sephadex C-50 como intercambiador a partir de crudo de PMSG obtenido por precipitaciones alcoh61icas en la planta de hemoderivado de LABIOFAM. DIAGRAMA DE FLUJO DE PURIFICACION. CRUDO DE PMSG + Dia/isis y c/arificado. Cromatografia de intercambio i6nico. U/trafi/traci6n. 50S-PAGE Y Lowry Prueba bio/6gica. ELISA ELABORACION DE UN KIT DE ELISA DE PMSG : EI ELISA de PMSG es de tipo competitivo indirecto donde compite el antjgeno que esta recubriendo la fase s61ida y el de la muestra analizada por unirse a un 14
ELABORACION DE UN KIT DE ELISA DE PMSG : EI ELISA de PMSG es de tipo competitivo indirecto donde compite el antfgeno que esta recubriendo la fase s61ida y el de la muestra analizada por unirse a un rimer anticuerpo, que dependiendo de las concentraciones de PMSG de la muestra se unira o no al anticuerpo marcado con la enzima. DIAGRAMA DE FLUJO DE ELISA. Recubrimiento con ant/geno ( PMSG) 1 Incubar Ihora a 37° C. Tres lavados con agua-nveen Bloqueo de Ia paca con ge/atina a/3%. 1 Incubar Ihora a 37° C. Tres lavados con agua-tween Muestras y controles Incubar Ihora a 37° C. Incubar 15 min a37° C 1 Incubar Ihora a 37° C. Tres lavados con agua-tween Conjugado Anti-lgG Peroxidasa. l So/uci6n de sustrato Incubar Ihora a 37° C. Tres lavados con aguatween 1 Incubar durante 30 min en la oscuridad. 15
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[23]Pursley,1. R; M. C. Witbank; 1.
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