Contrôle d'extraction d'ADN et d'inhibition - Diagenode Diagnostics

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PAGE 6 DIAGENODE CONTRÖLE D’EXTRACTION D’ADN & D’INHIBITION MANUEL D'UTILISATION Extraction/PCR • Les trousses de PCR en temps réel de Diagenode doivent être utilisées par des scientifiques/des techniciens de laboratoire possédant un grand savoir-faire en biologie moléculaire et, en particulier, en matière de plateforme PCR en temps réel. • Pour obtenir des résultats optimaux, veuillez vous référer aux méthodes d’extraction validées par Diagenode. . • Le contrôle d’extraction d’ADN et d’inhibition doit être utilisé pour chaque réaction de PCR. • Dans le contexte du suivi d’un patient: les scientifiques/les techniciens de laboratoire doivent utiliser la même méthode d’extraction, le même mastermix, la trousse du même fabricant et le même système d’amplification PCR. Attention Si les résultats obtenus pour le contrôle d'extraction d’ADN et d'inhibition ne sont pas satisfaisants, c’est aux scientifiques/techniciens de laboratoire d’estimer s’il faut changer les méthodes d’extraction en fonction du résultat obtenu avec ce contrôle d’extraction et/ou d’inhibition afin d’obtenir des résultats concluants. • Le contrôle d’extraction viral doit être manipulé sous une hotte à flux laminaire. Contamination • Veuillez réaliser l'extraction d’acide nucléique et l’amplification en temps réel dans des locaux séparés. • Gardez tous les tubes et les ampoules fermés lorsque vous ne les utilisez pas. • Le laboratoire de PCR (hotte stérile, plateforme d’extraction ADN/ARN, tablier de laboratoire, etc.) doit être nettoyé après chaque test PCR avec les produits appropriés. • Les trousses contaminées doivent être jetées dans une poubelle spécifique pour les substances biologiques. • La trousse ne doit pas être utilisée par une personne présentant des symptômes similaires à la maladie recherchée. • Les contrôles PCR positifs et négatifs doivent être réalisés à chaque réaction PCR. • Il est obligatoire de porter des gants. • Il faut utiliser des tips à filtre pour tous les mélanges PCR. • Avant ouverture, tous les tubes doivent être centrifugés. • Ne jamais pipetter les solutions avec la bouche. Ne pas fumer, ni manger, ni boire dans les zones où l’on manipule les échantillons ou les réactifs de la trousse. • Ne pas ingérer la trousse de diagnostic. • Les tests ne doivent pas être réalisés par une femme enceinte Conservation • Cette trousse doit être maintenue à l’abri de la lumière. Attention Le stockage de la trousse à température ambiante peut entraîner la dégradation des amorces/des sondes/du contrôle positif, ce qui peut provoquer une moins bonne sensibilité. Nous conseillons dès lors l'utilisation d’une nouvelle trousse. Europe Diagenode sa / CHU - Tour GIGA - B34 - 3 e étage // Avenue de l’Hôpital, 1 // 4000 Liège (Sart Tilman) // Belgium // Phone: (+32) 4 364 20 50 // Mail: info@diagenode.com
PAGE 7 Matériel requis (non fourni) • Pipettes • Embouts de pipette stériles avec filtre exempt d’ARNase/ADNase • Gants non poudrés • Vortex • Centrifugeuse de table • Tubes de microcentrifugeuse exempts de ARNase / ADNase (1,5 et/ou 2 ml) • Tubes/capillaires ou plaque 96 puits • Tablier de laboratoire • Eau exempte d’ARNase/ADNase • Trousse d’isolation d’ADN (cf. point B .2. Extraction d’échantillons/isolation d’ADN) • Consommables et accessoires (tubes, microcentrifugeuse, plaques, bande adhésive) pour les systèmes ABI / Roche/ Biorad /Qiagen / Stratagene ou Cepheid system • Mastermix (cf. point B.3. Préparation à la réaction de PCR) • Machine de PCR en temps réel: ABI / Roche/ Biorad / Qiagen / Agilent Stratagene ou Cepheid • Hotte à flux laminaire (Mix/DNA) Prélèvement, stockage et transport d’échantillons humains 1. Prélèvement d’échantillons • Échantillons respiratoires humains : des échantillons respiratoires humains tels, lavage broncho-alvéolaire, expectorations, écouvillage/lavage du nasopharynx doivent être prélevés. • Échantillons de sang : des échantillons de sang humains tels que du sang ou du plasma doivent être prélevés. • Échantillons d’urine. • Échantillons de selles : des échantillons de selle doivent être prélevés. 2. Stockage des échantillons Les échantillons humains peuvent être stockés à 4°C pour une durée maximale de 24 heures. Pour une durée plus longue, ils doivent être congelés à -20°C ou à -80°C (en fonction du type d’échantillon). Les échantillons humains doivent être stockés dans des tubes en polypropylène exempts d’ADNase / ARNase. La sensibilité de la PCR peut être compromise si les échantillons humains sont congelés et décongelés de façon répétée. Nous recommandons d'éviter les cycles de congélation/décongélation. 3. Transport des échantillons Les échantillons humains (sang, plasma, urine, selle, échantillon respiratoire) doivent être transportés dans des containers adaptés. Le transport d'échantillons pathogènes doit se faire dans le respect des normes locales et nationales. Les échantillons humains doivent être transportés à une température de -20°C. www.diagenodediagnostics.com
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