EBV V 22-deu-NEU - virion\serion

Hersteller 

Manufacturer 

Fabricant 

Fabbricante 

Производитель 

Institut Virion\Serion GmbH 

Институт Вирион\Серион ООО 

Friedrich-Bergius-Ring 19 

Кольцевая ул. Фридриха Бергиюса 19 

D - 97076 Würzburg, Germany 

D - 97076 Вюрцбург, Германия 

Telefon/Телефон: +49 (0) 9 31 / 30 45 0 

Fax/Факс: +49 (0) 9 31 / 30 45 100 

E-Mail/Эл. почта: dialog@virion-serion.de 

Internet/Интернет: www.virion-serion.de 

KAL136-1 

SERION ELISA classic Epstein-Barr Virus 

YOUR 

GLOBAL 

PARTNER 

IN 

DIAGNOSTICS 

SERION ELISA classic 

Epstein-Barr Virus VCA IgG/IgM, 

Epstein-Barr Virus EBNA1 IgG, 

Epstein-Barr Virus EA IgG 

Gebrauchsanweisung - Deutsch 

Instructions - English 

Mode d´emploi - Français 

Istruzioni per l´uso - Italiano 

Инструкция по применению – русский язык 

(Version/Versione/версия 22.11/12-1)

Änderung in Kapitel: 


generelle Überarbeitung, 5, 7.2.1 




INHALTSVERZEICHNIS 

1 ANWENDUNGSBEREICH 

2 DIAGNOSTISCHE BEDEUTUNG 

3 TESTPRINZIP SERION ELISA classic 

4 INHALT UND ZUSAMMENSETZUNG 

5 ZUSÄTZLICH BENÖTIGTE MATERIALIEN 

6 LAGERUNG UND HALTBARKEIT 

7 DURCHFÜHRUNG DES SERION ELISA classic 

7.1 Allgemeine Hinweise 

7.2 Probenvorbereitung und Lagerung 

7.3 Reagenzienvorbereitung 

7.4 Übersicht - Testablauf 

7.5 Manuelle Testdurchführung 

7.6 Automatische Testdurchführung 

7.7 Positivkontrolle / Richtigkeitskontrolle 

8 TESTAUSWERTUNG 

8.1 Ein-Punkt-Quantifizierung nach der 4PL-Methode 

8.2 Testgültigkeitskriterien 

8.3 Auswertung SERION ELISA classic EBV VCA IgG/IgM, EBV EBNA1 IgG, EBV EA IgG 

8.4 Quantifizierungsgrenzen 

8.5 Grenzwertbereiche 

8.6 Interpretation der Ergebnisse 

8.7 Referenzbereiche gesunder Probanden 

9 LEISTUNGSMERKMALE 

9.1 Sensitivität und Spezifität 

9.2 Präzision 

10 SICHERHEITSMASSNAHMEN 

10.1 Warnhinweise und Vorsichtsmaßnahmen 

10.2 Entsorgung 

11 LITERATUR 

Aktualisierungen 

Bitte beachten Sie die Änderungen im Vergleich zur Vorversion. 

Versionsnummer: V 22.11/12-1 

Vorhergehende Version: V 21.10/01-1 

vorliegende Version: V 22.11/12-1 

Vorversion: V 21.10/01-1 

DE 

FR EN 

RU IT

Pos: 1 /Arbeitsanl eitung en ELISA classi c/Gültig für nur ein Dokument/U pdate/U pdate: EBV @ 3\mod_1234173447824_6.doc @ 18107 @ 

Pos: 2 /Arbeitsanl eitung en ELISA classi c/Gültig für alle D okumente/ELISA cl assic/Allgemei ne T exte ELISA cl assic/Einl eitung " Enzymimmunoassay" @ 4\mod_1255336385816_6.doc @ 21164 @ 

SERION ELISA classic Epstein-Barr Virus VCA IgG/IgM, 

Epstein-Barr Virus EBNA1 IgG, Epstein-Barr Virus EA IgG 

Enzymimmunoassay zur Bestimmung von humanen Antikörpern 

deutsch 2 

für die in vitro-Diagnostik 

Pos: 3 /Arbeitsanl eitung en ELISA classi c/Gültig für nur ein Dokument/Bestell nummern/EBV: Bestellnummern @ 0\mod_1188368235293_6.doc @ 6488 @ 

SERION ELISA classic Epstein-Barr Virus VCA IgG Best.-Nr.: ESR1361G 

SERION ELISA classic Epstein-Barr Virus VCA IgM Best.-Nr.: ESR1361M 

SERION ELISA classic Epstein-Barr Virus EBNA1 IgG Best.-Nr.: ESR1362G 

SERION ELISA classic Epstein-Barr Virus EA IgG Best.-Nr.: ESR1363G 

Pos: 4 /Arbeitsanl eitung en ELISA classi c/Gültig für alle D okumente/ELISA cl assic/Allgemei ne T exte ELISA cl assic/Kapitelüberschrift " Anwendungsber eich" @ 0\mod_1177351044007_6.doc @ 168 @ 

1 ANWENDUNGSBEREICH 

Pos: 5 /Arbeitsanl eitung en ELISA classi c/Gültig für nur ein Dokument/Anwendungsber eich/EBV: Anwendungsbereich @ 5\mod_1255684789489_6.doc @ 22510 @ 

Die SERION ELISA classic Epstein-Barr Virus EA IgG, VCA IgG bzw. IgM und EBNA1 IgG 

sind qualitative und quantitative Immunoassays für den Nachweis von humanen 

Antikörpern in Serum oder Plasma gegen Komponenten des Epstein-Barr Virus (EBV). 

Der SERION ELISA classic EBV EA IgG und der SERION ELISA classic EBV VCA IgM 

dienen zur Erfassung akuter Infektionen und Reaktivierungen. Der SERION ELISA classic 

EBV VCA IgG wird zur Diagnose von Primärinfektionen und zurückliegenden Infektionen 

eingesetzt. Der SERION ELISA classic EBV EBNA1 IgG dient ausschließlich zum 

Nachweis zurückliegender Infektionen. 

Pos: 6 /Arbeitsanl eitung en ELISA classi c/Gültig für alle D okumente/ELISA cl assic/Allgemei ne T exte ELISA cl assic/Kapitelüberschrift "Diag nostische Bedeutung" @ 0\mod_1177351537598_6.doc @ 219 @ 

2 DIAGNOSTISCHE BEDEUTUNG 

Pos: 7 /Arbeitsanl eitung en ELISA classi c/Gültig für nur ein Dokument/Di agnostische Bedeutung/EBV: Diagnostische Bedeutung @ 5\mod_1255684890893_6.doc @ 22526 @ 

Das Epstein-Barr Virus (EBV) ist ein humanpathogenes DNA-Virus aus der Familie der 

Herpesviren. Es ist weltweit verbreitet. Wie bei allen Herpesviren ist die 

Durchseuchungsrate sehr hoch und liegt bei Erwachsenen zwischen 90 und 95 %. In den 

so genannten Entwicklungsländern erfolgt die Primärinfektion in den ersten Lebensjahren 

und verläuft häufig subklinisch. Im Gegensatz dazu ist in Ländern mit guten hygienischen 

Verhältnissen die Primärinfektion zeitlich verzögert. Sie trifft vor allem Teenager und junge 

Erwachsene. Die altersbezogene Spitze der Primärinfektionen ist bei 15- bis 20-jährigen 

zu verzeichnen. Ca. 50 % der Infizierten entwickeln dann das Krankheitsbild der 

Infektiösen Mononukleose. Die Übertragung erfolgt hauptsächlich über den Speichel 

infizierter Personen. Infektionen über Blutprodukte und Knochenmarktransplantate sind 

weniger häufig. 

Im Rahmen der Primärinfektion werden zunächst die Speicheldrüsen infiziert. Über den 

Speichel gelangen die Viren dann in die Zellen des Nasen-Rachenraums. Die Krankheit 

äußert sich in diesem Stadium mit grippeähnlichen Symptomen. Durch nachfolgende 

Infektion der B-Lymphozyten wird das Virus im Körper verbreitet. Die B-Lymphozyten 

werden durch das Virus zur Proliferation stimuliert, die aber vom Immunsystem in der 

Regel kontrolliert wird. Die infizierten B-Zellen lassen sich als charakteristische atypische 

Lymphozyten im peripheren Blut nachweisen. Diese Zellen haben eine variable Form mit 

auffälligem basophilen Zytoplasma und deutlich sichtbaren Zellkernen. Im weiteren Verlauf 

der Erkrankung kann es zu hohem Fieber, Splenomegalie, Lymphadenitis, Thrombozytopenie 

und Hepatitis kommen. Wegen der Verbreitungsart des Virus vor allem durch

den Speichel, wurde dem Krankheitsbild der Primärinfektion, der Infektiösen Mononukleose 

(IM, bzw. Pfeiffersches Drüsenfieber), auch die Bezeichnung Kissing disease 

gegeben. 

In seltenen Fällen kann eine akute Infektiöse Mononukleose in eine chronisch aktive 

Infektion übergehen. Hierbei bleiben die Symptome der Infektiösen Mononukleose über 

längere Zeit erhalten. Die Pathogenese dieser Erkrankung ist noch weitgehend ungeklärt. 

Als mögliche Ursachen werden genetische Disposition und / oder die Infektion mit stark 

lytischen Virusstämmen diskutiert. 

Ein weiteres seltenes Krankheitsbild stellt die chronische Mononukleose dar. Im 

Gegensatz zur chronisch aktiven Infektion werden hier nach dem Abklingen der 

Primärinfektion Reaktivierungen nach zum Teil langen Jahren der Latenz beobachtet, 

welche teilweise tödliche Verläufe zeigen. Auch in diesen Fällen wurden die Ursachen 

noch nicht geklärt. 

Bei einigen genetisch bedingten Defekten kann das Immunsystem die EBV-Infektion nicht 

mehr kontrollieren, wodurch es zur Entwicklung einer chronischen Infektion kommt. Dies 

konnte für das XLPS (x-linked lymphoproliferative Syndrom) gezeigt werden. 

Bei medikamentöser Herabsetzung der Immunkompetenz, wie dies z. B. im Rahmen einer 

Transplantation geschieht, kann es zu Reaktivierungen oder erleichterten 

Primärinfektionen kommen, was dann teilweise zu EBV-induzierten Transplantatabstoßungen 

führen kann. Auch AIDS-Patienten sind durch die eingeschränkte 

Immunabwehr vermehrt von EBV-Reaktivierungen oder Primärinfektionen betroffen. 

In bestimmten Regionen ist das Epstein-Barr Virus eng mit dem Auftreten des 

Nasopharynxkarzinoms korreliert. Dieser Tumor des Hals-Nasen-Rachenraums besteht 

aus undifferenzierten Epithelzellen und hat stark metastasierende Eigenschaften. Die 

Erkrankung ist weltweit verbreitet, kommt aber gehäuft in bestimmten Regionen Südchinas 

vor. Neben genetischer Disposition werden auch Umwelteinflüsse, wie z. B. 

Ernährungsgewohnheiten, als Kofaktoren diskutiert. 

Ein weiterer Tumor, das Burkitt-Lymphom (BL), ist mit dem Epstein-Barr Virus korreliert. 

Dieser monoklonale B-Zelltumor tritt gehäuft in Afrika und Papua Neu Guinea v. a. in 

Regionen mit einer hohen Malariarate auf. In über 90 % dieser Lymphome wird das 

Epstein-Barr Virus nachgewiesen. Da Plasmodium-Infektionen einen Einfluss auf die 

Immunantwort nehmen, wird die Malaria als Kofaktor zur Entstehung des Burkitt- 

Lymphoms diskutiert. Sporadisch kann das BL auch in anderen Teilen der Welt auftreten. 

In diesen Fällen wird das Virus aber deutlich seltener in den Tumoren nachgewiesen, so 

dass weitere Kofaktoren (z. B. genetische Veränderungen durch 

Chromosomentranslokation) zur Ausbildung des Lymphoms zu vermuten sind. 

Die Antikörperantwort nach EBV-Infektion fällt auf Grund der Komplexität der Viren und 

der Variabilität der verschiedenen Infektionsphasen sehr heterogen aus. In der aktiven 

Phase der Primärinfektion werden Antikörper gegen ca. 100 verschiedene Antigene 

gebildet, in der Spätphase (Latenzphase) dann noch gegen ca. 10 Proteine (EBNA1-6, 

Late Membrane Proteins 1-3). Vor diesem Hintergrund wurden in den letzten Jahren 

zunehmend Antikörpernachweise konzipiert, die nicht wie bisher mit dem Gesamtvirus- 


DE

Antigen geführt werden, sondern einzelne Komponenten / Proteine des Epstein-Barr Virus 

verwenden. Somit ist es möglich, das Auftreten von Antikörpern gegen bestimmte 

Antigene des Epstein-Barr Virus mit der Phase und Progression der EBV-Infektion zu 

korrelieren. 

VCA IgM 

Abbildung 1: Antikörperverlauf nach einer EBV-Infektion. 

Quelle: http://www.viomecum.ch/de/konz/Infektiologie/393-394_EBV.html. 

Abbildung 1 zeigt den typischen Antikörperverlauf nach einer EBV-Infektion. Gleich nach 

der Übertragung des Epstein-Barr Virus werden im Körper des Patienten IgM Antikörper 

gegen Early Antigen (EA) gebildet. Die maximale Antikörperkonzentration wird ungefähr 

mit Auftreten der Symptome beobachtet. Etwa zwei Wochen nach der Übertragung 

beginnt die Produktion der EA IgG, VCA (Virus Capsid Antigen) IgM und VCA IgG 

Antikörper. Die größte VCA IgM Antikörperkonzentration ist dann etwa drei Wochen nach 

Beginn der Symptome zu finden. EA IgG Antikörper werden oft über einen längeren 

Zeitraum nach der Infektion nachgewiesen. Danach sinken die Konzentrationen der VCA 

IgM und später der EA IgG Antikörper wieder ab. Die VCA IgG Antikörper erreichen etwa 

sechs Wochen nach Beginn der Symptome ihre Maximalkonzentration, die lebenslang auf 

diesem hohen Niveau bestehen bleibt. Etwa drei Wochen nach Beginn der Symptome 

beginnt die Bildung der EBNA1 IgG Antikörper, die zum Nachweis einer abgelaufenen 

EBV-Infektion dienen. Diese erreichen nach etwa sieben Monaten ihren Maximalwert. Die 

EBNA1 IgG Antikörperkonzentration bleibt beim normalen Verlauf einer EBV-Infektion 

lebenslang auf hohem Niveau. Bei Reaktivierungen, z. B. durch Immunsupressionen, 

steigt der Titer von EA IgG Antikörpern in den meisten Fällen stark an, während der Titer 

von VCA IgM meist nicht ansteigt. Nur in seltenen Fällen kann es nach Immunsuppression 

zum Verlust der EBNA1 IgG Antikörper kommen, so dass EA IgG ein sehr guter Marker für 

Reaktivierungen ist. 

deutsch 4

Pos: 8 /Arbeitsanleitungen ELISA classic/Gültig für alle Dokumente/ELISA 

classic/Testprinzip/Testprinzip ELISA classic @ 4\mod_1255342796551_6.doc @ 21207 @ 

3 TESTPRINZIP SERION ELISA classic 

Der ELISA (Enzyme Linked Immunosorbent Assay) ist ein immunologisches Verfahren, 

das sich insbesondere in der Infektionsserologie zur Erfassung von Antikörpern bewährt 

hat. Die Nachweisreaktion basiert auf der spezifischen Interaktion von Antikörpern und 

Antigenen. Zu diesem Zweck wurden die Teststreifen der Mikrotiterplatten des SERION 

ELISA classic mit spezifischen Antigenen von Infektionserregern zur Bindung der in der 

Patientenprobe vorhandenen Antikörper beschichtet. Weitere, mit Alkalischer 

Phosphatase markierte Sekundärantikörper detektieren die so gebildeten Immunkomplexe. 

Das Enzym katalysiert eine Reaktion, in deren Verlauf das farblose Substrat 

p-Nitrophenylphosphat in das farbige Produkt p-Nitrophenol umgewandelt wird. Die 

Signalstärke des Reaktionsprodukts ist proportional zur Antikörperkonzentration in der 

Probe und wird photometrisch erfasst. 

Pos: 9 /Arbeitsanleitungen ELISA classic/Gültig für nur ein Dokument/Inhalt und 

Zusammensetzung/EBV: Inhalt und Zusammensetzung @ 8\mod_1261062632666_6.doc 

@ 28075 @ 


DE

4 INHALT UND ZUSAMMENSETZUNG 

Testkomponenten Stück / 

Volumen 

Brechbare Mikrotiterstreifen mit je acht antigenbeschichteten Einzelkavitäten 

(insg. 96) MTP , 

1 Testrahmen. 

Das Beschichtungsmaterial ist inaktiviert. 

Standardserum (gebrauchsfertig) STD , 

Humanserum in proteinhaltigem Phosphatpuffer; 

negativ getestet für anti-HIV-Ak, HBs-Ag (Hepatitis B-Virus-surface Antigen) 

und anti-HCV-Ak; 

Konservierungsmittel: < 0,1 % Natriumazid; 

Farbstoff: Amaranth O. 

Negatives Kontrollserum (gebrauchsfertig) NEG , 

Humanserum in proteinhaltigem Phosphatpuffer; 

negativ getestet für anti-HIV-Ak, HBs-Ag (Hepatitis B-Virus-surface Antigen) 

und anti-HCV-Ak; 

Konservierungsmittel: < 0,1 % Natriumazid; 

Farbstoff: Lissamin-Grün V. 

Anti-Human IgA, IgG oder IgM Konjugat (gebrauchsfertig) APC , 

Gegen humanes IgG, IgA oder IgM gerichteter, polyklonaler Antikörper, 

konjugiert mit Alkalischer Phosphatase, stabilisiert in proteinhaltiger Lösung; 

Konservierungsmittel: 0,01 % Methylisothiazolon und 0,01 % Bromnitrodioxan. 

Waschlösungskonzentrat (ausreichend für 1000 ml) WASH , 

Natriumchlorid Lösung mit Tween 20 und 30 mM Tris/HCl, pH 7,4; 

Konservierungsmittel: < 0,1 % Natriumazid. 

Verdünnungspuffer DILB oder spezieller Verdünnungspuffer S1 DILBS1 

(Spezieller Verdünnungspuffer für SERION ELISA classic EBV EA IgG. 

Unmittelbar vor Gebrauch schütteln!) 

Phosphatpuffer mit Protein, Tween 20 (DILB) und Lysat von E. coli; (DILBS1); 

Konservierungsmittel: < 0,1% Natriumazid; 

Farbstoff: 0,01 g/l Bromphenolblau Natrium-Salz. 

Stopplösung STOP , 

1,2 N Natronlauge. 

Substrat (gebrauchsfertig) pNPP , 

Para-Nitrophenylphosphat in lösungsmittelfreiem Puffer; 

Konservierungsmittel: < 0,1 % Natriumazid. 

(Eine leichte Gelbfärbung des ungeöffneten Substrats ist möglich. 

