Rapport stage IBS final

- on obtient des colonies : la transformation s’est bien déroulée, le plasmide
s’est intégré, la bactérie est viable et peut donc se développer normalement sur
un milieu de culture contenant l’antibiotique.
5. La purification :
Il existe différents types de purification en fonction de ce que l’on souhaite
purifier :
- purification pour obtenir de l’ADN plasmidique issu d’une culture liquide
- purification pour obtenir de l’ADN plasmidique après une PCR
- purification sur gel d’agarose
- purification sur colonne
◦Les deux premières méthodes se font toutes les deux sur colonne de silice. Elles
permettent l’élution sélective des différents constituants de la solution.
Ainsi par actions successives de tampons, on peut récupérer l’ADN plasmidique
dans une solution d’eau.
◦La purification sur gel fait intervenir un gel d’agarose. En faisant migrer la
fraction déposée dans le puits grâce à un courant, on obtient différentes bandes
(révélées au BET) séparées en fonction de leur taille apparente. En prélevant les
morceaux de gel contenant les bandes et en dissolvant l’agarose à 50° on peut en
extraire le fragment d’ADN sur la colonne de silice.
TECHNIQUES DE BIOCHIMIEDES PRTEINES :
◦Concernant les purifications de protéines sur colonne, j’en ai utilisé deux : la
chromatographie d’exclusion de taille et celle d’affinité :
- la chromatographie d’exclusion de taille :
Les grosses molécules ne sont pas
incluses, elles sortent donc les
premières de la colonne.
Les petites molécules sont incluses
dans les billes de gel et mettent donc
plus de temps à traverser la colonne.
En relevant l’absorbance dans les
UV à 280 nm en sortie de colonne
on peut récupérer les fractions
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