GPT/ALT - L - Gdsrl.com

GPT/ALT - L
REF SA4920 00 - 2x40 + 2x4 ml
INTENDED USE
AMS GPT/ALT - L is intended for the kinetic quantitative in vitro
determination of alanine aminotransferase (ALT) activity in human
serum and plasma using the AMS Sat-450 Chemistry System.
SUMMARY
Measurement of the activity of serum aminotransferases (formerly
called transaminases) is indicated in the diagnosis of acute hepatic
disorders and in monitoring their evolution. As alanine
aminotransferase (ALT) is a liver specific enzyme, it is significantly
elevated only in hepatobiliary diseases.
METHOD PRINCIPLE
Optimized UV test according to SCE (Scandinavian Committee on
Enzymes) recommendations.
The principle of the method is based on the following enzymatic
reactions:
ALT
L-Alanine + 2-Oxoglutarate
L-Glutammate + Pyruvate
Pyruvate + NADH + H +
LDH
L-Lactate + NAD +
Decrease in absorbance value at 340 nm, due to the oxidation of NADH
to NAD + , is directly proportional to the ALT activity in the sample.
COMPOSITION
Reagent 1
TRIS 28 mmol/l
EDTA-Na2
5.68 mmol/l
L-Alanine 284 mmol/l
LDH ≥ 1200 U/l
NaN3 < 0.095 g/l
Reagent 2
2-Oxoglutarato 68 mmol/l
NADH 1.12 mmol/l
NaN3 < 0.095 g/l
Preparation
Prepare the Working Solution by adding the content of one vial of
Reagent 2 into one vial of Reagent 1. Mix well avoiding foam formation.
Storage and stability
Store at 2-8 °C. Do not freeze the reagents! The reagents are stable up
to the expiry date stated on the label when kept in closed vial.
On board stability of Working Solution: 30 days
SAMPLES
Serum, (heparin or EDTA) plasma.
Do not use haemolysed samples because haemolysis can cause falsely
positive results. Do not use anticoagulants containing ammonium salts
(ex. ammonium heparin).
Loss of activity within 3 days:
< 10% at 2-8 °C
< 17% at 15-25 °C
Stability at - 20 °C at least 3 months.
Specimen collection / Preanalytical factors
It is recommended that specimen collection should be carried out in
accordance with NCCLS protocol H11-A3.
INSTRUMENT TEST PROCEDURE
For the assay procedure refer to the Application Manual and to the
instrument Operator Manual.
CALIBRATION
Use GD-Cal (REF GD8577 00). See calibrator insert sheet for lot specific
concentration and traceability. Alternatively, use the theoretical factor
of -1746
Recalibrate the instrument every 30 days or when a new lot or new
bottle of reagent is used.
QUALITY CONTROL
It is recommended to use controls with known ALT concentration.
Check that the values obtained are within the reference range provided.
Normal and abnormal controls such as GD-Norm (REF GD8580 00) and
GD-Path (REF GD8582 00) are recommended.
Refer to Westgard et al. (3) for identification and resolution of out of
control situations.
CALCULATION OF RESULTS
Refer to the Application Manual and to the instrument Operator Manual.
Conversion factor
ALT [U/l] x 0,01667 = ALT [µkat/l].
REFERENCE INTERVALS (1)
Serum:
Males: 10 - 60 U/l 0,17 - 1,00 µkat/l
Females: 8 - 40 U/l 0,13 - 0,67 µkat/l
Each laboratory should establish reference ranges for its own patients
population.
PERFORMANCE CHARACTERISTICS
Precision
Representative data from studies using CLSI protocol NCCLS EP5-A2
are summarized below.
Control Level 1 Level 2
Number of Observations N 78* 78*
Number of Runs N 39 39
Mean U/l 60 126
Within Run %CV 1,6 1,1
Total %CV 2,2 1,7
*Outliers not included in statistical calculation
Linearity
The linearity range, established using CLSI protocol NCCLS EP6-A is
2 - 387 U/l (0,03 - 6,45 µkat/l).
Minimum Detection Limit
The minimum detection limit for the assay, established using CLSI
protocol NCCLS EP17-A, is 2 U/l (0,03 µkat/l).