Hieraus ergibt sich keine Qualitätsminderung!) 

Qualitätskontrollzertifikat mit Standardkurve und Wertetabelle INFO , 

(Quantifizierung der Antikörper in IU/ml bzw. U/ml). 

Pos: 10 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für mehrer e D okumente/Z usätzlich benötigte M aterialien/Z 200 Zusätzlich benötigte M aterialien (für T este mit IgM-Nachweis) @ 5\mod_1255348816988_6.doc @ 21463 @ 


12 Stück 

2 x 2 ml 

2 ml 

13 ml 

33,3 ml 

2 x 50 ml 

15 ml 

13 ml 

2 Seiten

5 ZUSÄTZLICH BENÖTIGTE MATERIALIEN 

- Übliche Laborausrüstung 

- Für den IgM Nachweis: SERION Rf-Absorbens (Best. Nr. Z200 (20 ml)) 

- Spektralphotometer für Mikrotiterplatten mit Filter, Wellenlänge 405 nm, 

empfohlene Referenzwellenlänge im Bereich von 620 nm - 690 nm (z. B. 650 nm) 

- Inkubator 37 °C 

- feuchte Kammer 

- Aqua dest. 

- Click-Clips (Best.-Nr. VT120) 

Pos: 11 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für all e D okumente/ELISA classic/Lag erung und Hal tbar kei t/Lager ung und Haltbar keit @ 4\mod_1255343176800_6.doc @ 21239 @ 


DE

6 LAGERUNG UND HALTBARKEIT 

Reagenz Lagerung Haltbarkeit 

Mikrotiterstreifen 

(mit Antigen 

beschichtet) 

Kontrollseren / 

Standardseren 

ungeöffnet 

nach Anbruch bei 2 – 8 °C in Gegenwart von 

Trockenmittel und wieder verschlossen gelagert 

Die unbenutzten Kavitäten sollen trocken und 

luftdicht im verschlossenen Aluminiumbeutel 

gelagert werden. 

nach Anbruch bei 2 – 8 °C 

Konjugat Gebrauchsfertige Lösung bei 2 – 8 °C 

Verdünnungspuffer ungeöffnet 

Kontaminationen sind u. a. durch den Gebrauch 

steriler Pipettenspitzen unbedingt zu vermeiden. 

nach Anbruch bei 2 – 8 °C 

Eingetrübte Lösungen bitte verwerfen. 

Waschlösung Konzentrat nach Anbruch bei 2 – 8 °C 

Gebrauchsverdünnung bei 2 – 8 °C 


Gebrauchsverdünnung bei Raumtemperatur 

Behälter für Gebrauchsverdünnung regelmäßig 

reinigen! Eingetrübte Lösungen bitte verwerfen. 

Substrat gebrauchsfertige Lösung bei 2 – 8 °C, 

lichtgeschützt gelagert 

Kontaminationen sind u. a. durch den Gebrauch 

steriler Pipettenspitzen unbedingt zu vermeiden. 

Bei stärkerer Gelbfärbung (Extinktion gegen 

Aqua dest. > 0,25 OD) bitte verwerfen. 

bis Verfallsdatum; 

Mindesthaltbarkeit: 

4 Wochen; 

Haltbarkeit bei 

sachgerechter 

Lagerung: bis zum 

Verfallsdatum 


24 Monate ab 

Herstellungsdatum 


28 Monate ab 



36 Monate ab 


24 Monate 


2 Wochen; 

1 Woche 


36 Monate ab 


Stopplösung nach Öffnung bei Raumtemperatur bis Verfallsdatum 


classic/Testdurchführung/Überschrift: Durchführung @ 0\mod_1184679699953_6.doc @ 

2472 @

7 DURCHFÜHRUNG DES SERION ELISA classic 

Pos: 13 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für all e D okumente/ELISA classic/T estdurchführung/Allgemeine Hi nweise ELISA cl assic @ 4\mod_1255343318159_6.doc @ 21255 @ 

7.1 Allgemeine Hinweise 

Für die sachgemäße Anwendung der SERION ELISA classic sind ausschließlich die 

SERION ELISA classic Komponenten zu verwenden. Letztere können nicht durch 

Reagenzien anderer Hersteller ersetzt werden. Die Standard- und Kontrollseren der 

SERION ELISA classic sind chargenspezifisch für jeden Testkit optimal eingestellt und 

können nicht in anderen Chargen eingesetzt werden. Verdünnungspuffer, Waschlösung, 

Substratlösung und Stopplösung können mit allen SERION ELISA classic chargen- und 

kitunabhängig angewendet werden. 

Für jede Immunglobulinklasse gibt es drei verschiedene Konjugatkonzentrationen: 

NIEDRIG-, MITTEL- und HOCH-KONZENTRIERT. Die Einstufung der Konjugate erfolgt 

durch folgende Kennzeichnung auf dem Etikett: 

z.B. IgG + niedrig-konzentriertes IgG Konjugat 

IgG ++ mittel-konzentriertes IgG Konjugat 

IgG +++ hoch-konzentriertes IgG Konjugat 

Um die hohe Qualität unserer SERION ELISA classic zu gewährleisten, ist in seltenen 

Fällen der Einsatz von Sonderkonjugaten notwendig. Diese haben eine Sondercharge und 

sind nicht mit Symbol "+" gekennzeichnet. Sonderkonjugate sind nicht gegen andere 

Konjugate austauschbar. 

Bitte beachten Sie immer die Beschriftung der Etiketten! 

Unter Voraussetzung einer sachgerechten Lagerung sind alle Komponenten des SERION 

ELISA classic ungeöffnet bis zum angegebenen Verfallsdatum (siehe Etikett) verwendbar. 

Die Reagenzien sollen nicht über das Verfallsdatum hinaus benutzt werden. 

Die unsachgemäße Verdünnung der Reagenzien kann zum Verlust an 

Nachweisempfindlichkeit führen. 

Die Testreagenzien sollen während der Lagerung und Inkubation vor hellem Licht 

geschützt werden. Nach Gebrauch sind die Komponenten gut zu verschließen, um deren 

Austrocknung und Kontamination zu vermeiden. 

Der Verschlussbeutel für die Kavitäten der Mikrotiterplatte soll nur an der Schweißnaht 

aufgeschnitten werden, um ein Wiederverschließen zu gewährleisten. Bei Beschädigung 

sowie nach unsachgemäßem Verschließen des Verschlussbeutels zur Aufbewahrung der 

nicht benutzten Kavitäten sollen die Mikrotiterstreifen nicht mehr verwendet werden. 

Um Kontamination zu vermeiden, sollten immer aseptische Techniken zur Entnahme von 

Reagenzienaliquots angewendet werden. Zur Vermeidung verfälschter Ergebnisse darf die 

Pipettenspitze bei der Konjugatpipettierung keinesfalls den oberen Rand der Kavitäten 

berühren und benetzen. Beim Verschließen der Fläschchen ist darauf zu achten, wieder 

den entsprechenden, zur Flasche gehörenden Deckel einzusetzen. 


DE

Die Reproduzierbarkeit der Ergebnisse ist u. a. von der sorgfältigen Mischung der 

angesetzten Reagenzien abhängig. Aus diesem Grund sollen die Behältnisse von 

Kontrollseren und Konjugaten vor Entnahme gut geschüttelt werden. Auch die 

Probenverdünnungen sollen vor dem ersten Pipettierschritt mit einem Monomixer (z. B. 

Vortex) gut durchmischt werden. 

Weiterhin ist auf eine sorgfältige Pipettierung und die Einhaltung der vorgegebenen 

Inkubationszeiten und -temperaturen zu achten. Große Zeitdifferenzen zwischen der 

Pipettierung der ersten und der letzten Kavität bei der Zugabe von Proben- und 

Kontrollseren, Konjugat und Substrat führen zu unterschiedlichen Inkubationszeiten, 

welche die Präzision und Reproduzierbarkeit der Messwerte beeinflussen können. 

Nur die strikte Einhaltung der Arbeitsvorschrift gewährleistet korrekte Ergebnisse. 

Der SERION ELISA classic kann nur ausgewertet werden, wenn die chargenspezifischen 

Validitätswerte des im Kit enthaltenen Qualitätskontrollzertifikates erfüllt wurden. 

Korrektes Waschen verhindert Testunspezifitäten. Aus diesem Grund sollten die 

Gebrauchsanleitungen der verwendeten Waschgeräte befolgt werden. Wichtig sind die 

gleichmäßige Befüllung der Kavitäten der Flachbodenplatten mit Waschlösung und deren 

vollständige Entfernung, um unkontrollierbare Verdünnungseffekte auszuschließen. 

Schaumbildung ist in jedem Fall zu vermeiden! 

Die Beschriftung der Mikrotiterstreifen mit Kürzeln von Erreger und Antikörperklasse sollte 

nicht zerkratzt werden, um ein Verwechseln zu vermeiden. 

Pos: 14 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für mehrer e D okumente/T estdurchführ ung/Probenvor ber. und Lager ung (für ALLE Err eger auß er Borreli a, CM V, FSM E, H SV,Masern,Mumps,R öteln,VZ V) @ 8\mod_1263998040982_6.doc @ 28428 @ 

7.2 Probenvorbereitung und Lagerung 

Lipämische, hämolytische sowie ikterische Proben (Serum oder Plasma) sollten nur unter 

Vorbehalt eingesetzt werden. Bakteriell kontaminierte Proben sollten nicht verwendet 

werden. Geeignete Untersuchungsmaterialien sind nach Standardlabortechniken 

gewonnene Seren oder Plasmen (EDTA, Citrat, Heparin). Die Proben dürfen nicht 

thermisch inaktiviert werden. 

classic/Testdurchführung/Kapitelüberschrift 0\mod_1184679414434_6.doc Pos: 15 /Arbeitsanleitungen ELISA @ 2312 classic/Gültig @ 

Probenverdünnung für alle Dokumente/ELISA 

@ 


7.2.1 Probenverdünnung 

Vor Testbeginn die Proben (V1) in Verdünnungspuffer (V2) verdünnen: 

Pos: 16 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für nur ein D okument/Testdurchführ ung/Probenverdünnung/EBV: Pr obenver dünnung, T eil 1 @ 5\mod_1256050091616_6.doc @ 22817 @ 

SERION ELISA classic Epstein-Barr Virus EA IgG 

(spezieller Verdünnungspuffer B231-S1!) 

SERION ELISA classic Epstein-Barr Virus VCA IgG (Verdünnungspuffer B231) 

SERION ELISA classic Epstein-Barr Virus EBNA1 IgG (Verdünnungspuffer B231) 

Der Verdünnungspuffer des SERION ELISA classic EBV EA IgG (B231-S1) ist nicht gegen 

die Verdünnungspuffer der SERION ELISA classic EBV VCA bzw. EBNA1 austauschbar. 

V1 + V2 = 1 + 100 je 10 µl Patientenprobe 


zu je 1000 µl Verdünnungspuffer 

Pos: 17 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für all e D okumente/ELISA classic/T estdurchführung/Pr obenver dünnung: Mischung der Proben @ 4\mod_1255343607624_6.doc @ 21287 @ 

Nach jeder Verdünnung und vor dem Pipettierschritt sollten die Proben mit einem 

Monomixer (z. B. Vortex) gut durchmischt werden, um eine homogene Lösung 

herzustellen. 

Pos: 18 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für nur ein D okument/Testdurchführ ung/Probenverdünnung/EBV: Pr obenver dünnung, T eil 2 Ü berschrift @ 0\mod_1188369220721_6.doc @ 6548 @ 

SERION ELISA classic Epstein-Barr Virus VCA IgM 

Pos: Dokumente/Testdurchführung/Probenverdünnung: mit IgM-Nachweis) 19 /Arbeitsanleitungen @ 0\mod_1184684696270_6.doc ELISA classic/Gültig für @ Rheumafaktor-Interferenz mehrere 2765 @ 

(für Tests 

Rheumafaktor-Interferenz 

Rheumafaktor-Antikörper sind vorwiegend Autoantikörper der IgM Klasse, die bevorzugt 

an IgG Immunkomplexe binden. Der spezifische Nachweis von IgM Antikörpern kann 

durch diese Rheumafaktoren zu falsch-positiven Ergebnissen führen. Ferner besteht die 

Möglichkeit, dass bindungsschwächere erregerspezifische IgM Antikörper durch 

bindungsstärkere IgG Antikörper verdrängt werden. Ein IgM Nachweis kann dann falschnegativ 

ausfallen. Aus diesem Grund ist es erforderlich, die Proben für die IgM 

Bestimmung mit Rheumafaktor-Absorbens vorzubehandeln. (SERION Rf-Absorbens, 

Best.-Nr. Z200 (20 ml/100 Bestimmungen)). Die Rf-Absorption erfolgt durch Inkubation der 

Patientenprobe im Rf-Verdünnungspuffer über 15 Minuten bei Raumtemperatur oder über 

Nacht bei 4° C. Die Anwendung ist in einer speziellen Arbeitsanleitung beschrieben. 

Pos: 20 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für nur ein D okument/Testdurchführ ung/Probenverdünnung/EBV: Pr obenver dünnung T eil 3 @ 5\mod_1256050082945_6.doc @ 22801 @ 

DE

Zunächst erfolgt eine 1+4 Verdünnung von Rheumafaktor-Absorbens (V1) mit 

Verdünnungspuffer (V2). 

V1 + V2 = V3 (1 + 4) je 200 µl Rf-Absorbens 


zu je 800 µl Verdünnungspuffer 

Nun werden die Patientenproben (V4) in diesem Rf-Verdünnungspuffer (V3) verdünnt: 

V4 + V3 = 1+100 je 10 µl Patientenserum 

zu je 1000 µl Rf-Verdünnungspuffer 


Nach jeder Verdünnung und vor dem Pipettierschritt sollten die Proben mit einem 

Monomixer (z. B. Vortex) gut durchmischt werden, um eine homogene Lösung 

herzustellen. 

Pos: 22 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für all e D okumente/ELISA classic/T estdurchführung/Pr obenlager ung @ 4\mod_1255343526141_6.doc @ 21271 @ 

7.2.2 Probenlagerung 

Die Patientenproben sollten nicht länger als 7 Tage bei 2 – 8 °C aufbewahrt werden. Eine 

längere Lagerung der Proben ist bei ≤ -20 °C möglich. Mehrmaliges Auftauen und 

Wiedereinfrieren soll vermieden werden. Verdünnte Proben können bei 2 – 8 °C eine 

Woche aufbewahrt werden. 

Pos: 23 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für all e D okumente/ELISA classic/T estdurchführung/Reagenzienvorberei tung, T eil 1 @ 4\mod_1255343795606_6.doc @ 21303 @

7.3 Reagenzienvorbereitung 

Alle Testreagenzien müssen vor dem Testansatz auf Raumtemperatur erwärmt 

werden. 

7.3.1 Mikrotiterstreifen 

Die Teststreifen bzw. Kavitäten sind zusammen mit einem Trockenmittel verpackt. 

Nicht benötigte Teststreifen bzw. Kavitäten sollten wieder mit dem Trockenmittel im 

Aluminiumbeutel luftdicht eingeschlossen werden. 

7.3.2 Kontrollseren / Standardseren 

Kontroll- und Standardseren sind gebrauchsfertig und müssen nicht verdünnt 

werden. Bei jedem Testlauf müssen unabhängig von der Anzahl der eingesetzten 

Teststreifen Kontrollseren in Einfach-, Standardseren in Doppelbestimmung 

mitgeführt werden. 

Pos: 24 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für mehrer e D okumente/T estdurchführ ung/R eagenzienvorbereitung: Rf- Absorbens (für T este mit IgM-Nachweis) @ 0\mod_1184741119299_6.doc @ 2868 @ 

Kontrollseren nicht mit Rheumafaktor-Absorbens behandeln! 

Pos: 25 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für all e D okumente/ELISA classic/T estdurchführung/Reagenzienvorberei tung, T eil 2 @ 4\mod_1255343884183_6.doc @ 21319 @ 

7.3.3 Anti-Human IgA, IgG bzw. IgM AP-Konjugat (gebrauchsfertig) 

Konjugate sind innerhalb der jeweiligen Konjugatkonzentration und 

Immunglobulinklasse austauschbar. Kontaminationen der gebrauchsfertigen 

Konjugate sind u. a. durch den Gebrauch steriler Pipettenspitzen unbedingt zu 

vermeiden. 

7.3.4 Waschlösung 

Das Waschlösungskonzentrat (V1) ist im Verhältnis 1:30 mit Aqua dest. auf ein 

Endvolumen (V2) zu verdünnen. 

Beispiel: 

Waschlösungskonzentrat (V1) Endvolumen (V2) 


33,3 ml 1000 ml 

1,0 ml 30 ml 

7.3.5 Verdünnungspuffer für Proben (gebrauchsfertig) 

Spezieller Verdünnungspuffer für SERION ELISA classic EBV EA IgG. 

7.3.6 Substrat (gebrauchsfertig) 

Kontaminationen der gebrauchsfertigen Substratlösung sind u. a. durch den 

Gebrauch steriler Pipettenspitzen unbedingt zu vermeiden. 

7.3.7 Stopplösung (gebrauchsfertig) 

DE


classic/Testdurchführung/Testablauf/Überschrift Testablauf @ 

0\mod_1180955922843_6.doc @ 732 @ 

7.4 Übersicht - Testablauf 

Pos: 27 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für nur ein D okument/Testdurchführ ung/T establauf/EBV: T establ auf @ 5\mod_1256047227345_6.doc @ 22673 @ 


Epstein-Barr Virus EA IgG, VCA IgG/IgM, EBNA1 IgG 

quantitativ 

Für den IgM Nachweis mit den Proben eine Rf-Absorption durchführen, siehe Punkt 7.2.1.; 

Inkubation 15 Minuten bei Raumtemperatur oder über Nacht bei 4°C. 

Pos: 28 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für all e D okumente/ELISA classic/T estdurchführung/Testabl auf/T establ auf @ 4\mod_1255347017982_6.doc @ 21335 @ 


Probenverdünnung 1 

(Patientenproben) 

1 + 100 

Zugabe der verdünnten Proben und der 

gebrauchsfertigen Kontroll-/ Standardseren (100 µl) 

 

INKUBATION 60 Min./ 37 °C 

feuchte Kammer 

 

WASCHEN (4 x 300 µl DIL WASH )² 

 

Zugabe der Konjugatlösung APC (100 µl) 

 



 

WASCHEN (4 x 300 µl DIL WASH )² 

 

Zugabe der Substratlösung pNPP (100 µl) 

 



 

Zugabe der Stopplösung STOP (100 µl) 

 

EXTINKTIONSMESSUNG bei 405 nm 

1 Sonderverdünnungspuffer bei folgenden SERION ELISA classic: 

Borrelia burgdorferi IgG, IgM, EBV EA IgG, Parvovirus B19 IgM sowie Hantavirus Puumala IgG, IgM. 

Pos: 29 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für mehrer e D okumente/T estdurchführ ung/M anuelle Testdurchführ ung (für ALLE Erreg er auß er C oxiella) @ 5\mod_1255349441824_6.doc @ 21510 @ 

²Bei manueller Abarbeitung: 

Platte nach dem Waschvorgang auf Papiertüchern gründlich ausklopfen.

