Contrôle d'extraction d'ARN et d'inhibition - Diagenode Diagnostics

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DIAGENODE CONTRÖLE D’EXTRACTION D’ARN & D’INHIBITION MANUEL D'UTILISATION • Pour obtenir des résultats optimaux, Diagenode suggère quelques méthodes d’extraction adaptées afin d’éviter les inhibiteurs de PCR. . • Le contrôle d’extraction et d’inhibition doit être utilisé pour chaque réaction de PCR. • Dans le contexte du suivi d’un patient: les scientifiques/les techniciens de laboratoire doivent utiliser la même méthode d’extraction, le même mastermix, la trousse du même fabricant et le même système d’amplification PCR. Attention Si les résultats obtenus pour le contrôle d'extraction et d'inhibition ne sont pas satisfaisants, c’est aux scientifiques/techniciens de laboratoire d’estimer s’il faut changer les méthodes d’extraction en fonction du résultat obtenu à ce contrôle d’extraction et/ou d’inhibition afin d’obtenir des résultats concluants. • Le contrôle d’extraction viral doit être manipulé sous une hotte à flux laminaire. Contamination • Veuillez réaliser l'extraction d’acide nucléique et l’amplification en temps réel dans des locaux séparés. • Gardez tous les tubes et les ampoules fermés lorsque vous ne les utilisez pas. • Le laboratoire de PCR (hotte stérile, plateforme d’extraction ADN/ARN, tablier de laboratoire, etc.) doit être nettoyé après chaque test PCR avec les produits appropriés. • Les trousses contaminées doivent être jetées dans une poubelle spécifique pour les substances biologiques. • La trousse ne doit pas être utilisée par une personne présentant des symptômes similaires à la maladie recherchée. • Les contrôles PCR positifs et négatifs doivent être réalisés à chaque réaction PCR. • Il est obligatoire de porter des gants. • Il faut utiliser des tips à filtre pour tous les mélanges PCR. • Avant ouverture, tous les tubes doivent être centrifugés. • Ne jamais pipetter les solutions avec la bouche. Ne pas fumer, ni manger, ni boire dans les zones où l’on manipule les échantillons ou les réactifs de la trousse. • Ne pas ingérer la trousse de diagnostic. • Les tests ne doivent pas être réalisés par une femme enceinte Conservation • Cette trousse doit être maintenue à l’abri de la lumière. Pour tout problème/question, veuillez nous contacter: Tél. : +32 4 364 20 50 / info@diagenodediagnostics .com Europe Diagenode sa / CHU - Tour GIGA - B34 - 3 e étage // Avenue de l’Hôpital, 1 // 4000 Liège (Sart Tilman) // Belgium // Phone: (+32) 4 364 20 50 // Mail: info@diagenode.com
PAGE 7 Matériel requis (non fourni) • Pipettes • Embouts de pipette stériles avec filtre exempt d’ARNase/ADNase • Gants non poudrés • Vortex • Centrifugeuse de table • Tubes de microcentrifugeuse exempts de ARNase / ADNase (1,5 et/ou 2 ml) • Tubes/capillaires ou plaque 96 • Tablier de laboratoire • Eau exempte d’ ARNase/ADNase • Trousse d’isolation d’ARN (cf. point B .2. Extraction d’échantillons/isolation d’ARN) • Consommables et accessoires (tubes, microcentrifugeuse, plaques, bande adhésive) pour le système PCR approprié. • Taqman® PCR Mastermix 1 étape, Applied Biosystems (Roche) • Taqman® reverse transcription reagents, Applied Biosystems (Roche) • Taqman® Universal PCR Mastermix, Applied Biosystems (Roche) • IScript Supermix, Biorad • Taqman fast Virus-1, Applied Biosystems (Roche) • Machine de PCR en temps réel: ABI / Roche/ Biorad / Qiagen / Agilent Stratagene ou Cepheid • Hotte à flux laminaire (Mix/DNA) Prélèvement, stockage et transport d’échantillons humains Le contrôle d’extraction et d’inhibition était principalement validé pour utilistion avec des échantillons de selles et respiratoires. 1. Prélèvement d’échantillons • Echantillons respiratoires humains : des échantillons respiratoires humains tels lavage broncho-alvéolaire, expectorations, écouvillage/lavage du nasopharynx doivent être prélevés. • Echantillons de selles : des échantillons de selles doivent être prélevés. 2. Stockage des échantillons Les échantillons humains peuvent être stockés à 4°C pour une durée maximale de 24 heures. Pour une durée plus longue, ils doivent être congelés à -20°C ou à -80°C. Les échantillons humains doivent être stockés dans des tubes en polypropylène exempts d’ADNase / ARNase. La sensibilité de la PCR peut être compromise si les échantillons humains sont congelés et décongelés de façon répétée. Nous recommandons d'éviter les cycles de congélation/décongélation. www.diagenodediagnostics.com
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