AMS S.p.A. – Registered Office and Plant Diagnostics Manufacturing
Via E. Barsanti 17/A | 00012 Guidonia (Rome) – Italy Via Galileo Galilei, 38 | Seggiano di Pioltello (MI) - Italy
Ph. +39 0774 354441 | Fax +39 0774 578035 Ph. +39 02 929189.1 | Fax +39 02 929189.39
www.ams-analyzers.com | info@ams-analyzers.com www.gdsrl.com | infodiagnostics@ams-analyzers.com
Method Comparison
Correlation studies were performed using CLSI protocol NCCLS EP9-A2.
Serum results from this assay on Sat-450 were compared with those
from a commercially available analogous system. Results were as
follows: N = 67, y = 0,803x - 0,86 U/l, r = 0,988.
Limitations / Interfering Substances
No interferences have been observed from the following substances up
to the below reported concentration:
Bilirubin > 40 mg/dl
Hemoglobin > 150 mg/dl
Triglycerides > 2000 mg/dl
Ascorbic acid > 150 mg/dl
For a comprehensive review of interfering substances, refer to the
publication by Young (2) .
PRECAUTIONS AND WARNINGS
The reagents contain inactive components such as preservatives
(Sodium azide or others), surfactants etc. The total concentration of
these components is lower than the limits reported by 67/548/EEC and
88/379/EEC directives about classification, packaging and labelling of
dangerous substances. However, the reagents should be handled with
caution, avoiding swallowing and contact with skin, eyes and mucous
membranes. The use of laboratory reagents according to good
laboratory practice is recommended.
Waste Management
Please refer to local legal requirements.
BIBLIOGRAPHY
1. Besozzi M, De Angelis G., Franzini C: Espressione dei risultati nel laboratorio
di chimica clinica. Società Italiana di Biochimica Clinica (SIBioC).
2. Young D.S., Effects of Drugs on Clinical Laboratory Tests, AACC Press,
Washington, D.C., 1990.
3. Westgard J., and Barry P., Cost- Effective Quality Control: Managing the
Quality and Productivity of Analytical Processes, AACC Press, Washington,
D.C., 1986.
4. Thomas L. Alanine aminotransferase (ALT), Aspartate aminotransferase
(AST). In: Thomas L, editor. Clinical Laboratory Diagnostics. 1st ed.
Frankfurt: TH-Books Verlagsgesellschaft; 1998. p. 55-65.
5. Moss DW, Henderson AR. Clinical enzymology. In: Burtis CA, Ashwood ER,
editors. Tietz Textbook of Clinical Chemistry. 3rd ed. Philadelphia: W.B
Saunders Company; 1999. p. 617-721.
6. The Committee on Enzymes of the Scandinavian Society for Clinical
Chemistry and Clinical Physiology. Recommended methods for the
determination of four enzymes in blood. Scand J Clin Lab Invest 1974;
33:291-306.
7. Penttilä IM, Jokela HA, Viitala AJ, Heikkinen E, Nummi S, Pystynen P et al.:
Activities of aspartate and alanine aminotransferases and alkaline
phosphatase in sera of healthy subjects. Scand J Clin Lab Invest 1975; 35:
275-84.
8. Chitto G, Fabi A, Franzini C, Galletta G, Leonardi A, Marelli M, Morelli AM:
Variabilità biologica intra-individuo: rassegna della letteratura, contributo
sperimentale e considerazioni critiche. Biochimica Clinica, 1994; 18, 10:673.
9. NCCLS Document, “Procedures for the collection of arterial blood specimens”,
Approved Standard, 3rd Ed. (1999).
10. EU-Dir 1999/11 Commission Directive of 8 March 1999 adapting to technical
progress the principles of good laboratory practice as specified in Council
Directive 87/18/EEC.
Met. SA492000.0 Eng
Ed. 09/2012

GPT/ALT - L
REF SA4920 00 - 2x40 + 2x4 ml
USO
Il kit AMS GPT/ALT - L viene impiegato per la determinazione cinetica
quantitativa in vitro dell’alanina aminotransferasi (ALT) nel siero e
plasma umano con sistema AMS Sat-450.
SOMMARIO
La determinazione dell'attività delle aminotransferasi del siero
(originariamente chiamate transaminasi) è indicata nella diagnosi di
disturbi epatici acuti e nel monitoraggio della loro evoluzione. Poichè
l'alanina aminotranferasi (ALT) è un enzima specifico del fegato, risulta
elevato in modo significativo soltanto nelle malattie epatobiliari.