7.5 Manuelle Testdurchführung 

1. Erforderliche Anzahl Kavitäten in den Testrahmen einsetzen und Protokollblatt 

anlegen. 

2. Je 100 µl der verdünnten Proben bzw. der gebrauchsfertigen Kontrollen in die 

benötigten Kavitäten der Teststreifen pipettieren. Eine Kavität für den 

Substratleerwert freilassen, z. B.: 

IgA/IgG/IgM quantitativ 

Antigen-Kavitäten 

Kavität A1 Substratleerwert 

Kavität B1 Negative Kontrolle 

Kavität C1 Standardserum 

Kavität D1 Standardserum 

Kavität E1 Patient 1.... 

3. Probeninkubation für 60 Minuten (+/- 5 Min) bei 37 °C (+/- 1 °C) in der feuchten 

Kammer. 

4. Am Ende der Inkubationszeit die Kavitäten waschen (mit Waschgerät oder 

manuell): 

- Inkubationsflüssigkeit aus den Kavitäten absaugen oder ausschütten 

- in jede Kavität 300 µl Waschlösung füllen 

- Waschlösung absaugen oder ausschütten 

- Vorgang 3 x wiederholen (also insgesamt 4 x waschen) 

- die Platte auf Papiertüchern ausklopfen 

5. Konjugatzugabe 

100 µl des gebrauchsfertigen IgA/IgG/IgM Konjugates in die entsprechenden 

Kavitäten pipettieren (ohne Substratleerwert). 

6. Konjugatinkubation für 30 Minuten (+/- 1 Min)* bei 37 °C (+/- 1 °C) in der feuchten 

Kammer. 

7. Am Ende der Inkubationszeit die Kavitäten waschen (wie oben). 

8. Substratzugabe 

Je 100 µl gebrauchsfertige Substratlösung in alle Kavitäten (auch Substratleerwert) 

pipettieren. 

9. Substratinkubation für 30 Minuten (+/- 1 Min)* bei 37 °C (+/- 1 °C) in der feuchten 

Kammer. 

10. Stoppen der Reaktion 

Je 100 µl Stopplösung in alle Kavitäten pipettieren, Mikrotiterplatte zum Mischen 

leicht schütteln. 

11. Extinktionsmessung 

Innerhalb 60 Minuten bei 405 nm gegen den Substratleerwert messen, 

Referenzwellenlänge im Bereich zwischen 620 nm und 690 nm (z. B. 650 nm). 

_____________________ 

* Bitte beachten Sie, dass unter speziellen Arbeitsbedingungen laborinterne Anpassungen 

der Inkubationszeiten notwendig sein können. 

Pos: 30 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für all e D okumente/ELISA classic/T estdurchführung/Automatische Testdurchführung @ 5\mod_1255350306938_6.doc @ 21541 @ 


DE

7.6 Automatische Testdurchführung 

Die SERION ELISA sind validiert für die Anwendung auf Immunomat TM sowie auf DYNEX 

DSX ® und DS2 ® und geeignet für die Anwendung auf baugleichen Automaten. Die 

automatische Prozessierung erfolgt analog zur manuellen Bearbeitung. Bitte beachten Sie, 

dass unter speziellen Arbeitsbedingungen laborinterne Anpassungen der Substratinkubationszeiten 

notwendig sein können. 

Pos: 31 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für all e D okumente/ELISA classic/T estdurchführung/Positi vkontroll e / Richtigkeitskontroll e @ 8\mod_1260286311409_6.doc @ 27528 @ 

7.7 Positivkontrolle / Richtigkeitskontrolle 

Zur periodischen Überprüfung der Untersuchungsmethode im Rahmen des laborinternen 

Qualitätsmanagements empfehlen wir die Anwendung unserer SERION ELISA control. 

Die Positivkontrollen dienen als Richtigkeitskontrollen sowie zur Überprüfung der Präzision 

der angewandten Methode. Der Gebrauch ist in einer separaten Arbeitsanleitung 

beschrieben. 

Pos: 32 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für all e D okumente/ELISA classic/T estauswertung/Kapi tel überschrift: TESTAU SWER TUNG + Erreg er @ 1\mod_1197038305478_6.doc @ 11384 @ 


8 TESTAUSWERTUNG 

SERION ELISA classic EBV VCA IgG/IgM, EBV EBNA1 IgG, EBV EA IgG 

Pos: 33 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für all e D okumente/ELISA classic/T estauswertung/Testauswertung: Ei n-Punkt-Quantifizi erung @ 4\mod_1255348099107_6.doc @ 21399 @ 

8.1 Ein-Punkt-Quantifizierung nach der 4PL-Methode 

Die größtmögliche Genauigkeit der Zuordnung von Messsignalen zu quantitativen Werten 

bieten nichtlineare Funktionen, die sigmoidale Kurven direkt, ohne jede weitere 

Transformation, der OD-Skala anpassen. Die Konzentrationsbestimmung der Antikörper 

im SERION ELISA classic erfolgt nach dem “4-Parameter logistic-log-Modell“ (4PL), 

dessen mathematische Funktion durch folgende Formel beschrieben wird: 

OD = A + 

1 + e 


D - A 

B(C - ln Konz.) 

Die Parameter A, B, C und D geben den Kurvenverlauf exakt wieder und definieren 

1. die untere Asymptote Parameter A 

2. die Steigung der Kurve im Wendepunkt Parameter B 

3. den Wendepunkt der Kurve Parameter C 

4. die obere Asymptote Parameter D 

Die Institut Virion\Serion GmbH (Würzburg) ermittelt für jede Kitcharge die Standardkurven 

in mehrfachen Testläufen unter Einhaltung optimaler Bedingungen. Auf diese Weise 

entfällt die kosten- und zeitintensive Konstruktion der Standardkurve durch den Anwender. 

Zur Auswertung der Testläufe wird jedem SERION ELISA classic ein chargenspezifisches 

Qualitätskontrollzertifikat mit Standardkurve und Wertetabelle beigelegt. Die Software 

SERION evaluate sowie die Excel-basierte Auswertehilfe SERION activity werden auf 

Anfrage gerne zur Verfügung gestellt. 

Zum Ausgleich von Testschwankungen und um die Qualität des Testlaufes zu überprüfen, 

wird das so genannte Standardserum mitgeführt. Diesem Standardserum werden in der 

Qualitätsendkontrolle ein Sollwert sowie ein Gültigkeitsbereich zugeordnet, innerhalb 

dessen Grenzen eine sichere und zuverlässige Bewertung der Testergebnisse garantiert 

wird. 

Pos: 34 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für all e D okumente/ELISA classic/T estauswertung/Testauswertung: Testgültig kei tskriterien @ 4\mod_1255348317229_6.doc @ 21431 @ 

DE

8.2 Testgültigkeitskriterien 

- Der Substratleerwert sollte einen OD-Wert < 0,25 aufweisen. 

- Die negative Kontrolle muss in der Testauswertung als negativ bewertet werden. 

- Bei quantitativen SERION ELISA classic muss der OD-Mittelwert des 

Standardserums nach Abzug des Substratleerwertes innerhalb des 

Gültigkeitsbereiches liegen, welcher auf dem chargenspezifischen 

Qualitätskontrollzertifikat angegeben ist. 

- Die OD-Werte des Standardserums dürfen nicht mehr als 20 % differieren. 

Sind diese Kriterien nicht erfüllt, ist der Testlauf ungültig und muss wiederholt werden. 


classic/Testauswertung/Auswertung: Überschrift @ 0\mod_1180968661538_6.doc @ 968 

@ 

8.3 Auswertung SERION ELISA classic EBV VCA IgG/IgM, EBV EBNA1 IgG, 

EBV EA IgG 

Pos: 36 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für all e D okumente/ELISA classic/T estauswertung/Nichtautomatisierte Auswertung @ 4\mod_1255348011764_6.doc @ 21383 @ 

8.3.1 Nichtautomatisierte Auswertung 

Zur Auswertung der Testläufe wird jedem SERION ELISA classic ein chargenspezifisches 

Qualitätskontrollzertifikat mit Standardkurve und Wertetabelle beigelegt. Der 

Substratleerwert (blank) muss vor den Auswertungen von allen Messergebnissen 

abgezogen werden. 

Pos: 37 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für mehrer e D okumente/T estauswertung/Testauswertung: M ethode 1 (für all e T ests auß er T etanus & Di phtherie) @ 5\mod_1255349684243_6.doc @ 21526 @ 

Methode 1: Qualitative Auswertung 

Zur Festlegung des cut-off Bereiches in OD multipliziert man den Mittelwert der 

gemessenen OD des Standardserums mit dem angegebenen Zahlenwert auf dem 

Qualitätskontrollzertifikat (siehe Formeln für spezielle Auswertesysteme), z. B.: 

OD = 0,502 x MW(STD) bei oberer cut-off Grenze 

OD = 0,352 x MW(STD) bei unterer cut-off Grenze 

Wird beispielsweise ein Extinktionmittelwert des Standardserums von OD 0,64 gemessen, 

ergibt sich ein cut-off Bereich von OD 0,225 bis 0,321. 


Methode 2: 

Pos: 38 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für all e D okumente/ELISA classic/T estauswertung/Testauswertung: Methode 2 (für alle T ests) @ 4\mod_1255348201981_6.doc @ 21415 @ 

Stufenlose Bestimmung der Antikörperaktivitäten mittels Standardkurve: 

Testschwankungen, die von Tag zu Tag sowie von Labor zu Labor auftreten können, so 

genannte Interassay-Varianzen, werden durch Multiplikation des aktuellen Messwerts der 

Patientenproben mit dem Korrekturfaktor F ausgeglichen: 

F = 

OD-Sollwert (des Standardserums) 


OD-Tageswert (des Standardserums) 

Dieses Verfahren ist notwendig, um das aktuelle Testniveau des Anwenders an die 

chargenspezifische Standardkurve anzugleichen bzw. zu normalisieren. Auf diese Weise 

werden Tagesschwankungen korrigiert. 

1. Mittelwert aus den beiden Extinktionswerten des Standardserums bilden und 

prüfen, ob der ermittelte Wert im angegebenen Gültigkeitsbereich liegt. 

2. Berechnung des Faktors F: Der angegebene Sollwert des Standards wird durch den 

Mittelwert der Extinktion des Standardserums geteilt: 

F = Sollwert Extinktion Standardserum / Mittelwert Extinktion Standardserum. 

3. Alle Messwerte der Patientenproben werden mit F multipliziert. 

4. Über die korrigierten Messwerte können anhand der Standardkurve 

Antikörperaktivitäten in IU/ml bzw. U/ml abgelesen werden. 

Pos: 39 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für all e D okumente/ELISA classic/T estauswertung/Automatische Auswer tung @ 4\mod_1255347464244_6.doc @ 21351 @ 

DE

8.3.2 Automatische Testauswertung mit der Software SERION evaluate 

Durch Eingabe der vier Parameter und des Sollwertes des Standardserums werden 

Antikörperaktivitäten nach Prozessierung und Messung des SERION ELISA classic durch 

das Auswerteprogramm SERION evaluate errechnet. 

Falls ein Wert außerhalb des Gültigkeitsbereiches liegt, werden folgende 

Fehlermeldungen in englischer Sprache angezeigt: 

„Standard values out of ranges in following groups: Group 1-24.” bzw. 

„Standard values differ more than 20 % in following groups: Group 1-24.” 

In diesen Fällen ist der Testlauf ungültig und muss wiederholt werden. 

Die vier Kurvenparameter und der Sollwert müssen nur bei Chargenwechsel geändert 

werden (Parameter und Sollwert sind auf der Wertetabelle angegeben). Die korrekte 

Eingabe dieser chargenspezifischen Daten kann anhand der dem Standardserum 

zugeordneten Aktivität (in IU/ml bzw. U/ml) überprüft werden. Der erhaltene Mittelwert der 

Antikörperaktivität muss mit der auf dem chargenspezifischen Qualitätskontrollzertifikat 

angegebenen Bewertung übereinstimmen. Eine Messwertkorrektur erfolgt automatisch. Im 

Ausdruck der Messergebnisse erscheint: 

Pos: 40 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für all e D okumente/ELISA classic/T estauswertung/Quantifi zierungsgrenzen @ 6\mod_1258098664276_6.doc @ 24398 @ 

8.4 Quantifizierungsgrenzen 


Probenbezeichnung 

OD-Wert 

IU/ml bzw. U/ml 

Bewertung 

Die Quantifizierungsgrenzen sind auf dem Kontrollzertifikat des SERION ELISA classic 

angegeben. Im Rahmen der Leistungsbewertungsstudie wurde die Verdünnungslinearität 

über diesen Bereich nachgewiesen. Sollten Patientenproben Messwerte oberhalb dieses 

Bereichs erzielen, können die Proben in einer höheren Verdünnung analysiert werden. Die 

erhaltenen Antikörperkonzentrationen sind dann mit dem zusätzlichen Verdünnungsfaktor 

zu multiplizieren. 

Pos: 41 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für mehrer e D okumente/T estauswertung/Grenzwertber eich ( für T este mehrerer Ig-Klassen) @ 9\mod_1276070736543_6.doc @ 32153 @ 

8.5 Grenzwertbereiche 

Die Grenzwertbereiche der SERION ELISA classic EBV VCA IgG/IgM, EBV EBNA1 IgG, 

EBV EA IgG sind auf den Qualitätskontrollzertifikaten angegeben und kennzeichnen die 

Bereiche grenzwertiger Messergebnisse. Die Bewertung einer Patientenprobe unterhalb 

des Grenzwertbereichs charakterisiert ein negatives Testergebnis; die Bewertung einer 

Patientenprobe oberhalb des Grenzwertbereichs wird als positives Testergebnis 

interpretiert. Im Falle eines grenzwertigen Ergebnisses ist keine sichere Bewertung der 

Patientenprobe möglich. In einem solchen Fall sollte der Test parallel mit einer, im 

Abstand von ein bis zwei Wochen entnommenen, neuen Serumprobe (Serumpaar) 

wiederholt werden. 

Pos: 42 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für all e D okumente/ELISA classic/T estauswertung/Kapi tel überschrift: Interpretation der Ergebnisse @ 0\mod_1190013774869_6.doc @ 9938 @

8.6 Interpretation der Ergebnisse 

Pos: 43 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für nur ein D okument/Testauswertung/EBV/EBV: Inter pretation der Ergebnisse @ 5\mod_1255684979360_6.doc @ 22558 @ 

Die Diagnose einer Primärinfektion (Infektiöse Mononukleose, IM) erfolgt vor allem durch 

den Nachweis von Antikörpern, die gegen frühe Antigene (Early Antigen) und gegen den 

Proteinkomplex des viralen Kapsidproteins (Virus Capsid Antigen, VCA) gerichtet sind. Die 

Bedeutung und das Auftreten von Antikörpern gegen VCA sind seit langem belegt. Kurz 

nach Infektion mit dem Virus treten EA und VCA IgM Antikörper auf, die mit Abklingen der 

akuten Infektion wieder verschwinden oder nur in sehr geringer Aktivität vorliegen. 

Dahingegen persistieren die etwa zeitgleich oder leicht verzögert gebildeten VCA IgG 

Antikörper lebenslang, wobei die Antikörperaktivität variieren kann. Im Fall einer 

Reaktivierung (z. B. nach Immunsuppression) kommt es zu einem deutlichen Anstieg der 

EA IgG und der VCA IgG Antikörper. In seltenen Fällen können dann auch VCA IgM 

Antikörper wieder nachweisbar sein. 

Wie nach Reaktivierung sind auch für das Burkitt-Lymphom bzw. Nasopharynxkarzinom 

sehr hohe VCA IgG Antikörperspiegel charakteristisch. Darüber hinaus kommt dem 

Nachweis von VCA IgA Antikörpern bei der Diagnose des Nasopharynxkarzinoms eine 

unterstützende Aussage zu. Ein erhöhter EA Antikörperspiegel ist ebenfalls 

charakteristisch bei Patienten mit Nasopharynxkarzinom und nach Reaktivierung. 

Mehrere Wochen nach einer Primärinfektion werden Antikörper gegen das EBV-Nukleäre 

Antigen 1 (EBNA1) gebildet, welche lebenslang persistieren. Unter Immunsupression kann 

es zu einem Verlust der Antikörper gegen EBNA1 kommen. Allein oder zusammen mit 

VCA IgG Antikörpern gelten sie als Marker für eine zurückliegende Infektion. Die 

Konstellation EBNA1 IgG und VCA IgG wird als abgelaufene Infektion beurteilt. Nach 

Reaktivierungen, z. B. nach Organtransplantation, wird häufig ein Abfall der EBNA1 IgG 

Antikörper beobachtet. Gleichzeitig steigen oftmals die VCA spezifischen IgG Antikörper 

wieder an und die Antikörper gegen das Early Antigen werden erneut gebildet. 

Grenzwertige Ergebnisse im SERION ELISA classic EBNA1 IgG werden bei gleichzeitig 

positivem SERION ELISA classic EBV VCA IgG Ergebnis positiv bewertet, so dass die 

serologische Antikörperkonstellation für eine lange zurückliegende Infektion spricht. 

Bei frischen CMV-Infektionen tritt in ca. 25 % der Fälle eine erneute Bildung von VCA IgM 

Antikörpern auf. Aus diesem Grund kann es zu der ungewöhnlichen Antikörperkonstellation 

EBNA1 IgG positiv, VCA IgG positiv und VCA IgM positiv kommen. Das 

Vorhandensein von EBNA1 IgG zeigt dennoch eine länger zurückliegende EBV-Infektion 

an. 

In der folgenden Tabelle sind mögliche Antikörperkonstellationen und ihre diagnostische 

Aussage zusammenfassend dargestellt. 


DE

Grundinterpretationsschema: 

Das Grundinterpretationsschema soll in erster Linie zur Unterscheidung zwischen 

Seronegativität, Primärinfektion und zurückliegender Infektion anhand der vier wichtigsten 

serologischen Marker EA IgG, VCA IgG, VCA IgM und EBNA1 IgG dienen. 

EA IgG VCA IgM VCA IgG EBNA1 IgG Bewertung 

- - - - Seronegativität 

+ - - - 

- + - - 

+ + - - 

+ + + - 

+ - + - 

- + + - 

- - + - 

- - + + 

- - - + 

++ - ++ + 

++ + ++ + 

Pos: 44 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für all e D okumente/ELISA classic/T estauswertung/Kapi tel überschrift: Refer enzbereiche gesunder Pr obanden @ 8\mod_1258644290978_6.doc @ 26748 @ 

8.7 Referenzbereiche gesunder Probanden 

deutsch 22 

frische Infektion 

zurückliegende Infektion 

Reaktivierung 

Pos: 45 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für nur ein D okument/Testauswertung/EBV/EBV: Refer enzbereich gesunder Probanden @ 8\mod_1259152464353_6.doc @ 27003 @ 

Die Untersuchung von Seren unselektierter Blutspender aus dem süddeutschen Raum mit 

den SERION ELISA classic EBV VCA IgM / IgG, EBNA1 IgG und EA IgG ergab folgende 

Verteilung: Von 131 untersuchten Blutspenderseren wurden 131 (100 %) mit dem 

SERION ELISA classic EBV VCA IgM negativ bewertet. Die Austestung mit dem SERION 

ELISA classic EBV VCA IgG ergab folgende Verteilung: 126 Seren (96,2 %) lieferten einen 

positiven Befund, zwei Seren (1,5 %) wurden grenzwertig und drei (2,3 %) negativ 

bewertet. Von 131 Blutspenderseren wurden 120 (91,6 %) mit dem SERION ELISA classic 

EBNA1 IgG positiv und 11 Seren (8,4 %) negativ bewertet. Für den ELISA classic EA IgG 

gab es folgende Verteilung: 28 Seren (21,4 %) lieferten ein positives Ergebnis, 11 Seren 

(8,4 %) ein grenzwertiges Ergebnis und 92 Seren (70,2 %) wurden negativ bewertet. 

