B. abortus

II Curso AvanzadoWHO Global Salmonella Surveillance (WHO-GSS)1er Taller WHO-GSS / PulseNetBuenos Aires, 27 al 31 de mayo de 2008Brucelosis HumanaDiagnóstico SerológicoyBacteriológicoNidia E. LuceroServicio de BrucelosisINEI-ANLIS “Carlos G Malbran”

GéneroBrucellaEspeciesterrestresbiovarPatogenicidadpara el HombreHuéspedpreferidoB. melitensis 1 AltaCabras yOvejas23B. abortus 1 Moderada Bovinos234569B. suis 1 Alta Cerdos2 SD Cerdos3 Alta Cerdos4 Moderada Renos5 Alta RoedoresB. ovis SD OvinosB. canis Baja PerrosB. neotomae SD Ratas

Especies marinas1994B. pinnipediaeB. cetaceae

Cadena EpidemiológicaReservoriosalvajeContactodirectoReservoriodomésticoContactoindirectoVía digestivaVía inhalatoriaHumanoLeche y derivadosIngestiónFuente: Medicina laboral: normas preventivas, MS

Clasificación n de CasoSospechoso (CL+Epi)Probable (+ Lab Tamiz)Confirmado (+ Lab confirma)

Diagnóstico de LaboratorioEnsayos DirectosProbar la presencia del MOEstudios bacteriológicos

Aislamiento de cepas de BrucellaSangreLisisHemocultivoMédulaLCRAbscesosBiopsiasLíquido articularLíquido prostáticoMedio cultivo sólidoMedio cultivo líquido

Aislamiento de cepasMEDIO DE CULTIVO LÍQUIDOMONOFÁSICOBIFÁSICOSISTEMAAUTOMATIZADOHemo Brucella(Britania, Bs.As. Argentina )bio Mérieux,Marcy lÉtoile,FranceBactecBactAlert

Probabilidad de AislamientoEs mayor si la muestra se toma alcomienzo de los síntomasFiebre alta 86%Fiebre moderada 75%Sin fiebre 28%

Flujograma género Brucella vs otros gram negativosCocobacilos gram negativosCrecimiento lento (48h)Colonias no hemolíticasColonias no pigmentadasTrabajar en Cabina Seguridad BiológicaSatélite PosOxidasa-Catalasa PosSatélite NegConsiderar HaemophilusUreaPosUreaNegOxidasa-Catalasa NegConsiderar FrancisellaEnviar al Lab deReferenciaConsiderar otro gram Neg

Género BrucellaGrupo de riesgo 3Manual bioseguridad, OMS, 2005BioterrorismoGrupo Bhttp://emergency.cdc.gov/firsthours/es/bioterrorism.asp

Tipificación n del género gBrucellaMorfología de la coloniaProducción de SH 2Urea (Bauer)Sueros monoespecíficos anti A, M, RCrecimiento en presencia de bacteriostáticosCrecimiento en medio con alcohol polihidroxiladoSensibilidad a los antibióticosFagotipia

Cepas de Brucella aisladas de Humanos ( 402)Argentina 1994-2007B. suis39%B. canis1%B. abortus20%B. melitensis40%Lucero et al., 2007

140120100806040200Especies y biovars de Brucella aisladas dehumanos (Argentina-1994-2007)B. abortus 2B. abortus C19B. melitensis 1B. melitensis 1aB. melitensis 3B. suis 1B. suis 1aB. canisB.abortus 1

Diagnóstico de LaboratorioEnsayos IndirectosRespuesta InmuneDeterminar la presencia de anticuerpos

Género BrucellaEspecies patógenas para el hombreMorfología lisaMorfología rugosa B.abortus B.melitensis B.suis B. pinnipediae B.cetaceae B.canis

MétodosSerológicosTamizHUDDLESON (PAT) VC 11% pH 6.7+/-0.3ROSA DE BENGALA (RB) VC 8% pH 3.65+/-0.5Aglutinación Antígeno tamponado (BPA)VC 11% pH 3.65+/-0.02