PRINCIPIO
Metodo UV ottimizzato secondo le raccomandazioni della SCE
(Scandinavian Committee on Enzymes).
Il metodo è basato sulle seguenti reazioni enzimatiche:
L-Alanina + 2-
Ossoglutarato
Piruvato + NADH + H +
ALT
LDH
L-Glutammato + Piruvato
L-Lattato + NAD +
La diminuzione di assorbanza a 340 nm, dovuta all'ossidazione del
NADH in NAD + , è direttamente proporzionale all'attività dell'ALT nel
campione.
COMPOSIZIONE
Reagente 1
TRIS 28 mmol/l
EDTA-Na2
5.68 mmol/l
L-Alanina 284 mmol/l
LDH ≥ 1200 U/l
NaN3 < 0.095 g/l
Reagente 2
2-Ossoglutarato 68 mmol/l
NADH 1.12 mmol/l
NaN3 < 0.095 g/l
Preparazione
Preparare la Soluzione di Lavoro versando il contenuto di un flacone di
Reagente 2 in un flacone di Reagente 1. Miscelare bene evitando la
formazione di schiuma.
Conservazione e Stabilità
Conservare a 2-8 °C. Non congelare i reattivi! I reattivi sono stabili fino
alla data di scadenza riportata in etichetta, se conservati in flacone
chiuso.
Stabilità a bordo dello strumento della Soluzione di Lavoro: 30 giorni
CAMPIONI
Siero, plasma (eparina o EDTA).
Non usare campioni emolizzati poiché l'emolisi può causare risultati
falsamente positivi. Anticoagulanti contenenti sale d’ammonio (ad es.
ammonio eparina) non devono essere utilizzati.
Perdita di attività entro 3 giorni:
< 10% a 2-8 °C
< 17% a 15-25 °C
Stabilità a - 20 °C almeno 3 mesi.
Raccolta dei Campioni / Fattori Preanalitici
Si raccomanda di effettuare la raccolta dei campioni in conformità al
Protocollo NCCLS H11-A3.
PROCEDURA DI ANALISI
Per la procedura di analisi fare riferimento all’Application Manual e al
Manuale dell’Operatore dello strumento.
CALIBRAZIONE
Utilizzare GD-Cal (REF GD8577 00). Riferirsi all’inserto del calibratore
per la concentrazione specifica del lotto e la tracciabilità.
Alternativamente, utilizzare il fattore teorico di -1746.
Ricalibrare lo strumento ogni 30 giorni o quando viene utilizzato un
nuovo lotto o una nuova bottiglia di reagente.
CONTROLLO DI QUALITA’
Si raccomanda l’uso di controlli a titolo noto di ALT. Verificare che il
valore ottenuto sia all’interno degli intervalli di accettabilità forniti. Si
consiglia l’uso di controlli Normale e Patologico come GD-Norm (REF
GD8580 00) e GD-Path (REF GD8582 00).
Far riferimento a Westgard et al. (3) per l’identificazione e la risoluzione
di problematiche legate ai controlli fuori dai limiti.
CALCOLO DEI RISULTATI
Riferirsi all’Application Manual e al Manuale dell’Operatore dello
strumento.
Fattori di Conversione
ALT [U/l] x 0,01667 = ALT [µkat/l].
INTERVALLO DI RIFERIMENTO (1)
Siero:
Uomini: 10 - 60 U/l 0,17 - 1,00 µkat/l
Donne: 8 - 40 U/l 0,13 - 0,67 µkat/l
Si raccomanda ad ogni laboratorio di stabilire i propri valori normali in
funzione della popolazione su cui opera.
PRESTAZIONI ANALITICHE
Precisione
Dati rappresentativi dello studio secondo il protocollo CLSI NCCLS
EP5-A2 sono sotto riportati.
Controllo Livello 1 Livello 2
Numero di Osservazioni N 78* 78*
Numero di Prove N 39 39
Media U/l 60 126
Nella Corsa %CV 1,6 1,1
Totale %CV 2,2 1,7
*Valori fuori limite non inclusi nei calcoli statistici
Linearità
L’intervallo di linearità, stabilito tramite il protocollo CLSI NCCLS EP6-A
è risultato pari a 2 - 387 U/l (0,03 - 6,45 µkat/l).