Daraus ergibt sich eine Seroprävelenz der Bevölkerung für EBV IgG von > 96 %. 

Pos: 46 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für all e D okumente/ELISA classic/Leistungsmer kmale/Kapi tel überschrift Leistungsmer kmale @ 0\mod_1184676089844_6.doc @ 2101 @

9 LEISTUNGSMERKMALE 

classic/Leistungsmerkmale/Kapitelüberschrift: 0\mod_1190013251494_6.doc Pos: 47 /Arbeitsanleitungen ELISA @ 9923 classic/Gültig @ Sensitivität für alle Dokumente/ELISA 

und Spezifität @ 

9.1 Sensitivität und Spezifität 

Pos: 48 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für nur ein D okument/Leistungsmer kmal e/EBV/EBV: Sensi ti vität und Spezifi tät @ 5\mod_1255688283007_6.doc @ 22590 @ 

Zur Evaluierung der SERION ELISA classic EBV VCA IgM, EBV VCA IgG und EBV 

EBNA1 IgG wurden diese in einer Vergleichsstudie mit mehreren anderen kommerziellen 

EBV-ELISAs getestet. 

SERION ELISA classic EBV EA IgG: 

Der SERION ELISA classic EBV EA IgG wurde im Vergleich zu vier anderen ELISAs an 

einem Positivpanel von 38 Seren und an einem Negativpanel von 95 Seren getestet. 

Insgesamt wurden 133 Seren analysiert. 

Da zwei der Teste (3+4) eine extrem geringe Sensitivität oder Spezifität aufwiesen, 

wurden nur die zwei anderen Teste (1+2) zum Vergleich herangezogen. Diskrepante 

Seren zwischen diesen Testen und dem SERION ELISA classic EBV EA IgG wurden 

mittels Immunoblot analysiert und anhand der Immunoblot-Ergebnisse entsprechend dem 

Positiv- bzw. Negativpanel zugeordnet. Mit Hilfe dieser Positiv- und Negativpanel wurden 

die Sensitivität, Spezifität, positiver und negativer Vorhersagewert und die Effizienz 

berechnet. Grenzwertige Ergebnisse wurden bei der Berechnung nicht berücksichtigt. 

SERION ELISA 

classic EBV-EA- 

IgG 


Test 1 Test 2 Test 3 Test 4 

Sensitivität 81,8 % > 99 % 75,0 % 30,8 % > 99 % 

Spezifität 97,6 % 81,0 % 85,7 % > 99 % 3,6 % 

Vorhersagewert (+) 93,1 % 77,6 % 77,4 % > 99 % 34,1 % 

Vorhersagewert (-) 93,2 % > 99 % 84,0 % 70,0 % > 99 % 

Effizienz 93,2 % 88,5 % 81,5 % 73,5 % 35,7 % 

SERION ELISA classic EBV VCA IgM: 

Der SERION ELISA classic EBV VCA IgM wurde im Vergleich zu vier anderen ELISAs an 

einem Positivpanel von 78 Seren und an einem Negativpanel von 77 Seren getestet. 

Insgesamt wurden 155 Seren analysiert. Bei Übereinstimmung in mindestens vier von fünf 

Testen wurde ein Serum als positiv bzw. negativ bewertet. Diskrepante Seren wurden 

mittels Immunoblot analysiert und anhand der Immunoblot-Ergebnisse dem Positiv- bzw. 

Negativpanel zugeordnet. Mit Hilfe dieser Positiv- und Negativpanel wurden die 

Sensitivität und Spezifität berechnet. Grenzwertige Ergebnisse wurden bei der 

Berechnung nicht berücksichtigt. 

SERION ELISA classic EBV VCA IgG: 

Der SERION ELISA classic EBV VCA IgG wurde im Rahmen einer externen Studie mit 

einem Positivpanel bestehend aus 209 Seren und an einem Negativpanel bestehend aus 

71 Seren im Vergleich zum Immunoblot validiert. Grenzwertige Ergebnisse wurden bei der 

Berechnung der Sensitivität und Spezifität nicht berücksichtigt. 

DE

SERION ELISA classic EBV EBNA1 IgG: 

Die Testeinstellung des SERION ELISA classic EBV EBNA1 IgG wurde im Vergleich zum 

ELISA eines Mitbewerbers mit einem Positivpanel von 130 Seren und an einem 

Negativpanel von 69 Seren validiert. Grenzwertige Ergebnisse wurden bei der Berechnung 

der Sensitivität und Spezifität nicht berücksichtigt. 

Die Zusammenfassung der Ergebnisse zeigt folgende Tabelle: 


Leistungsmerkmale Sensitivität Spezifität 

SERION ELISA classic EBV VCA IgG 98,1 % 98,5 % 

SERION ELISA classic EBV VCA IgM 97,4 % 97,3 % 

SERION ELISA classic EBV EBNA1 IgG 98,5 % > 99 % 

Pos: 49 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für all e D okumente/ELISA classic/Leistungsmer kmale/Kapi tel überschrift Präzisi on @ 0\mod_1184676568397_6.doc @ 2116 @

9.2 Präzision 

Pos: 50 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für nur ein D okument/Leistungsmer kmal e/EBV/EBV: Präzision @ 5\mod_1255688275695_6.doc @ 22574 @ 

Die intraserielle Präzision wurde mit unterschiedlich reaktiven Seren im Mehrfachansatz 

(n = 20) innerhalb einer antigenbeschichteten Platte ermittelt. Für die Bestimmung der 

interseriellen Präzision wurden Serumproben mit unterschiedlicher Reaktivität in 10 

unabhängig voneinander durchgeführten Ansätzen geprüft. 


Standardabweichung 

Variationskoeffizient (VK %) = x 100 


Probe 

Mittlere 

Extinktion (OD) 

Intraassay 

(VK %) 

Mittelwert 

Mittlere 


Interassay 

(VK %) 

schwach pos 0,616 4,5 0,637 5,5 

positiv 0,746 5,3 0,814 6,6 

stark positiv 2,125 3,0 2,191 2,8 


Probe 

Mittlere 


Intraassay 

(VK %) 

Mittlere 


Interassay 

(VK %) 

positiv 1,582 5,1 1,703 6,4 

stark positiv 2,249 7,9 2,311 8,7 


Probe 

Mittlere 


Intraassay 

(VK %) 

Mittlere 


Interassay 

(VK %) 

schwach pos. 0,554 2,2 0,644 7,1 

positiv 1,355 2,4 1,510 4,5 

stark positiv 1,437 3,0 1,636 4,5 

DE


Probe 

Mittlere 


Intraassay 

(VK %) 


Mittlere 


Interassay 

(VK %) 

schwach pos. 0,305 2,8 0,341 8,4 

positiv 0,952 2,5 1,093 4,1 

stark positiv 1,622 3,1 1,799 4,2 

Pos: 51 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für all e D okumente/ELISA classic/Allgemei ne Texte ELISA classic/Sicherheitsmaßnahmen @ 4\mod_1255337096255_6.doc @ 21189 @ 

10 SICHERHEITSMASSNAHMEN 

10.1 Warnhinweise und Vorsichtsmaßnahmen 

Der SERION ELISA classic ist nur für die Anwendung durch Fachpersonal vorgesehen, 

welches die Arbeitstechniken einwandfrei beherrscht. 

Für die Handhabung der Testreagenzien und der Patientenproben gelten die anerkannten 

Laborregeln: 

- Die Testpackung enthält Verdünnungen humaner Seren. Obwohl alle eingesetzten 

Seren negativ auf anti-HIV-Ak, HBs-Ag (Hepatitis B-Virus-surface Antigen) und anti- 

HCV-Ak getestet wurden, müssen sie als potentiell infektiös betrachtet werden. 

- Nicht mit dem Mund pipettieren. 

- In Bereichen, in denen mit Testreagenzien oder mit Patientenproben gearbeitet wird, 

nicht essen, trinken oder rauchen. 

- Beim Umgang mit Testreagenzien und Patientenproben direkten Kontakt durch das 

Tragen von Laborkittel, Einweghandschuhen und Schutzbrille vermeiden. Hände 

anschließend gründlich reinigen. 

- Die Patientenproben und alle potentiell infektiösen Materialien sind nach der Testdurchführung 

zu dekontaminieren. 

- Die Reagenzien sind unzugänglich für Kinder aufzubewahren. 

- Stopplösung: 

10.2 Entsorgung 

Ätzend (C); R34: verursacht Verätzungen, 

Schutzbrille, Handschuhe und Laborkittel sind zu tragen. 

Bitte beachten Sie die jeweils geltenden gesetzlichen Vorschriften! 

Pos: 52 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für all e D okumente/ELISA classic/Liter atur/Kapitelüberschrift: Liter atur @ 0\mod_1190013903728_6.doc @ 9954 @

11 LITERATUR 

Pos: 53 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für nur ein D okument/Literatur /EBV: Li ter atur @ 5\mod_1256049226134_0.doc @ 22769 @ 

[1] Aalto, S. M. (1998) Immunoreactivation of Epstein-Barr Virus Due to 

Cytomegalovirus Primary Infection. J. Med. Virol. 56, 186-91. 

[2] Bauer, G. (1994) Epstein-Barr Virus - Bedeutung und Möglichkeiten der 

Labordiagnostik. Therapeutische Umschau 51, 558-62. 

[3] Bauer, G. (2001) Simplicity Through Complexity: Immunoblot With Recombinant 

Antigens as the New Gold Standard in Epstein-Barr Virus Serology. Clin. Lab. 47, 

223-30. 

[4] Linde, A. (1992) Diagnosis and pathogenesis of infectious mononucleosis and other 

Epstein Barr virus-associated disease. Rev. Med. Microbiol. 3, 43-51. 

[5] Porstmann, T. (1992) Epstein-Barr Virus. Diagnostische Bibliothek 6/7, 1-8. 

[6] Prang, N. S., Schwarzmann, F. (1997) Aktuelle Perspektiven in der Diagnostik 

Epstein-Barr Virus assoziierter Erkrankungen. Immun. Infekt. 144-51. 

[7] Seigneurin, J. M. (1992) Diagnostik von Infektionen mit dem Epstein-Barr Virus. 

Diagnose und Labor 42, 83-90. 

===== Ende der Stückliste ===== 


DE

Updates 

Please pay attention to the differences in comparison to the previous version. 

Current version Nr.: V 22.11/12-1 

Previous version: V 21.10/01-1 

Update in section: General Update, 5, 7.2.1 





CONTENTS 

1 INTENDED USE 

2 DIAGNOSTIC RELEVANCE 

3 TEST PRINCIPLE SERION ELISA classic 

4 KIT COMPONENTS 

5 MATERIAL REQUIRED BUT NOT SUPPLIED 

6 STORAGE AND STABILITY 

7 TEST PROCEDURE SERION ELISA classic 

7.1 Evidence of Deterioration 

7.2 Sample Preparation and Storage 

7.3 Preparation of Kit Reagents 

7.4 Overview - Test Procedure 

7.5 Manual Test Procedure 

7.6 Automated Test Procedure 

7.7 Positive Control / Accuracy Control 

8 TEST EVALUATION 

8.1 Single-Point Quantification with the 4PL Method 

8.2 Criteria of Validity 

8.3 Calculation SERION ELISA classic EBV VCA IgG/IgM, EBV EBNA1 IgG, EBV EA IgG 

8.4 Limits of Quantification 

8.5 Borderline Ranges 

8.6 Interpretation of Results 

8.7 Reference Range of healthy Individuals 

9 PERFORMANCE CHARACTERISTICS 

9.1 Sensitivity and Specificity 

9.2 Reproducibility 

10 SAFETY MEASURES 

10.1 Statements of Warning 

10.2 Disposal 

11 REFERENCES 

current version No.: V 22.11/12-1 

previous version: V 21.10/01-1 

EN 

EL EN 

CS PT

Pos: 1 /Arbeitsanl eitung en ELISA classi c/Gültig für nur ein Dokument/U pdate/U pdate: EBV @ 3\mod_1234173447824_18.doc @ 18108 @ Pos: classic/Allgemeine @ 4\mod_1255336385816_18.doc 2 /Arbeitsanleitungen Texte ELISA @ classic/Einleitung classic/Gültig 21165 @ für "Enzymimmunoassay" 

alle Dokumente/ELISA 



Enzyme-immunoassay for determination of human antibodies 

for in vitro diagnostic use 

Dokument/Bestellnummern/EBV: @ Pos: 6490 3 /Arbeitsanleitungen @ 

ELISA Bestellnummern classic/Gültig für @ nur 0\mod_1188368235293_18.doc 

ein 

SERION ELISA classic Epstein-Barr Virus VCA IgG Order Nr.: ESR1361G 

SERION ELISA classic Epstein-Barr Virus VCA IgM Order Nr.: ESR1361M 

SERION ELISA classic Epstein-Barr Virus EBNA1 IgG Order Nr.: ESR1362G 

SERION ELISA classic Epstein-Barr Virus EA IgG Order Nr.: ESR1363G 

Pos: classic/Allgemeine 0\mod_1177351044007_18.doc 4 /Arbeitsanleitungen Texte ELISA @ 170 classic/Kapitelüberschrift classic/Gültig @ für alle Dokumente/ELISA 

"Anwendungsbereich" @ 

1 INTENDED USE 


SERION ELISA classic Epstein-Barr Virus EA IgG, VCA IgG, IgM and EBNA1 IgG tests 

are quantitative and qualitative immunoassays for the detection of human antibodies in 

serum or plasma directed against components of the Epstein-Barr Virus (EBV). The 

SERION ELISA classic Epstein-Barr Virus EA IgG and SERION ELISA classic EBV VCA 

IgM are recommended for the detection of acute infections or reactivations. The SERION 

ELISA classic Epstein-Barr Virus VCA IgG determines primary and recent infections. The 

SERION ELISA classic EBNA1 IgG is recommended for the determination of past 

infections. 

Pos: 6 /Arbeitsanl eitung en ELISA classi c/Gültig für alle D okumente/ELISA cl assic/Allgemei ne T exte ELISA cl assic/Kapitelüberschrift "Diag nostische Bedeutung" @ 0\mod_1177351537598_18.doc @ 221 @ 

2 DIAGNOSTIC RELEVANCE 


The Epstein - Barr virus (EBV) is a human pathogenic virus belonging to the Herpesvirus 

family. It occurs worldwide and, in common with all Herpesviruses, the prevalence in the 

general population is high, reaching 90 to 95 % in the adult population. In the so called 

developing countries, primary infection is generally in the first year of life and is often 

asymptomatic. In contrast, in countries with high standards of hygiene primary infection 

occurs mainly in teenagers and young adults. The peak age for infection is between 15 

and 20 years and around 50 % of those infected will develop an infectious mononucleosis. 

Transmission is primarily through exchange of saliva although other routes are possible 

such as from blood products or bone marrow transplantation. 

During a primary infection the salivary glands are initially involved and virus reaches the 

nose and throat via the saliva. At this stage, the symptoms of infection are flu-like. The 

virus is disseminated throughout the body by infected B lymphocytes, which are normally 

regulated by the immune system but are stimulated to proliferate by the virus. These 

infected B lymphocytes in the peripheral blood are characteristically atypical with a 

variable shape, distinctly basophile cytoplasm and an obvious nucleus. As the disease 

progresses it may manifest as high fever, splenomegaly, lymphadenitis, thrombocytopenia, 

and hepatitis. Due to the virus’s dissemination and transmission strategy, primarily via 

saliva, infectious mononucleosis (IM) or glandular fever has also been called the “kissing 

disease”. 

In rare cases an acute IM infection can lead to a chronic active disease state. In such 

cases the symptoms of IM may continue for a considerable time period. The pathogenesis 

english 2

of this complication is unclear although genetic predisposition and/or infection with a 

particularly lytic strain of virus are suspected. 

Another rare disease state is chronic IM which, in contrast to chronic acute infection, 

following resolution of symptoms and a period of latency, possibly lasting several years, 

reactivates with sometimes fatal consequences. The reasons and causes behind such 

cases are unclear. 

Some genetic disorders such as XLPS (x-linked lymphoproliferative syndrome) can result 

in uncontrolled B cell proliferation following infection with EBV and frequently lead to 

chronic infection. 

Medical suppression of the immune system such as used in transplant patients may lead 

to the reactivation of latent virus or a increased likelihood of primary infection can lead to 

an EBV induced transplant rejection. AIDS patients are also, as a consequence of their 

underlying immune disease, more susceptible to infection and reactivations. 

In certain geographical regions EBV is closely associated with the incidence of 

nasopharyngeal carcinoma. This carcinoma of the pharynx, nose and throat consists of 

undifferentiated epithelial cells and has a propensity for metastasis. This disease occurs 

globally but is particularly common in certain regions of south China. Genetic 

predisposition as well as environmental aspects such as diet are under discussion as 

cofactors. 

Burkitt´s lymphoma (BL) is also a tumor associated with EBV, primarily in the geographical 

regions of Africa and Papua New Guinea. This monoclonal B-cell tumor is also linked to 

areas with high incidence of malaria and over 90 % of such tumors show evidence of the 

E-B virus. The influence of plasmodium infection on the immune response brings the role 

of malaria as a cofactor for BL into discussion. Sporadic cases of BL in other regions do 

occur, however in such cases EBV is much less commonly detected and other cofactors 

such as genetic changes through chromosome translocation are thought to be responsible 

for the tumour. 

The antibody response to EBV infection is extremely variable as a consequence of the 

complexity of the virus and the heterogeneous of the various stages of infection. During 

the active phase of infection, antibodies directed at approximately 100 different viral 

antigens are produced. This drops to around 10 during latent infection (EBNA 1-6, Late 

Membrane Proteins 1-3). With this background there has been a trend towards the 

development of antibody detection systems which utilise single components / proteins 

rather than the complete virus. In this way it is possible to correlate the production of 

antibodies to certain antigens with the different disease phases and disease progression. 

english 3 

EN 

EL EN 

CS PT

Figure 1: Antibody titers after EBV-infection. 

Source: http://www.viomecum.ch/de/konz/Infektiologie/393-394_EBV.html 

Figure 1 shows the typical immune response in terms of antibody production following 

infection with EBV. Very early in infection IgM is produced against the early antigen (EA). 