Aglutinación n con antígenotamponado (BPA)Sensibilidad: 100%Especificidad: 99.67%n Negativos PositivosPacientes con cultivo positivo 57 0 57Población asintomática negativa a RB y FC 307 306 1Pacientes con evidencia clínica y positivos a RB y FC 142 0 142506Antígeno: Suspensión de B.abortus 1119-3Lucero & Bolpe, 1998

MétodosSerológicosConfirmatorios clásicosWRIGHT (TAT) VC 4.5% pH 6.7+/-0.32 MERCAPTO-ETANOL ETANOL (2ME)FIJACIÓN N DE COMPLEMENTO (CF)50% Hemólisis,Globulos Rojos (GR) 2.8%

Pruebas de unión n primariaELISA de competición n (CELISA)Sensibilidad: 98.3%Especificidad: 99.7%Antígeno: S-LPS de B.abortus 1119-3MAb: específico epitope porción O-PS del S-LPSn Negativos PositivosPacientes positivos (51 con cultivo y 65 serología clásica) 116 2 114Población asintomática negativa a RB y FC 341 340 1CUTOFF >28% ILucero et al., 1999457

Sensibilidad: 96.1%Especificidad: 97.9%n Negativos PositivosPacientes con cultivo positivo 76 3 73Población asintomática negativa a RB y FC 340 333 7416CUT-OFF >72mPAntígeno: FITC conjugado con una porción de lacadena O-PS del S-LPS de B.abortus 1119-3Lucero et al., 2003Pruebas de unión n primariaTécnica de polarización de la fluorescencia (FPA)

Brucelosis caninaPrueba TamizMicroaglutinación en portaobjeto (RSAT)Carmichael & Joubert, 1987VC 7% pH 8.6 +/-0.1Prueba confirmatoriaELISA INDIRECTA (IELISA)Lucero et al., 2005

IELISASensibilidad-Especificidad: 100%Cutoff: %P>27Antígeno: B.canis M-nNegativos PositivosCasos positivos 17 0 17Casos sospechosos 35 17 18Casos asintomáticos 110 110 0Casos c/otros diagnósticos 9 9 0Casos positivos a S-Brucella sp. 8 0 7179Lucero et al., 2005

DIAGNOSTICO SEROLOGICODE BRUCELOSIS HUMANASCREENINGCONFIRMATORIASCLASICASPRUEBAS DE UNIONPRIMARIASCREENINGUNIONPRIMARIAPAT RB BPA TAT 2ME CF CELISA FPA RSAT IELISAANTIGENOS DE BRUCELLA EN FASE LISAANTIGENOS ENFASE RUGOSA

Casos clínicosPacientes con aislamiento de S-Brucella sp.Caso BPA TAT* CF* CELISA Especie/biovar%I1 Pos 1600 320 77 B. abortus 12 Pos 400 80 67 B. abortus 13 Pos 1600 40 65 B. abortus 24 Pos 800 40 52 B.melitensis 15 Pos 800 320 74 B.melitensis 16 Pos 6400 640 69 B. suis 17 Pos 400 640 83 B. suis 18 Pos 400 160 93 B. suis 1* Recíproca del título

Caso clínicoCepa aislada B. canisSuero Fecha* PAT BPA RB TAT CF CELISA RSAT** IELISAHumano 2 Neg Neg Neg Neg Neg Neg 32 873 Neg Neg Neg Neg Neg Neg 16 738 Neg Neg Neg Neg Neg Neg 2 36Perro 1 3 Neg Neg 4 538 Neg Neg Pos+/- 23Perro 2 3 Neg Neg Pos+/- 228 Neg Neg Neg 15*Meses después de la admisión** Recíproca del título

Nidia E. LuceroSandra M. AyalaGabriela I. EscobarGustavo LópezLDeborah B. HasanSERVICIO DE BRUCELOSISINEI-ANLIS DR. C. G. MALBRANnidia@elsitio.net