Limite Minimo di Rivelabilità
Il limite minimo di rilevabilità, stabilito tramite il protocollo CLSI NCCLS
EP17-A, è 2 U/l (0,03 µkat/l).
AMS S.p.A. – Sede Legale e Stabilimento Produzione Diagnostici
Via E. Barsanti 17/A | 00012 Guidonia (Roma) – Italia Via Galileo Galilei, 38 | Seggiano di Pioltello (MI) - Italia
Tel. +39 0774 354441 | Fax +39 0774 578035 Tel. +39 02 929189.1 | Fax +39 02 929189.39
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Comparazione fra Metodi
Studi di correlazione sono stati effettuati secondo il protocollo CLSI
NCCLS EP9-A2. I risultati dei sieri di questo dosaggio su Sat-450 sono
stati confrontati con un sistema analogo presente in commercio. I
risultati sono stati i seguenti: N = 67, y = 0,803x - 0,86 U/l, r = 0,988.
Limitazioni / Sostanze Interferenti
Nessuna interferenza è stata osservata dalle seguenti sostanze fino alla
concentrazione sotto indicata:
Bilirubina > 40 mg/dl
Emoglobina > 150 mg/dl
Trigliceridi > 2000 mg/dl
Acido Ascorbico > 150 mg/dl
Per una panoramica completa sulle sostanze interferenti si rimanda alla
pubblicazione di Young (2) .
PRECAUZIONI E AVVERTENZE
I reagenti contengono componenti inattivi, quali i conservanti (Sodio
azide o altri), tensioattivi ecc. La concentrazione totale di questi
componenti è inferiore ai limiti riportati dalle direttive CEE 67/548/EEC
e 88/379/EEC sulla classificazione, l’imballaggio ed etichettatura delle
sostanze pericolose. Tuttavia i reagenti devono essere trattati con
cautela, evitandone l’ingestione, il contatto con la pelle, gli occhi e le
membrane mucose.
Nell’utilizzo dei reagenti di laboratorio si raccomanda di seguire le
norme di buona pratica di laboratorio.
Gestione dei Rifiuti
Attenersi alle norme locali per quanto riguarda lo smaltimento dei
reagenti.
BIBLIOGRAFIA
1. Besozzi M, De Angelis G., Franzini C: Espressione dei risultati nel laboratorio
di chimica clinica. Società Italiana di Biochimica Clinica (SIBioC).
2. Young D.S., Effects of Drugs on Clinical Laboratory Tests, AACC Press,
Washington, D.C., 1990.
3. Westgard J., and Barry P., Cost- Effective Quality Control: Managing the
Quality and Productivity of Analytical Processes, AACC Press, Washington,
D.C., 1986.
4. Thomas L. Alanine aminotransferase (ALT), Aspartate aminotransferase
(AST). In: Thomas L, editor. Clinical Laboratory Diagnostics. 1st ed.
Frankfurt: TH-Books Verlagsgesellschaft; 1998. p. 55-65.
5. Moss DW, Henderson AR. Clinical enzymology. In: Burtis CA, Ashwood ER,
editors. Tietz Textbook of Clinical Chemistry. 3rd ed. Philadelphia: W.B
Saunders Company; 1999. p. 617-721.
6. The Committee on Enzymes of the Scandinavian Society for Clinical
Chemistry and Clinical Physiology. Recommended methods for the
determination of four enzymes in blood. Scand J Clin Lab Invest 1974;
33:291-306.
7. Penttilä IM, Jokela HA, Viitala AJ, Heikkinen E, Nummi S, Pystynen P et al.:
Activities of aspartate and alanine aminotransferases and alkaline
phosphatase in sera of healthy subjects. Scand J Clin Lab Invest 1975; 35:
275-84.
8. Chitto G, Fabi A, Franzini C, Galletta G, Leonardi A, Marelli M, Morelli AM:
Variabilità biologica intra-individuo: rassegna della letteratura, contributo
sperimentale e considerazioni critiche. Biochimica Clinica, 1994; 18, 10:673.
9. NCCLS Document, “Procedures for the collection of arterial blood specimens”,
Approved Standard, 3rd Ed. (1999).
10. EU-Dir 1999/11 Commission Directive of 8 March 1999 adapting to technical
progress the principles of good laboratory practice as specified in Council
Directive 87/18/EEC.
Met. SA4920 00.0 Ita
Ed. 09/2012