Maximum concentrations of antibodies tend to coincide with the onset of symptoms, and 

approximately two weeks after initial infection EA IgG, VCA (Virus Capsid Antigen) IgM 

and VCA IgG production begins. The highest anti-VCA IgM concentrations are found 

around three weeks following the onset of symptoms. EA IgG are often detectable for a 

considerable time following infection. Subsequently the concentrations of VCA IgM and 

later EA IgG antibodies fall. Anti VCA IgG reaches a peak some six weeks after symptoms 

appear and remain at a high level lifelong. Around three weeks after appearance of 

symptoms EBNA1 IgG antibodies, which are an indicator of a past infection, begin to be 

produced and reach a peak at around seven months and remain at a high level for life 

following a normal EBV infection. Reactivation of the virus (such as immunosuppression) 

usually leads to a significant increase in EA IgG antibodies while VCA IgM titres seldom 

increase. Only very occasionally, following immunosuppression, does EBNA1 IgG 

disappear so that EA IgG is a good marker for reactivation. 

Pos: 8 /Arbeitsanl eitung en ELISA classi c/Gültig für alle D okumente/ELISA cl assic/T estprinzip/Testpri nzip ELISA classic @ 4\mod_1255342796551_18.doc @ 21208 @ 

Symptoms 

Heterophile ab 

VCA-IgM 

weeks months years 

english 4

3 TEST PRINCIPLE SERION ELISA classic 

The ELISA (Enzyme Linked Immunosorbent Assay) is an immunoassay, which is 

particularly suited to the determination of antibodies in the field of infectious serology. The 

reaction is based on the specific interaction of antibodies with their corresponding antigen. 

The test strips of the SERION ELISA classic microtiter plate are coated with specific 

antigens of the pathogen of interest. If antibodies in the patient´s serum sample are 

present, they bind to the fixed antigen. A secondary antibody, which has been conjugated 

with the enzyme alkaline phosphatase, detects and binds to the immune complex. The 

colourless substrate p-nitrophenylphosphate is then converted into the coloured product 

p-nitrophenol. The signal intensity of this reaction product is proportional to the 

concentration of the analyte in the sample and is measured photometrically. 

Pos: 9 /Arbeitsanl eitung en ELISA classi c/Gültig für nur ein Dokument/Inhalt und Z usammensetzung/EBV: Inhalt und Z usammensetzung @ 8\mod_1261062632666_18.doc @ 28076 @ 

english 5 

EN 

EL EN 

CS PT

4 KIT COMPONENTS 

Test Components Pieces / 

Volume 

Break apart microtiter test strips each with eight antigen coated single wells, 

(altogether 96) MTP , 

1 frame. 

The coating material is inactivated. 

Standard serum (ready-to-use) STD , 

Human serum in protein containing phosphate buffer; 

negative for anti-HIV Ab, HBs-Ag (Hepatitis B-Virus surface antigen) and anti-HCV Ab; 

preservative: < 0.1 % sodium azide; 

colouring: Amaranth O. 

Negative control serum (ready-to-use) NEG , 

Human serum in protein containing phosphate buffer; 

negative for anti-HIV Ab, HBs-Ag (Hepatitis B-Virus surface antigen) and anti-HCV Ab; 


colouring: Lissamin Green V. 

Anti-human IgA, IgG or IgM conjugate (ready-to-use) APC , 

Anti-human IgA, IgG or IgM polyclonal antibody, 

conjugated to alkaline phosphatase, stabilised with protein stabilisation solution; 

preservative: 0.01 % methylisothiazolone, 0.01 % bromnitrodioxane. 

Washing solution concentrate (sufficient for 1000 ml) WASH , 

Sodium chloride solution with Tween 20 and 30 mM Tris/HCl, pH 7,4; 

preservative: < 0.1 % sodium azide. 

Dilution buffer DILB or special dilution buffer S1 DILBS1 , 

(Special dilution buffer for SERION ELISA classic EBV EA IgG. 

Shake immediately before use!) 

Protein containing phosphate buffer with Tween 20 (DILB) 

and lysate of E. coli ( DILBS1 ); 


colouring: 0.01 g/l Bromphenol blue. 

Stopping solution STOP , 

1.2 N sodium hydroxide. 

Substrate (ready-to-use) pNPP , 

Para-nitrophenylphosphate in solvent free buffer; 

preservative: < 0.1 % sodium azide 

(Substrate in unopened bottle may have a slightly yellow coloring, which does not 

reduce the quality of the product!) 

english 6 

12 pieces 

2 x 2 ml 

2 ml 

13 ml 

33,3 ml 

2 x 50 ml 

15 ml 

13 ml 

Quality control certificate with standard curve and evaluation table INFO , 2 pages 

(quantification of antibodies in IU/ml or U/ml). 

Pos: benötigte Nachweis) 10 /Arbeitsanleitungen Materialien/Z200 @ 5\mod_1255348816988_18.doc Zusätzlich ELISA classic/Gültig benötigte @ 21464 Materialien für @ 

mehrere (für Dokumente/Zusätzlich 

Teste mit IgM-

5 MATERIAL REQUIRED BUT NOT SUPPLIED 

- common laboratory equipment 

- for the IgM detection: SERION Rf-Absorbent, order no. Z200 (20 ml) 

- photometer for microtitre plates with filter, wavelength 405 nm, 

recommended reference wavelength 620 nm - 690 nm (e.g. 650 nm) 

- incubator 37 °C 

- moist chamber 

- distilled water 

- Click-Clips (order no. VT120) 


classic/Lagerung und Haltbarkeit/Lagerung und Haltbarkeit @ 

4\mod_1255343176800_18.doc @ 21240 @ 

english 7 

EN 

EL EN 

CS PT

6 STORAGE AND STABILITY 

Reagent Storage Stability 

Microtiter strips 

(coated with antigen) 

Control sera / 

Standard sera 

unopened 

after opening at 2 – 8 °C in closed aluminum bag with 

desiccant 

Strips which are not used must be stored dry in the 

closed aluminum bag. 

english 8 

see expiry date; 

minimum shelf-life: 

four weeks; 

shelf-life in case of 

proper use and 

storage until expiry 

date 

after opening at 2 – 8 °C see expiry date; 

Conjugate ready-to-use solution at 2 – 8 °C 

Dilution buffer Unopened 

Avoid contamination e.g. by using sterile tips. 

after opening at 2 – 8 °C 

Discard cloudy solutions. 

Washing solution Concentrate after opening at 2 – 8 °C 

working dilution at 2 – 8 °C 

working dilution at room temperature 

Bottles used for the working dilution should be 

cleaned regularly. Discard cloudy solutions. 

Substrate ready-to-use solution at 2 – 8 °C, 

stored protected from light 

Avoid contamination e.g. by using sterile tips. 

Discard if solution turns yellow (extinction against 

aqua dest. > 0.25 OD). 

24 months as of 

production 



production 



production; 

24 months 


2 weeks; 

1 week 



production 

Stopping solution After opening at room temperature see expiry date 

Pos: 12 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für all e D okumente/ELISA classic/T estdurchführung/Überschrift: Durchführ ung @ 0\mod_1184679699953_18.doc @ 2473 @

7 TEST PROCEDURE SERION ELISA classic 

Pos: 13 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für all e D okumente/ELISA classic/T estdurchführung/Allgemeine Hi nweise ELISA cl assic @ 4\mod_1255343318159_18.doc @ 21256 @ 

7.1 Evidence of Deterioration 

Only use SERION ELISA classic reagents when using SERION ELISA classic 

immunoassays. The components must not be exchanged for reagents of other 

manufacturers. Standard and control sera of SERION ELISA classic immunoassays are 

defined exclusively for the test kit to be used and must not be used in other lots. Dilution 

buffer, washing solution, substrate and stop solution can be used for all SERION ELISA 

classic immunoassays irrespective of the lot and the test. 

There are three different conjugate concentrations for each immunoglobulin class: LOW, 

MEDIUM, HIGH. The classification is written on each label as follows: 

e.g. IgG + low concentrated IgG conjugate 

IgG ++ medium concentrated IgG conjugate 

IgG +++ high concentrated IgG conjugate 

In rare cases the use of special conjugate is necessary to guarantee consistent quality of 

our products. Special conjugates are produced in a separate lot and do not carry the “+” 

sign and are not exchangeable with other conjugates. 

Please pay close attention to information on labels! 

Unopened, all components of the SERION ELISA classic tests may, if stored accordingly, 

be used up to the expiry dates given on the labels. Reagents may not be used after date of 

expiry. 

Dilution or alteration of the reagents may result in a loss of sensitivity. 

Avoid exposure of reagents to strong light during storage and incubation. Reagents must 

be tightly closed after use to avoid evaporation and contamination. 

To open the aluminum bag of the microtiter plate please cut off the top of the marked side 

only, in order to guarantee proper reclosing. Do not use the strips if the aluminum bag is 

damaged or if the bag with remaining strips and desiccant was not properly reclosed. 

Use aseptic techniques when removing aliquots from the reagent tubes to avoid 

contamination. To avoid false positive results ensure not to contact or splash the top-walls 

of wells while pipetting conjugate. Take care not to mix the caps of the bottles and/or vials. 

Reproducibility of test results is dependent on thorough mixing of the reagents. Agitate the 

flasks containing control sera before use and also all samples after dilution (e.g. by using a 

vortex mixer). 

Be sure to pipette carefully and comply with the given incubation times and temperatures. 

Significant time differences between pipetting the first and last well of the microtiter plate 

english 9 

EN 

EL EN 

CS PT

when dispensing samples and control sera, conjugate or substrate can result in different 

pre-incubation times, which may influence the precision and reproducibility of the results. 

Optimum results can only be achieved if the instructions are strictly followed. 

The SERION ELISA classic immunoassay is only valid if the lot-specific validation criteria 

on the quality control certificate are fulfilled. 

Adequate washing avoids test unspecificities. Therefore, the washing procedure should be 

carried out carefully. All of the flat bottom wells should be filled with equal volumes of 

washing buffer. At the end of the procedure ensure that the wells are free of all washing 

buffer in order to avoid uncontrolled dilution effects. Avoid foaming! 

Take care not to damage the inscription (pathogen / antibody class) on the microtiter test 

strips during washing and aspiration to avoid confusion. 

Pos: 14 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für mehrer e D okumente/T estdurchführ ung/Probenvor ber. und Lager ung (für ALLE Err eger auß er Borreli a, CM V, FSM E, H SV,Masern,Mumps,R öteln,VZ V) @ 8\mod_1263998040982_18.doc @ 28430 @ 

7.2 Sample Preparation and Storage 

Lipaemic, hemolytic or icteric samples (serum or plasma) should only be tested with 

caution. Obviously contaminated samples should not be tested. Serum or plasma (EDTA, 

citrate, heparin) collected according to standard laboratory methods are suitable samples. 

Samples must not be thermally inactivated. 

Pos: 15 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für all e D okumente/ELISA classic/T estdurchführung/Kapi tel überschrift Probenverdünnung @ 0\mod_1184679414434_18.doc @ 2313 @ 

7.2.1 Dilution of Samples 

Before running the test, patient samples (V1) must be diluted in dilution buffer (V2) as 

follows: 



(special dilution buffer B231-S1!) 

SERION ELISA classic Epstein-Barr Virus VCA IgG (dilution buffer B231) 

SERION ELISA classic Epstein-Barr Virus EBNA1 IgG (dilution buffer B231) 

Dilution buffer for SERION ELISA classic EBV EA IgG (B231-S1) is not exchangeable 

against the dilution buffer for SERION ELISA classic EBV VCA or EBNA1. 

V1 + V2 = 1 + 100 add 10 µl patient’s sample 

english 10 

each to 1000 µl dilution buffer 


After dilution and before pipetting into the microtiter plate the samples must be mixed 

thoroughly to prepare a homogenous solution. 

Pos: 18 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für nur ein D okument/Testdurchführ ung/Probenverdünnung/EBV: Pr obenver dünnung, T eil 2 Ü berschrift @ 0\mod_1188369220721_18.doc @ 6550 @


Dokumente/Testdurchführung/Probenverdünnung: IgM-Nachweis) Pos: 19 /Arbeitsanleitungen @ 0\mod_1184684696270_18.doc ELISA classic/Gültig für Rheumafaktor-Interferenz @ mehrere 2766 @ 

(für Tests mit 

Interference with rheumatoid factors 

Rheumatoid factors are autoantibodies mainly of the IgM class, which preferably bind to 

IgG immune complexes. The presence of non-specific IgM antibodies (rheumatoid factors) 

can lead to false-positive results in the IgM assay. Furthermore, the possibility exists, that 

weak-binding pathogen-specific IgM antibodies may be displaced by stronger-binding IgG 

antibodies leading to a false negative IgM result. Therefore it is necessary to pretreat 

samples with rheumatoid factor-absorbens prior to IgM detection (SERION RF-Absorbent, 

Order Nr.: Z200 (20 ml/100 tests)). Rf-absorption is performed by incubation of the 

patient’s sample in Rf-dilution buffer for 15 minutes at room temperature or over night at 

4 °C. The test procedure is described in a separate instruction manual. 


Before running the test, rheumatoid factor-absorbent (V1) must be diluted 1+4 in dilution 

buffer (V2). 

V1 + V2 = V3 (1 + 4) add 200 µl Rf-absorbent 

english 11 

each to 800 µl dilution buffer 

Patient’s samples (V4) must be diluted in this Rf-dilution buffer (V3): 

V4 + V3 = 1+100 add 10 µl patient’s sample 

each to 1000 µl Rf-dilution buffer 


After dilution and before pipetting into the microtiter plate the samples must be mixed 

thoroughly to prepare a homogenous solution. 

Pos: 22 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für all e D okumente/ELISA classic/T estdurchführung/Pr obenlager ung @ 4\mod_1255343526141_18.doc @ 21272 @ 

7.2.2 Sample Storage 

The patient’s samples should not be stored for more than 7 days at 2 – 8 °C. Extended 

storage is possible at ≤ -20 °C. Avoid repeated freezing and thawing of samples. Diluted 

samples can be stored at 2 – 8 °C for one week. 


classic/Testdurchführung/Reagenzienvorbereitung, Teil 1 @ 

4\mod_1255343795606_18.doc @ 21304 @ 

EN 

EL EN 

CS PT

7.3 Preparation of Kit Reagents 

Bring all reagents to room temperature before testing. 

7.3.1 Microtiter Test Strips 

The microtiter test strips in frames are packed with a desiccant in an aluminum bag. 

Take unrequired cavities out of the frame and put them back into the aluminum bag. 

Close bag carefully to ensure airtight conditions. 

7.3.2 Control Sera / Standard Sera 

Control and standard sera are ready-to-use and must not be diluted any further. For 

each test run - independent of the number of microtiter test strips to be used - 

control and standard sera must be included. The standard sera should be set up in 

duplicate. 


Do not treat control sera with Rf-absorbent. 

Pos: 25 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für all e D okumente/ELISA classic/T estdurchführung/Reagenzienvorberei tung, T eil 2 @ 4\mod_1255343884183_18.doc @ 21320 @ 33333 

7.3.3 Anti-human IgA, IgG or IgM AP-Conjugate (ready-to-use) 

Conjugates with the same concentration and of the same immunoglobulin class are 

interchangeable. Avoid contamination of ready-to-use conjugates e. g. by using 

sterile tips. 

7.3.4 Washing Solution 

Dilute washing buffer concentrate (V1) 1:30 with aqua dest. to a final volume of V2. 

Example: 

english 12 

Buffer concentrate (V1) Final volume (V2) 

33.3 ml 1000 ml 

1.0 ml 30 ml 

7.3.5 Dilution Buffer for Samples (ready-to-use) 

Special dilution buffer for SERION ELISA classic EBV EA IgG. 

7.3.6 Substrate (ready-to-use) 

Avoid contamination of the ready-to-use substrate solution e. g. by using sterile tips. 

7.3.7 Stopping Solution (ready-to-use) 

Pos: 26 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für all e D okumente/ELISA classic/T estdurchführung/Testabl auf/Ü berschrift Testablauf @ 0\mod_1180955922843_18.doc @ 733 @

7.4 Overview - Test Procedure 





quantitative 

In case of IgM detection absorption of rheumatoid factor, see No. 7.2.1; 

Incubation 15 minutes at room temperature or over night at 4°C 

english 13 

sample dilution 1 

(patient´s samples) 

1 + 100 

Pipette diluted samples and ready-to-use control / 

standard sera into the microtest wells (100 µl) 

 

INCUBATION 60 Min./ 37 °C 

moist chamber 

 

WASH (4 x 300 µl DIL WASH )² 

 

Pipette conjugate solution APC (100 µl) 

 


moist chamber 

 

WASH (4 x 300 µl DIL WASH )² 

 

Pipette substrate solution pNPP (100 µl) 

 


moist chamber 

 

Pipette stopping solution STOP (100 µl) 

 

READ EXTINCTION at 405 nm 

1 Special dilution buffers for the following SERION ELISA classic tests: 

Borrelia burgdorferi IgG, IgM, EBV EA IgG, Parvovirus B19 IgM and Hantavirus Puumala IgG, IgM 

os: 29 /Arbeitsanleitung en ELISA classic/Gültig für mehr ere D okumente/T estdurchführung/Manuell e T estdurchführung (für ALLE Erreger außer C oxi ella) @ 5\mod_1255349441824_18.doc @ 21511 @ 

2 For manual use: 

tap plate at the end of the wash procedure on paper towel. 

EN 

EL EN 

CS PT

7.5 Manual Test Procedure 

1. Place the required number of cavities in the frame and prepare a protocol sheet. 

2. Add each 100 µl of diluted sample or ready-to-use controls into the appropriate 

wells of microtiter test strips. Spare one well for substrate blank, e.g.: 

IgA/IgG/IgM quantitative 

well no. 

well A1 Substrate blank 

well B1 Negative Control 

well C1 Standard serum 

well D1 Standard serum 

well E1 Patient 1.... 

3. Sample incubation for 60 minutes (+/- 5 min) at 37 °C (+/- 1°C) in moist chamber 

4. After incubation wash all wells with washing solution (by automated washer or 

manually): 

- aspirate or shake out the incubation solution 

- fill each well with 300 µl washing solution 

- aspirate or shake out the washing buffer 

- repeat the washing procedure 3 times (altogether 4 times!) 

- dry by tapping the microtiter plate on a paper towel 

5. Addition of conjugate 

Add 100 µl of the ready-to-use IgA/IgG/IgM conjugate to the appropriate wells 

(except substrate blank) 

6. Conjugate incubation for 30 minutes (+/- 1 min)* at 37 °C (+/- 1 °C) in moist 

chamber. 

7. After incubation wash all wells with washing solution (see above) 

8. Addition of substrate 

Add 100 µl of ready-to-use substrate solution to each well (including well for 

substrate blank!) 

9. Substrate incubation for 30 minutes (+/- 1 min)* at 37 °C (+/- 1 °C) in moist 

chamber. 

10. Stopping of the reaction 

Add 100 µl stopping solution to each well, shake microtiter plate gently to mix. 

11. Read extinction 

Read optical desity (OD) within 60 minutes at 405 nm against substrate blank, 

reference wave length between 620 nm and 690 nm (e.g. 650 nm). 

_____________________ 

* Please note, that under special working-conditions internal laboratory adaptations of the 

incubation times may be necessary. 

Pos: 30 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für all e D okumente/ELISA classic/T estdurchführung/Automatische Testdurchführung @ 5\mod_1255350306938_18.doc @ 21543 @ 

english 14

7.6 Automated Test Procedure 

SERION ELISA are suited for processing on automats and evaluated for use with 

Immunomat TM as well as with DYNEX DSX ® and DS2 ® . The automated processing is 

performed analogous to manual use. Please note, that under special working-conditions 

internal laboratory adaptations of the incubation times may be necessary. 

Pos: 31 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für all e D okumente/ELISA classic/T estdurchführung/Positi vkontroll e / Richtigkeitskontroll e @ 8\mod_1260286311409_18.doc @ 27530 @ 

7.7 Positive Control / Accuracy Control 

For the periodic verification of the test method, in order to fulfil the requirements of 

laboratory internal quality management systems, we recommend using SERION ELISA 

controls to determine precision and accuracy of SERION ELISA classic test runs. The use 

of SERION ELISA controls is described in specific instruction manuals. 

Pos: 32 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für all e D okumente/ELISA classic/T estauswertung/Kapi tel überschrift: TESTAU SWER TUNG + Erreg er @ 1\mod_1197038305478_18.doc @ 11386 @ 

english 15 

EN 

EL EN 

CS PT

8 TEST EVALUATION 


Pos: 33 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für all e D okumente/ELISA classic/T estauswertung/Testauswertung: Ei n-Punkt-Quantifizi erung @ 4\mod_1255348099107_18.doc @ 21400 @ 

8.1 Single-Point Quantification with the 4PL Method 

Optimised assignment of extinction signals to quantitative values is guaranteed by using 

non-linear functions, which adjust a sigmoide curve without any further transformation to 

OD-values. Determination of antibody concentrations with the SERION ELISA classic is 

carried out by the 4 parameter logistic-log-model (4 PL) which is ideal for exact curvefitting. 

It is based on the formula: 

OD = A + 

1 + e 

english 16 

D - A 

B(C - ln Conc.) 

The parameters A, B, C, and D are representative for the exact shape of the curve: 

1. lower asymptote parameter A 

2. slope of the curve parameter B 

3. turning point parameter C 

4. upper asymptote parameter D 

For each lot the standard curve is evaluated by Institut Virion\Serion GmbH (Würzburg, 

Germany) in repeated test runs under optimal conditions. Time consuming and cost 

intensive construction of the standard curve by the user is not necessary. 

For evaluation of antibody concentrations a lot specific standard curve as well as a lot 

specific evaluation table is included with each SERION ELISA classic test kit. The 

evaluation software SERION evaluate as well as the Microsoft ® Excel-based software tool 

SERION activity are available on request. 

To compensate for normal test variations and also for test run control a standard serum is 

used in each individual test run. For this control serum a reference value with a validity 

range is determined by the quality control of the producer. Within this range a correct 

quantification of antibody concentration is ensured. 

Pos: 34 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für all e D okumente/ELISA classic/T estauswertung/Testauswertung: Testgültig kei tskriterien @ 4\mod_1255348317229_18.doc @ 21432 @

8.2 Criteria of Validity 

- The substrate blank must be < 0.25 OD. 

- The negative control must produce a negative test result. 

- By use of quantitative SERION ELISA classic tests the mean OD-value (after 

subtraction of the substrate blank!) of the standard serum must be within the validity 

range, which is given on the lot specific quality control certificate. 

- The variation of OD-values of the standard serum may not be higher than 20 %. 

If these criteria are not met, the test is not valid and must be repeated. 

Pos: 35 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für all e D okumente/ELISA classic/T estauswertung/Auswertung: Ü berschrift @ 0\mod_1180968661538_18.doc @ 970 @ 

8.3 Calculation SERION ELISA classic EBV VCA IgG/IgM, EBV EBNA1 IgG, 


Pos: 36 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für all e D okumente/ELISA classic/T estauswertung/Nichtautomatisierte Auswertung @ 4\mod_1255348011764_18.doc @ 21384 @ 

8.3.1 Non-automated Evaluation 

For the SERION ELISA classic test evaluation a lot-specific quality control certificate with 

standard curve and an evaluation table is included in the test kit so that the obtained OD 

values may be assigned to the corresponding antibody activities. The substrate blank must 

be substracted from all OD values prior to evaluation. 


s 

Method 1: Qualitative Evaluation 

To fix the cut-off ranges multiply the mean value of the measured standard OD with the 

numerical data of the quality control certificate (see special case formulas), e.g.: 

OD = 0.502 x MW(STD) with upper cut-off 

OD = 0.352 x MW(STD) with lower cut-off 

If the measured mean absorbance value of the standard serum is 0.64 OD, the range of 

the cut-off is in between 0.225-0.321 OD. 

english 17 

EN 

EL EN 

CS PT

Method 2: 


Continuous Determination of Antibody Activities using the Standard Curve 

So called interassay variations (day to day deviations and laboratory to laboratory 

deviations) are compensated by multiplication of the current measured value obtained with 

a patient’s sample with the correction factor F. This factor is calculated as follows: 

F = 

english 18 

OD-reference value (of standard serum) 

OD-current value (of standard serum) 

The procedure is necessary to adjust the current test level of the user with the lot-specific 

standard curve. First, daily deviations have to be corrected by calculating the correction 

factor F. 

1. The mean of the two OD-values of the standard serum has to be calculated and 

checked that it is within the given validity range. 

2. Calculation of the factor F: the given reference value is divided by the mean of the 

extinction of the standard serum: 

F = reference value extinction STD serum / mean value extinction STD serum. 

3. All measured values of patient’s samples are multiplied by F. 

4. Antibody activities in IU/ml or U/ml can be determined from the standard curve with 

the corrected values. 

Pos: 39 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für all e D okumente/ELISA classic/T estauswertung/Automatische Auswer tung @ 4\mod_1255347464244_18.doc @ 21352 @

8.3.2 Automatic Test Evaluation with Software SERION evaluate 

After input of the four parameters and the reference value of the standard serum, antibody 

activities are calculated online from processed and measured SERION ELISA classic test 

runs by the evaluation software SERION evaluate. 

If the optical density of the standard is out of the validity range, the following message will 

appear. 

„Standard values out of ranges in following groups: Group 1-24.” or 

„Standard values differ more than 20 % in following groups: Group 1-24.” 

In these cases the test run is invalid and should be repeated. 

Parameters and reference value need to be changed only if there is a change of lot 

(evaluation table shows parameters and reference values). Correct input of the lot specific 

data can be checked on the basis of the standard serum activity (in IU/ml or U/ml) 

assigned to the standard serum. The calculated mean value of the units has to correspond 

to the unit value indicated on the lot specific certificate. There is an automatic correction of 

the measured values. In the standard version the printout displays the following: 

Pos: 40 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für all e D okumente/ELISA classic/T estauswertung/Quantifi zierungsgrenzen @ 6\mod_1258098664276_18.doc @ 24400 @ 

8.4 Limits of Quantification 

Sample code 

OD-value 

IU/ml or U/ml 

Evaluation 

The limits of quantification are specified on the quality control certificate of the SERION 

ELISA classic test. The linearity of dilution within this range has been demonstrated in 

comprehensive evaluation studies. In case a patient sample shows a test result above the 

upper limit of quantification, the sample may be tested at a higher dilution. The thereby 

determined antibody activity must be multiplied by the additional dilution factor. 

Pos: 41 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für mehrer e D okumente/T estauswertung/Grenzwertber eich ( für T este mehrerer Ig-Klassen) @ 9\mod_1276070736543_18.doc @ 32155 @ 

8.5 Borderline Ranges 

The borderline ranges of the SERION ELISA classic EBV VCA IgG/IgM, EBV EBNA1 IgG, 

EBV EA IgG tests are specified on the quality control certificates and indicate the range for 

borderline test results. Values obtained, when testing a patient’s sample, which fall below 

this range indicate a negative test result; values above the borderline range are interpreted 

positive. In cases where the results are within the borderline range a definitive 

interpretation of the result is not possible. In such cases, the test should be repeated in 

parallel with a follow-up sample taken one to two weeks later (serum pair). 

Pos: 42 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für all e D okumente/ELISA classic/T estauswertung/Kapi tel überschrift: Interpretation der Ergebnisse @ 0\mod_1190013774869_18.doc @ 9940 @ 

english 19 

EN 

EL EN 

CS PT

8.6 Interpretation of Results 


Diagnosis of primary Infectious Mononucleosis (IM) is mainly by the detection of antibodies 

to the early antigen (EA) and against the protein complex known as the viral capsid 

antigen (VCA), the importance of which has been known for some time. Shortly after 

infection IgM antibodies directed against EA and VCA appear and then, as the acute 

infection resolves, diminish or disappear completely. In contrast, anti-VCA IgG, which is 

produced at almost the same time, persists life long although the levels of activity may 

vary. In the case of reactivation (for example following immunosuppression) there is a 

significant increase in the levels of both anti-EA IgG and anti-VCA IgG, and, in rare cases, 

VCA IgM may be detectable. 

Patients with Burkitt lymphoma and nasopharyngeal carcinoma have the same 

characteristic high levels of VCA IgG as seen in reactivations. In addition, the 

demonstration of VCA IgA antibodies provides supporting evidence in the diagnosis of 

nasopharyngeal carcinoma. Increased levels of anti-EA antibodies are likewise a 

characteristic feature in patients suffering from nasopharyngeal carcinoma or experiencing 

a reactivation. 

Several weeks following primary infection antibodies directed against the EBV nuclear 

antigen 1 (EBNA1) appear and remain detectable lifelong although they may disappear if 

the patient is immunosupressed. Alone, or in combination with VCA IgG antibodies, they 

are considered a marker for a past infection. A decline in EBNA1 IgG is frequently 

observed following virus reactivation. This is usually accompanied by an increase in VCA 

IgG activity while antibodies against early antigen reappear. 

Borderline results in the SERION ELISA classic EBNA1 IgG test in combination with 

positive results in the SERION ELISA classic EBV VCA IgG are interpreted as being 

positive and evidence of a long past infection. 

In around 25 % of cases of a fresh infection with CMV VCA IgM antibodies are produced 

which may result in the unusual antibody combination of EBNA1 IgG positive, VCA IgG 

positive and VCA IgM positive. The presence of EBNA1 IgG however is definitive evidence 

for a past infection with EBV. 

In the following table the various possible combinations of antibodies and their 

interpretation are listed. 

english 20

Basic interpretation scheme 

This basic interpretation scheme is mainly for differentiation between a seronegative 

immune status, primary infection and past infection by using the four most important 

serological markers EA IgG, VCA IgG, VCA IgM and EBNA1 IgG: 

EA IgG VCA IgM VCA IgG EBNA1 IgG Interpretation 

Pos: 44 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für all e D okumente/ELISA classic/T estauswertung/Kapi tel überschrift: Refer enzbereiche gesunder Pr obanden @ 8\mod_1258644290978_18.doc @ 26750 @ 

- - - - seronegativity 

+ - - - 

- + - - 

+ + - - 

+ + + - 

+ - + - 

- + + - 

- - + - 

- - + + 

- - - + 

++ - ++ + 

++ + ++ + 

8.7 Reference Range of healthy Individuals 

english 21 

acute / recent infection 

past infection 

reactivation 


Testing of random blood donor sera, collected in the region of southern Germany, with the 

SERION ELISA classic EBV VCA IgM / IgG, EBNA1 IgG and EA IgG resulted in the 

following distribution. From 131 sera tested with the SERION ELISA classic EBV VCA IgM, 

131 (100 %) were negative. 126 (96.2 %) were positive when tested with the SERION 

ELISA classic EBV VCA IgG, three (2.3 %) yielded a positive result and two (1.5 %) were 

evaluated as borderline. In addition, results from testing 131 sera in the SERION ELISA 

classic EBNA1 IgG were as follows; 120 sera (91.6 %) tested positive, and 11 (8.4 %) sera 

were negative. The ELISA classic EA IgG gave the following results: 28 (21.4 %) positive, 

11 (8.4 %) borderline and 92 sera (70.2 %) were negative. From these results a 

seroprevalence in the general population of >96 % is calculated. 

Pos: 46 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für all e D okumente/ELISA classic/Leistungsmer kmale/Kapi tel überschrift Leistungsmer kmale @ 0\mod_1184676089844_18.doc @ 2103 @ 

EN 

EL EN 

CS PT

9 PERFORMANCE CHARACTERISTICS 

Pos: 47 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für all e D okumente/ELISA classic/Leistungsmer kmale/Kapi tel überschrift: Sensiti vität und Spezi fität @ 0\mod_1190013251494_18.doc @ 9925 @ 

9.1 Sensitivity and Specificity 


For the evaluation of the SERION ELISA classic EBV VCA IgM, EBV VCA IgG and EBV 

EBNA1 IgG tests they were tested in a comparison study with several commercially 

available EBV ELISA tests. 


The SERION ELISA classic EBV EA IgG was evaluated against four other ELISA tests 

using a panel of 133 sera of which 38 were positive and 95 negative. As two of the tests (3 

& 4) displayed an extremely low sensitivity or specificity, only the other two remaining tests 

(1 & 2) were used for the comparison study. Discrepant results between these two tests 

and SERION ELISA classic EBV EA IgG were examined using immunoblot and dependant 

upon the immunoblot results assigned to the positive or negative serum panel. These 

serum panels were used to determine sensitivity, specificity, and positive and negative 

predictive values as well as the efficiency calculation. Borderline results were excluded 

from the calculation. 


EBV-EA-IgG 

english 22 


sensitivity 81.8 % 100 % 75.0 % 30.8 % 100.0 % 

specificity 97.6 % 81.0 % 85.7 % 100 % 3.6 % 

predictive-value (+) 93.1 % 77.6 % 77.4 % 100 % 34.1 % 

predictive value (-) 93.2 % 100 % 84.0 % 70.0 % 100 % 

efficiency 93.2 % 88.5 % 81.5 % 73.5 % 35.7 % 


155 serum samples with different antibody reactivities (positive panel of 78 and negative 

panel of 77 serum samples) were tested in an in house study in comparison to four other 

commercially available ELISA tests. Sera were defined positive and negative, respectively, 

when consistent results were found in 4 of 5 assays. Discrepant sera were analyzed by 

Immunoblot analysis and then categorized negative or positive, dependant upon the 

Immunoblot results. Sensitivity and specifity were calculated with these positive and 

negative panels while borderline results were not included in these calculations.


The SERION ELISA classic EBV VCA IgG was evaluated in an external study with 209 

positive serum samples and 71 negative serum samples in comparison to immunoblot. 

Sera classified as borderline were not included into the calculation of sensitivity and 

specificity. 

SERION ELISA classic EBV EBNA 1 IgG: 

Evaluation of SERION ELISA classic EBV EBNA 1 IgG was verified in comparison to the 

test of a competitor using a panel of 130 positive sera and a negative panel of 69 sera. 

Borderline test results were not included in sensitivity and specificity calculation. 

The results are summarized in the following table: 

EBV-VCA 

IgG assay 

english 23 


EBV-VCA 

IgM assay 

EBV-EBNA1 

IgG assay 

Sensitivity 98.1 % 97.4 % 98.5 % 

Specificity 98.5 % 97.3 % > 99 % 

Pos: 49 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für all e D okumente/ELISA classic/Leistungsmer kmale/Kapi tel überschrift Präzisi on @ 0\mod_1184676568397_18.doc @ 2118 @ 

EN 

EL EN 

CS PT

9.2 Reproducibility 


Intraassay reproducibility was determined by testing sera of different reactivities 20 times 

in one test run. Interassay reproducibility was determined by testing sera of different 

reactivities in 10 independent test runs. 

english 24 

Standard deviation 

Coefficient of Variation (CV %) = x 100 


Sample 

Mean Value 

(OD) 

Intraassay 

(CV %) 

Mean value 

Mean Value 

(OD) 

Interassay 

(CV %) 

weak positive 0.616 4.5 0.637 5.5 

positive 0.746 5.3 0.814 6.6 

strong positive 2.125 3.0 2.191 2.8 


Sample 

Mean Value 

(OD) 

Intraassay 

(CV %) 

Mean Value 

(OD) 

Interassay 

(CV %) 

positive 1.582 5.1 1.703 6.4 

strong positive 2.249 7.9 2.311 8.7 


Sample 

Mean Value 

(OD) 

Intraassay 

(CV %) 

Mean Value 

(OD) 

Interassay 

(CV %) 

weak positive 0.554 2.2 0.644 7.1 

positive 1.355 2.4 1.510 4.5 

strong positive 1.437 3.0 1.636 4.5


Sample 

Mean Value 

(OD) 

Intraassay 

(CV %) 

english 25 

Mean Value 

(OD) 

Interassay 

(CV %) 

weak positive 0.305 2.8 0.341 8.4 

positive 0.952 2.5 1.093 4.1 

strong positive 1.622 3.1 1.799 4.2 

Pos: 51 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für all e D okumente/ELISA classic/Allgemei ne Texte ELISA classic/Sicherheitsmaßnahmen @ 4\mod_1255337096255_18.doc @ 21190 @ 

10 SAFETY MEASURES 

10.1 Statements of Warning 

The SERION ELISA classic is designed for use by qualified personnel who are familiar 

with good laboratory practice. 

All kit reagents and human specimens should be handled carefully, using established good 

laboratory practice. 

- This kit contains human blood components. Although all control- and cut-off sera 

have been tested and found negative for anti-HIV-ab, HBs-Ag (Hepatitis B-Virussurface 

Antigen) and anti-HCV-ab, they should be considered potentially infectious. 

- Do not pipette by mouth. 

- Do not smoke, eat or drink in areas in which specimens or kit reagents are handled. 

- Wear disposable gloves, laboratory coat and safety glasses while handling kit 

reagents or specimens. Wash hands thoroughly afterwards. 

- Patient’s material and other potentially infectious material should be 

decontaminated after the test run. 

- Reagents should be stored safely and be unaccessible to unauthorized access e.g. 

children. 

- Stopping solution: corrosive (C); causes acid burn (R34) 

Use safety glasses, gloves and laboratory coat while handling! 

10.2 Disposal 

Please observe the relevant statutory requirements! 

Pos: 52 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für all e D okumente/ELISA classic/Liter atur/Kapitelüberschrift: Liter atur @ 0\mod_1190013903728_18.doc @ 9956 @ 

EN 

EL EN 

CS PT

11 REFERENCES 
















===== Ende der Stückliste ===== 

english 26

Mises à jour 

Veuillez prendre note des différences par rapport à la version précédente. 

Numéro de la version actuelle : V 22.11/12-1 

Version précédente : V 21.10/01-1 

Mise à jour dans la section : Mise à jour générale, 5, 7.2.1 





SOMMAIRE 

1 UTILISATION PRÉVUE 

2 PERTINENCE DU DIAGNOSTIC 

3 PRINCIPE DU TEST SERION ELISA classic 

4 COMPOSANTS DE LA TROUSSE 

5 PRODUITS NÉCESSAIRES MAIS NON FOURNIS 

6 STOCKAGE ET STABILITÉ 

7 PRINCIPLE DU TEST SERION ELISA classic 

7.1 Signe de détérioration 

7.2 Préparation et stockage de l'échantillon 

7.3 Préparation des réactifs de la trousse 

7.4 Aperçu général - Procédure de test 

7.5 Procédure de test manuelle 

7.6 Procédure de test automatisée 

7.7 Contrôle positif / Contrôle de la précision 

8 ÉVALUATION DU TEST 

8.1 Quantification en un point selon la méthode 4PL 

8.2 Critères de validité 

8.3 Calcul SERION ELISA classic EBV VCA IgG/IgM, EBV EBNA1 IgG, EBV EA IgG 

8.4 Limites de la quantification 

8.5 Fourchettes limites 

8.6 Interprétation des résultats 

8.7 Fourchette de références des personnes en bonne santé 

9 CARACTÉRISTIQUES DE PERFORMANCE 

9.1 Sensibilité et Spécificité 

9.2 Reproductibilité 

10 MESURES DE SÉCURITÉ 

10.1 Mises en garde 

10.2 Élimination 

11 RÉFÉRENCES 

Version actuelle nr.: V 22.11/12-1 

version précédente: V 21.10/01-1 

FR

Pos: 1 /Arbeitsanl eitung en ELISA classi c/Gültig für nur ein Dokument/U pdate/U pdate: EBV @ 3\mod_1234173447824_23.doc @ 18109 @ Pos: classic/Allgemeine @ 4\mod_1255336385816_23.doc 2 /Arbeitsanleitungen Texte ELISA @ classic/Einleitung classic/Gültig 21166 @ für "Enzymimmunoassay" 




Test immuno-enzymatique pour la détection des anticorps humains 

pour le diagnostic in vitro 


SERION ELISA classic Epstein-Barr Virus VCA IgG N o de commande: ESR1361G 

SERION ELISA classic Epstein-Barr Virus VCA IgM N o de commande: ESR1361M 

SERION ELISA classic Epstein-Barr Virus EBNA1 IgG N o de commande: ESR1362G 

SERION ELISA classic Epstein-Barr Virus EA IgG N o de commande: ESR1363G 

classic/Allgemeine 0\mod_1177351044007_23.doc Pos: 4 /Arbeitsanleitungen Texte ELISA @ classic/Kapitelüberschrift 171 classic/Gültig @ 1 für alle Dokumente/ELISA 


1 UTILISATION PRÉVUE 


Les tests SERION ELISA classic Epstein-Barr Virus EA IgG, VCA IgG, IgM et EBNA1 IgG 

sont des tests immuno-enzymatiques qualitatifs et quantitatifs pour le détection des 

anticorps humains dans le sérum ou le plasma dirigés contre les composants du virus 

Epstein-Barr (EBV). Le SERION ELISA classic Epstein-Barr Virus EA IgG et le SERION 

ELISA classic EBV VCA IgM sont recommandés pour la détection des infections aiguës ou 

les réactivations. Le SERION ELISA classic Epstein-Barr Virus VCA IgG permet d'identifier 

les infections primaires et récentes. Le SERION ELISA classic EBNA1 IgG est 

recommandé pour l'identification des infections passées. 

Pos: 6 /Arbeitsanl eitung en ELISA classi c/Gültig für alle D okumente/ELISA cl assic/Allgemei ne T exte ELISA cl assic/Kapitelüberschrift "Diag nostische Bedeutung" @ 0\mod_1177351537598_23.doc @ 222 @ 1 

2 PERTINENCE DU DIAGNOSTIC 


Le virus Epstein-Barr (EBV) est un virus pathogène pour l'humain appartenant à la famille 

des Herpèsvirus. On le retrouve dans le monde entier et, comme tous les herpèsvirus, la 

prévalence dans la population générale est élevée, atteignant 90 à 95 % dans la 

population adulte. Dans les pays en voie de développement, l'infection primaire se fait 

généralement au cours de la première année de vie et ne présente souvent pas de 

symptômes. Par contre, dans les pays avec des normes d'hygiène élevées, l'infection 

primaire a eu lieu principalement chez les adolescents et les jeunes adultes. La majorité 

des infections ont lieu entre 15 et 20 ans et environ 50 % des personnes infectées 

développeront une mononucléose infectieuse. La transmission s'effectue généralement à 

travers l'échange de salive, même si d'autres voies sont possibles, comme lors de 

l'utilisation de produits sanguins ou la greffe de moelle osseuse. 

Au cours de l'infection primaire, les glandes salivaires sont initialement touchées et le virus 

atteint le nez et la gorge à travers la salive. À ce stade, les symptômes de l'infection 

ressemblent à la grippe. Le virus est disséminé à travers tout le corps par l'intermédiaire 

des lymphocytes B infectés, qui sont normalement contrôlés par le système immunitaire, 

mais qui sont stimulés, par le virus, pour proliférer. Ces lymphocytes B infectés dans le 

sang périphérique sont caractéristiquement atypiques avec des formes variables, un 

cytoplasme basophile remarquable et un noyau évident. Avec l'évolution de la maladie, 

elle peut se manifester sous forme de forte fièvre, de splénomégalie, de lymphadénite, de 

trombocytopénie et d'hépatite. Étant donné la stratégie de dissémination et de 

transmission du virus, qui se fait principalement par la salive, la mononucléose infectieuse 

(MI) ou la fièvre glandulaire a également été appelée la "maladie du baiser". 

français 2

Dans de rares cas, une infection MI aiguë peut conduire à un état de maladie chronique 

active. Dans de tels cas, les symptômes de la MI peuvent rester pendant une très longue 

période. La pathogenèse de cette complication n'est pas claire, même si une 

prédisposition génétique et/ou une infection avec une souche particulièrement lytique du 

virus sont suspectées. 

Une autre maladie rare est la MI chronique qui, contrairement à une infection aiguë 

chronique, suite à la disparition des symptômes et une période de latence, qui peut durer 

plusieurs années, se réactive avec quelque fois des conséquences fatales. Les raisons et 

les causes derrière ces cas ne sont pas claires. 

Certains troubles génétiques tels que le syndrome lymphoprolifératif lié au chromosome X 

(XLP) peuvent entraîner une prolifération incontrôlée des cellules B suite à une infection 

EBV, ce qui conduit fréquemment à une infection chronique. 

La suppression médicale du système immunitaire, telle que celle utilisée chez les patients 

greffés, peut entraîner une réactivation du virus latent ou augmenter la probabilité d'une 

infection primaire, ce qui entraîne, à son tour, un rejet du greffon induit par l'EBV. Les 

patients atteints du SIDA sont également, étant donné leurs maladies immunitaires sous 

jacente, plus susceptibles à une infection ou des réactivations. 

Dans certaines régions géographiques, l'EBV est étroitement associé avec l'incidence du 

cancer rhino-pharyngien. Ce cancer du pharynx, du nez et de la gorge, est constitué de 

cellules épithéliales non différenciées et a une tendance naturelle à développer des 

métastases. La maladie est présente partout dans le monde mais elle est particulièrement 

commune dans les régions de la chine du sud. La prédisposition génétique, aussi bien que 

les aspects environnementaux, tels que le régime alimentaire sont considérés comme des 

co-facteurs. 

Le lymphome de Burkitt (BL) est également une tumeur associée à l'EBV, principalement 

dans les régions géographique de l'Afrique et la Papouasie Nouvelle-guinée. Cette tumeur 

monoclonale des cellules B est également associée avec des zones à forte incidence de 

paludisme et chez plus de 90 % de ces tumeurs, on peut démontrer la présence du virus 

EB. L'effet de l'infection au plasmodium falciparum sur la réponse immunitaire incite à 

penser que le paludisme est un co-facteur du BL. Des cas sporadiques de BL se 

produisent dans d'autres régions, cependant, dans de tels cas, l'EBV est moins 

fréquemment détecté et d'autres co-facteurs, tels que des changements génétiques, par 

translocation chromosomique, sont probablement responsables de la tumeur. 

La réponse des anticorps à une infection EBV est extrêmement variable à cause de la 

complexité du virus et l'hétérogénéité des différents stades de l'infection. Au cours de la 

phase active de l'infection, les anticorps dirigés contre environ 100 antigènes viraux sont 

produits. Ceci diminue à environ 10 au cours de l'infection latente (EBNA 1-6, Protéines 

membranaires tardives 1-3). En tenant compte de ceci, il y a eu une tendance vers le 

développement de systèmes de détection d'anticorps qui peuvent utiliser des composants 

uniques ou des protéines, plutôt que le virus en entier. De cette façon, il est possible de 

corréler la production des anticorps à certains antigènes et avec les différents stades de la 

maladie et la progression de la maladie. 

français 3 

FR

Figure 1 : Titres d'anticorps après infection EBV 

Source : http://www.viomecum.ch/de/konz/Infektiologie/393-394_EBV.html 

La figure 1 illustre une réponse immunitaire type, en termes de production d'anticorps, 

suite à une infection à l'EBV. Très tôt lors d'une infection, les IgM sont produits contre les 

antigènes précoces (AP). Les concentrations d'anticorps ont tendance à coïncider avec 

l'apparition des symptômes, et environ 2 semaines après l'infection initiale AP, la 

production d'IgG, VCA (Virus de la capside de l'antigène) IgM et VCA IgG commence. Les 

concentrations anti-VCA IgM les plus élevées sont détectées environ 3 semaines après 

l'apparition des symptômes. Les IgG AP sont souvent détectables pendant un temps 

considérable après l'infection. Par la suite, les concentrations d'anticorps VCA IgM, et plus 

tard d'IgG AP, diminuent. Les concentrations d'IgG anti-VCA atteignent un pic après 

environ 6 semaines après l'apparition des symptômes et restent à un niveau élevé tout au 

long de la vie. Après environ 3 semaines après l'apparition des symptômes, les anticorps 

IgG EBNA1, qui sont les indicateurs d'une infection passée, commencent à être produits et 

atteignent un pic autour de 7 mois et reste à un niveau élevé tout au long de la vie, suite à 

une infection EBV normale. La réactivation du virus (telle que l'immunosuppression) 

entraîne généralement une augmentation importante d'anticorps IgG AP, alors que les 

titres d'IgM VCA, n'augmentent que rarement. Ce n'est que très rarement, suite à une 

immunosuppression, que les IgG EBNA1 disparaissent, et donc, l'IgG AP est un bon 

marqueur de la réactivation. 

Pos: 8 /Arbeitsanl eitung en ELISA classi c/Gültig für alle D okumente/ELISA cl assic/T estprinzip/Testpri nzip ELISA classic @ 4\mod_1255342796551_23.doc @ 21209 @ 1 

symptômes 

hétérophile ak 

semaines 

VCA-IgM 

français 4 

mois 

années

3 PRINCIPE DU TEST SERION ELISA classic 

Le test ELISA (test utilisant un immunoadsorbant lié à une enzyme) est un test 

immunologique qui convient particulièrement à la détermination d'anticorps dans le 

domaine de la sérologie infectieuse. La réaction est basée sur l'interaction spécifique 

d‘anticorps avec les antigènes correspondants. Les puits de la microplaque de dosage des 

coffrets SERION ELISA classic sont coatés avec l’antigène spécifique du pathogène 

concerné. Si les anticorps contenus dans l'échantillon de sérum du patient sont présents, 

ils se lient à l'antigène fixé. Un anticorps secondaire, qui a été préalablement conjugué 

avec l'enzyme phosphatase alcaline, détecte le complexe immun et s'y lie. Le substrat 

incolore p-nitrophénylphosphate est ensuite transformé en un produit coloré, le pnitrophénol. 

L'intensité du signal de ce produit de réaction est proportionnelle à la 

concentration de l'analyte dans l'échantillon et elle est mesurée par une méthode 

photométrique. 


Zusammensetzung/EBV: Inhalt und Zusammensetzung @ 8\mod_1261062632666_23.doc @ 

28077 @ 1 

français 5 

FR

4 COMPOSANTS DE LA TROUSSE 

Composants pour le test Pièces / 

Volume 

Barrettes de huit puits unitaires coatés avec un antigéne (au total 96) MTP , 

1 cadre. 

Le produit de coating est inactivé. 

Sérum standard (prêt à l'emploi) STD , 

Protéine sérique humaine contenant du tampon phosphate; 

négatif pour l'Ac anti-VIH, HBs-Ag (antigène de surface du virus de l'hépatite B) et l'Ac 

anti-VHC; 

agent de conservation : < 0,1 % azoture de sodium; 

colorant : Amaranth O. 

Sérum pour le contrôle négatif (prêt à l'emploi) NEG , 

Protéine sérique humaine contenant du tampon phosphate; 

négatif pour l'Ac anti-VIH, HBs-Ag (antigène de surface du virus de l'hépatite B) et l'Ac 

anti-VHC; 


colorant : Vert de lissamine V. 

Conjugué anti IgA, anti IgG ou anti IgM humain (prêt à l'emploi) APC , 

IgA Anti-humain, IgG ou anticorps polyclonal IgM, 

conjugué à la phosphatase alcaline, stabilisé avec une solution contenant des 

protéines; 

agent de conservation : 0,01 % méthylisothiazolone, 0,01 % bromnitrodioxane. 

Concentré de solution de lavage (en quantité suffisante pour 1000 ml) WASH , 

Solution de chlorure de sodium avec Tween 20 et 30 mM Tris/HCl, pH 7,4; 

agent de conservation : < 0,1 % azoture de sodium. 

Tampon de dilution DILB ou tampon de dilution spécial S1 DILBS1 , 

(Tampon de dilution spécial pour SERION ELISA classic EBV EA IgG. 

Secouez juste avant utilisation!) 

Protéine contenant du tampon phosphate avec Tween 20 ( DILB ) 

et lysat de E. coli ( DILBS1 ); 


colorant : 0,01 g/l bleu de bromophénol. 

Solution d'arrêt STOP , 

Hydroxyde de sodium 1,2 N. 

Substrat (prêt à l'emploi) pNPP , 

Para-nitrophénylphosphate dans un solvant ne contenant pas de tampon; 

agent de conservation : < 0,1 % azoture de sodium 

(Le substrat, dans le flacon non ouvert, peut avoir une coloration légèrement jaunâtre, 

qui ne réduit pas la qualité du produit!) 

Certificat de contrôle de la qualité avec courbe d'étalonnage et tableau 

d'évaluation INFO , 

(quantification des anticorps en IU/ml ou U/ml). 

Pos: 10 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für mehrer e D okumente/Z usätzlich benötigte M aterialien/Z 200 Zusätzlich benötigte M aterialien (für T este mit IgM-Nachweis) @ 5\mod_1255348816988_23.doc @ 21465 @ 1 

français 6 

12 pièces 

2 x 2 ml 

2 ml 

13 ml 

33,3 ml 

2 x 50 ml 

15 ml 

13 ml 

2 pages

5 PRODUITS NÉCESSAIRES MAIS NON FOURNIS 

- équipement général de laboratoire 

- pour la détection d'IgM : SERION Rf-Absorbent, n o de commande Z200 (20 ml) 

- photomètre pour plaques de microtitration avec filtre, longueur d'onde 405 nm, 

longueur d'onde de référence recommandée 620 nm à 690 nm (par ex. 650 nm) 

- incubateur à 37 °C 

- chambre humide 

- eau distillée 

- Agrafes (n o de commande VT120) 

Pos: 11 /Arbeitsanleitungen ELISA classic/Gültig für alle Dokumente/ELISA classic/Lagerung und 

Haltbarkeit/Lagerung und Haltbarkeit @ 4\mod_1255343176800_23.doc @ 21241 @ 1 

français 7 

FR

6 STOCKAGE ET STABILITÉ 

Réactif Stockage Stabilité 

Barrettes de 

microtitration (coatées 

avec un antigène) 

Sérum de contrôle / 

Sérum standard 

Avant ouverture 

après ouverture, entre 2 °C et 8 °C dans sachet en 

aluminium fermé avec déshydratant 

Les barrettes non utilisées doivent être stockées dans 

un endroit sec, dans des sachets en aluminium 

fermés. 

français 8 

voir la date 

d'expiration; 

durée minimale de 

stockage : quatre 

semaines; 

durée de stockage en 

cas d'utilisation selon 

les consignes et 

stockage jusqu'à la 

date d'expiration 

après ouverture entre 2 °C et 8 °C voir la date 

d'expiration; 

Conjugué solution prête à l'emploi entre 2 °C et 8 °C 

Tampon de dilution Avant ouverture 

Évitez les contaminations, par ex., en utilisant des 

barrettes stériles. 

Après ouverture entre 2 °C et 8 °C 

Jetez les solutions troubles. 

Solution de lavage Concentrée, après ouverture entre 2 °C et 8 °C 

Diluée , entre 2 °C et 8 °C 

Diluée à température ambiante 

Les flacons utilisés pour effectuer la dilution 

d'utilisation doivent être régulièrement nettoyées. 

Jetez les solutions troubles. 

Substrat solution prête à l'emploi entre 2 °C et 8 °C, 

stockez à l'abri de la lumière 

Évitez les contaminations, par ex., en utilisant des 

barrettes stériles. 

Jetez la solution si elle devient jaunâtre (Différence 

de DO comparée à l’eau distillée : > 0,25 DO). 

24 mois à partir de la 

date de fabrication 

voir la date 

d'expiration; 



voir la date 

d'expiration; 


date de fabrication; 

24 mois 

voir la date 

d'expiration; 

2 semaines 

1 semaine 

voir la date 

d'expiration; 



Solution d'arrêt Après ouverture à température ambiante voir la date d'expiration 

Pos: 12 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für all e D okumente/ELISA classic/T estdurchführung/Überschrift: Durchführ ung @ 0\mod_1184679699953_23.doc @ 2474 @ 1

7 PRINCIPLE DU TEST SERION ELISA classic 

Pos: 13 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für all e D okumente/ELISA classic/T estdurchführung/Allgemeine Hi nweise ELISA cl assic @ 4\mod_1255343318159_23.doc @ 21257 @ 2 

7.1 Signe de détérioration 

Seuls les réactifs SERION ELISA classic doivent être utilisés avec les coffrets SERION 

ELISA classic. Les composants ne doivent pas être échangés avec des réactifs provenant 

d'autres fabricants. Le sérum standard etle sérum contrôle des tests SERION ELISA 

classic sont définis exclusivement pour la trousse les contenant et ne doivent pas être 

utilisés avec d'autres lots. Le tampon de dilution, la solution de lavage, le substrat et la 

solution d'arrêt sont communs aux réactifs SERION ELISA classic indépendamment du lot 

ou l'analyse. 

Il existe trois concentrations de conjugués pour chaque classe d'immunoglobuline : 

FAIBLE, MOYENNE, ÉLEVÉE Cette classification est indiquée sur chaque étiquette de la 

façon suivante : 

ex., IgG + conjugué IgG à faible concentration 

IgG ++ conjugué IgG à concentration moyenne 

IgG +++ conjugué IgG à concentration élevée 

Dans de rares cas, l'utilisation d'un conjugué spécial est nécessaire pour garantir la même 

qualité pour tous nos produits. Les conjugués spéciaux sont préparés dans des lots 

distincts et ne portent pas le signe « + » et ne sont pas interchangeables avec les autres 

conjugués. 

Veuillez faire très attention aux informations figurant sur les étiquettes! 

S'ils sont toujours emballés et stockés selon les consignes, tous les composants du test 

SERION ELISA classic peuvent être utilisés jusqu'à la date d'expiration indiquée sur les 

étiquettes. Les réactifs ne doivent pas être utilisés après la date d'expiration. 

La dilution et la modification des réactifs peuvent entraîner une perte de sensibilité. 

Évitez d'exposer les réactifs à une lumière trop forte lors du stockage et l'incubation. Les 

réactifs doivent être bien fermés après utilisation pour éviter l'évaporation et la 

contamination. 

Pour ouvrir le sachet en aluminium de la plaque de microtitration, veuillez découper le haut 

du sachet à l'endroit indiqué, pour que vous puissiez fermer le sachet correctement après 

utilisation. Il ne faut pas utiliser les barrettes si le sachet en aluminium est endommagé ou 

si le sachet, contenant le reste des barrettes et le dessicant, n'a pas été correctement 

refermé. 

Prélevez le plus stérilement possible dans les tubes de réactif afin d'éviter toute 

contamination. Afin d'éviter les faux positifs, il faut s'assurer de ne pas toucher les parois 

supérieures des puits ou de les éclabousser lors du pipetage du conjugué. Il faut faire 

attention de ne pas mélanger les bouchons des bouteilles et/ou des flacons. 

français 9 

FR

Pour assurer la reproductibilité des résultats des tests, il faut bien mélanger les réactifs. 

Agitez les flacons contenant les sérums de contrôle avant de les utiliser, mais également 

tous les échantillons après dilution (par ex., à l'aide d'un mélangeur vortex). 

Assurez-vous de pipeter soigneusement et respectez les durées et températures 

d'incubation. S'il existe une différence de temps importante entre le pipetage du premier et 

du dernier puits de la plaque de microtitration, lors de la distribution des échantillons et 

des sérums de contrôle, du conjugué ou du substrat, on peut avoir des durées de pré 

incubation différentes qui influenceront la précision et la reproductibilité des résultats. 

Des résultats optimaux ne seront obtenus que si les consignes sont scrupuleusement 

respectées. 

Le test SERION ELISA classic n'est valable que si les critères de validation, spécifiques 

au lot en question, et figurant sur le certificat de contrôle de la qualité sont respectés. 

Un nombre suffisant de lavages permet d'éviter les résultats non spécifiques. Il est donc 

recommandé de soigneusement effectuer la procédure de lavage. Tous les puits à fond 

plat doivent être remplis avec un volume égal de tampon de lavage. À la fin de la 

procédure, assurez-vous que les puits ne contiennent plus de tampon de lavage afin 

d'éviter les effets de dilutions incontrôlées. Évitez de faire des bulles! 

Prenez soin de ne pas endommager l'inscription (pathogène/classe d'anticorps) figurant 

sur la plaque de microtitration au cours des étapes de lavage et d'aspiration afin d'éviter 

les confusions. 

Pos: 14 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für mehrer e D okumente/T estdurchführ ung/Probenvor ber. und Lager ung (für ALLE Err eger auß er Borreli a, CM V, FSM E, H SV,Masern,Mumps,R öteln,VZ V) @ 8\mod_1263998040982_23.doc @ 28431 @ 2 

7.2 Préparation et stockage de l'échantillon 

Les échantillons lipémique, hémolytique ou ictérique (sérum ou plasma) doivent être 

analysés avec réserve seulement. Les échantillons qui sont à l'évidence contaminés ne 

doivent pas être analysés. Le sérum ou le plasma (EDTA, citrate, héparine) recueillis 

selon les procédés standard de laboratoire sont des échantillons convenables. Les 

échantillons ne doivent pas être inactivés thermiquement. 

Pos: 15 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für all e D okumente/ELISA classic/T estdurchführung/Kapi tel überschrift Probenverdünnung @ 0\mod_1184679414434_23.doc @ 2314 @ 3 

7.2.1 Dilution des échantillons 

Avant d'effectuer le test, les échantillons patient (V1) doivent être dilués dans le tampon de 

dilution (V2) comme suit : 



tampon de dilution spécial B231-S1!) 

SERION ELISA classic Epstein-Barr Virus VCA IgG (tampon de dilution B231) 

SERION ELISA classic Epstein-Barr Virus EBNA1 IgG (tampon de dilution B231) 

Tampon de dilution pour le SERION ELISA classic EBV EA IgG (B231-S1) n'est pas 

remplaçable avec le tampon de dilution SERION ELISA classic EBV VCA or EBNA1. 

V1 + V2 = 1 + 100 ajouter 10 µl d'échantillon patient 

français 10 

chacun à 1000 µl de tampon de dilution 


Après dilution et avant le pipetage dans la plaque de microtitration, les échantillons doivent 

être bien mélangés pour obtenir une solution homogène. 



Pos: 19 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für mehrer e D okumente/T estdurchführ ung/Probenver dünnung: R heumafaktor-Interferenz (für T ests mit IgM-Nachweis) @ 0\mod_1184684696270_23.doc @ 2767 @ 

Interférence avec les facteurs rhumatoïdes 

Les facteurs rhumatoïdes sont des auto-anticorps appartenant principalement à la classe 

des IgM, qui se lient préférentiellement aux complexes immunitaires IgG. La présence des 

anticorps IgM non spécifiques (facteurs rhumatoïdes) peut entraîner des faux-positifs lors 

des tests IgM. En outre, la possibilité existe que des anticorps IgM à faible pouvoir de 

liaison et spécifiques à un pathogène donné peuvent être déplacés par des anticorps IgG 

qui se lient plus fortement. Ceci nous donne des faux-négatifs pour les résultats d'IgM. Il 

est donc nécessaire de pré-traiter les échantillons avec des absorbants de facteurs 

rhumatoïdes avant la détection des IgM (SERION RF-Absorbent, n o de commande : Z200 

(20 ml/100 tests)). L'absorption Rf est effectuée par incubation avec l'échantillon du patient 

dans le tampon de dilution Rf pendant 15 minutes, à température ambiante, ou pendant 

toute une nuit à 4 °C. La procédure du test est décrite dans un autre mode d'emploi. 


Avant d'effectuer le test, l'absorbant du facteur rhumatoïde (V1) doit être dilué dans le 

tampon de dilution (V2). 

V1 + V2 = V3 (1 + 4) ajouter 200 µl Rf-absorbant 

français 11 

chacun à 800 µl de tampon de dilution 

Échantillon patient (V4) doit être dilué dans ce tampon de dilution Rf (V3) : 

V4 + V3 = 1+100 ajouter 10 µl d'échantillon patient 

chacun à 1000 µl Rf-tampon de dilution 


Après dilution et avant le pipetage dans la plaque de microtitration, les échantillons doivent 

être bien mélangés pour obtenir une solution homogène. 

Pos: 22 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für all e D okumente/ELISA classic/T estdurchführung/Pr obenlager ung @ 4\mod_1255343526141_23.doc @ 21273 @ 3 

7.2.2 Stockage de l'échantillon 

Les échantillons des patients ne doivent pas être stockés pendant plus de 7 jours entre 2 

et 8 °C. Un stockage plus long peut se faire à ≤ -20 °C. Évitez les cycles de 

congélation/décongélation répétés. Les échantillons dilués peuvent être stockés entre 2 et 

8 °C pendant une semaine. 


classic/Testdurchführung/Reagenzienvorbereitung, Teil 1 @ 4\mod_1255343795606_23.doc @ 

21305 @ 233 

FR

7.3 Préparation des réactifs de la trousse 

Tous les réactifs doivent être à température ambiante avant leur utilisation. 

7.3.1 Barrettes de tests 

Les barrettes sont emballées dans un sachet en aluminium avec un produit 

dessicant. Enlevez seulement les puits dont vous avez besoin de la plaque et 

replacez le reste dans le sachet en aluminium. Refermez soigneusement le sachet 

pour qu'il soit étanche à l'air. 

7.3.2 Sérum de contrôle / Sérum standard 

Le sérum de contrôle et le sérum standard sont prêts à l'emploi et ne doivent pas 

être dilués. Pour chaque cycle de tests, indépendamment du nombre de barrettes 

devant être utilisées, les sérums de contrôle et standard doivent être mis dans la 

plaque. Le sérum standard doit être mis en double. 


Il ne faut pas traiter le sérum de contrôle avec l'absorbant Rf. 


7.3.3 IgA anti-humain, IgG ou conjugué IgM (prêt à l'emploi) 

Les conjugués ayant la même concentration et la même classe d'immunoglobuline 

sont interchangeables. Il fait éviter de contaminer les conjugués prêt à l'emploi, par 

ex., en utilisant des embouts stériles. 

7.3.4 Solution de lavage 

Diluez le concentré de tampon de lavage (V1) 1:30 avec de l'eau distillée jusqu'à un 

volume final de V2. 

Exemple : 

français 12 

Concentré de tampon (V1) Volume final (V2) 

33,3 ml 1000 ml 

1,0 ml 30 ml 

7.3.5 Tampon de dilution pour les échantillons (prêt à l'emploi) 

Tampon de dilution spécial pour SERION ELISA classic EBV EA IgG. 

7.3.6 Substrat (prêt à l'emploi) 

Il fait éviter de contaminer la solution de substrat prêt à l'emploi, par ex., en utilisant 

des embouts stériles. 

7.3.7 Solution d'arrêt (prête à l'emploi) 

Pos: 26 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für all e D okumente/ELISA classic/T estdurchführung/Testabl auf/Ü berschrift Testablauf @ 0\mod_1180955922843_23.doc @ 734 @ 2

7.4 Aperçu général - Procédure de test 





quantitatif 

Dans le cas de détection d'IgM de facteur rhumatoïde, voir No. 7.2.1; 

Incubation de 15 minutes à température ambiante ou toute une nuit à 4°C 

français 13 

dilution d'échantillon 1 

(échantillon de patient) 

1 + 100 

Déposez les échantillons dilués et les sérums contrôle/ 

standard prêts à l'emploi dans les puits (100 µl) 

 

INCUBATION 60 min à 37 °C 

chambre humide 

 

LAVAGE (4 x 300 µl DIL WASH )² 

 

Déposez le conjugué APC (100 µl) 

 



 

LAVAGE (4 x 300 µl DIL WASH )² 

 

Déposez le substrat pNPP (100 µl) 

 



 

Déposez la solution d'arrêt STOP (100 µl) 

 

LECTURE D'EXTINCTION à 405 nm 

1 Les tampons spéciaux pour les tests SERION ELISA classic suivants : 

Borrelia burgdorferi IgG, IgM, EBV EA IgG, Parvovirus B19 IgM et Hantavirus Puumala IgG, IgM 

2 Pour une utilisation manuelle : 

tapez la plaque, à la fin de la procédure de lavage, sur un papier absorbant. 

FR

Pos: 29 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für mehrer e D okumente/T estdurchführ ung/M anuelle Testdurchführ ung (für ALLE Erreg er auß er C oxiella) @ 5\mod_1255349441824_23.doc @ 21512 @ 2 

7.5 Procédure de test manuelle 

1. Placez le nombre de puits dont vous avez besoin dans le cadre et préparez une 

feuille de protocole. 

2. Déposez 100 µl d'échantillon dilué ou de contrôles prêts à l'emploi dans les 

puits appropriés. Laissez un puits pour le blanc du substrat, par ex., 

IgA/IgG/IgM quantitatif 

n o de puits 

puits A1 Blanc du substrat 

puits B1 Contrôle négatif 

puits C1 Sérum standard 

puits D1 Sérum standard 

puits E1 Patient 1.... 

3. Incubation de l'échantillon pendant 60 minutes (+/- 5 min) à 37 °C (+/- 1°C) dans 

une chambre humide 

4. Après incubation lavez tous les puits avec une solution de lavage (avec un laveur 

automatisé ou manuellement) : 

- aspirez ou enlevez la solution d'incubation en retournant la plaque 

- remplissez chaque puits avec 300 µl de solution de lavage 

- aspirez ou enlevez le tampon de lavage en retournant la plaque 

- répétez la procédure de lavage 3 fois (4 fois en tout!) 

- séchez la plaque de microtitration en la tapant sur un papier absorbant 

5. Ajout du conjugué 

Ajoutez 100 µl de conjugué IgA/IgG/IgM prêt à l'emploi aux puits appropriés (sauf le 

blanc du substrat) 

6. Incubation du conjugué pendant 30 minutes (+/- 1 min)* à 37 °C (+/- 1 °C) dans 

une chambre humide. 

7. Après incubation, lavez tous les puits avec la solution de lavage (voir plus haut) 

8. Ajout du substrat 

Ajoutez 100 µl de solution de substrat prête à l'emploi à chaque puits (y compris le 

puits pour le blanc de substrat!) 

9. Incubation du substrat pendant 30 minutes (+/- 1 min)* à 37 °C (+/- 1 °C) dans 

une chambre humide. 

10. Arrêt de la réaction 

Ajoutez 100 µl de solution d'arrêt à chaque puits, secouez doucement la plaque de 

microtitration pour mélanger. 

11. Lecture d'extinction 

Lisez la densité optique (DO) dans les 60 minutes à 405 nm par rapport à un blanc 

de substrat, longueur de référence entre 620 nm et 690 nm (ex. 650 nm). 

_____________________ 

* Veuillez noter que dans des conditions de manipulation particulières, il peut s'avérer 

nécessaire d'adapter les temps d'incubation selon le laboratoire. 

français 14

Pos: 30 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für all e D okumente/ELISA classic/T estdurchführung/Automatische Testdurchführung @ 5\mod_1255350306938_23.doc @ 21544 @ 2 

7.6 Procédure de test automatisée 

SERION ELISA est compatible avec un traitement sur automate et a été évalué quant à 

son utilisation avec Immunomat TM mais également avec DYNEX DSX ® et DS2 ® . Le 

traitement automatique est effectué de façon analogue à l'utilisation manuelle. Veuillez 

noter que dans des conditions de manipulation particulières, il peut s'avérer nécessaire 

d'adapter les temps d'incubation selon le laboratoire. 

Pos: 31 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für all e D okumente/ELISA classic/T estdurchführung/Positi vkontroll e / Richtigkeitskontroll e @ 8\mod_1260286311409_23.doc @ 27531 @ 2 

7.7 Contrôle positif / Contrôle de la précision 

Pour la vérification périodique du procédé de test, pour satisfaire aux exigences des 

systèmes de gestion de la qualité internes des laboratoires, nous recommandons 

l'utilisation des SERION ELISA controls afin de déterminer la précision et la fiabilité des 

cycles de test du SERION ELISA classic. L'utilisation des SERION ELISA controls est 

décrite dans les modes d'emploi spécifiques. 

Pos: 32 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für all e D okumente/ELISA classic/T estauswertung/Kapi tel überschrift: TESTAU SWER TUNG + Erreg er @ 1\mod_1197038305478_23.doc @ 11387 @ 1 

français 15 

FR

8 ÉVALUATION DU TEST 


Pos: 33 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für all e D okumente/ELISA classic/T estauswertung/Testauswertung: Ei n-Punkt-Quantifizi erung @ 4\mod_1255348099107_23.doc @ 21401 @ 2 

8.1 Quantification en un point selon la méthode 4PL 

La transformation optimisée des signaux d'extinction en valeurs quantitatives est assurée 

par les fonctions non linéaires, qui permettent d'ajuster une courbe sigmoïde sans autre 

transformation des valeurs de DO. La détermination des concentrations d'anticorps avec le 

SERION ELISA classic est effectuée par le modèle logistique logarithmique à 4 

paramètres (4 PL) qui est idéal pour l'ajustement de courbe. Il est basé sur la formule : 

DO = A + 

1 + e 

français 16 

D - A 


Les paramètres A, B, C et D sont représentatifs de la forme exacte de la courbe : 

1. asymptote inférieure paramètre A 

2. gradient de la courbe paramètre B 

3. point d'inflexion paramètre C 

4. asymptote supérieure paramètre D 

Pour chaque lot, la courbe de référence est évaluée par l'Institut Virion\Serion GmbH 

(Würzburg, Allemagne) dans des cycles d'analyses dans des conditions optimales. On 

épargne ainsi à l'utilisateur le temps qu'il aurait consacré à tracer cette courbe ainsi que 

les coûts qui y sont liées. 

En ce qui concerne l'évaluation des concentrations d'anticorps, une courbe spécifique au 

lot ainsi qu'un tableau d'évaluation spécifique au lot sont fournis avec la trousse de test 

SERION ELISA classic. Le logiciel d'évaluation SERION evaluate et l'outil logiciel basé sur 

Microsoft ® Excel SERION activity sont disponibles sur demande. 

Afin de compenser les variations normales du test mais également pour le contrôle du 

test, un sérum de référence est utilisé dans chaque cycle de test. Pour ce sérum de 

contrôle, une valeur de référence avec une fourchette de validité est déterminée par le 

contrôle de la qualité du fabricant. Dans ces limites, une bonne quantification de la 

concentration des anticorps est assurée. 

Pos: 34 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für all e D okumente/ELISA classic/T estauswertung/Testauswertung: Testgültig kei tskriterien @ 4\mod_1255348317229_23.doc @ 21433 @ 2

8.2 Critères de validité 

- Le blanc du substrat doit avoir une DO < 0,25. 

- Le contrôle négatif doit donner un résultat de test négatif. 

- Avec l'utilisation des tests SERION ELISA classic la valeur de DO moyenne (après 

soustraction du blanc du substrat !) du sérum standard doit être dans les limites de 

la fourchette de validité, qui est indiqué sur le certificat de contrôle de la qualité 

spécifique au lot. 

- La variation des valeurs de DO du sérum standard ne doit pas dépasser 20 %. 

En cas de non respect de ces critères, le test n'est pas valide et doit être refait. 

Pos: 35 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für all e D okumente/ELISA classic/T estauswertung/Auswertung: Ü berschrift @ 0\mod_1180968661538_23.doc @ 971 @ 2 

8.3 Calcul SERION ELISA classic EBV VCA IgG/IgM, EBV EBNA1 IgG, 


Pos: 36 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für all e D okumente/ELISA classic/T estauswertung/Nichtautomatisierte Auswertung @ 4\mod_1255348011764_23.doc @ 21385 @ 3 

8.3.1 Évaluation non automatique 

Pour l'évaluation du test SERION ELISA classic, un certificat de contrôle spécifique à un 

lot donné, avec une courbe de référence et un tableau d'évaluation sont fournis avec la 

trousse, de sorte que les valeurs de DO obtenues peuvent être attribuées aux activités 

d'anticorps correspondantes. Le blanc du substrat doit être soustrait des valeurs de DO 

avant l'évaluation. 


s 

Méthode 1 : Évaluation qualitative 

Pour établir les fourchettes de seuil, multipliez la valeur moyenne des DO du standard 

mesurées par les données numériques du certificat de contrôle de la qualité (voir les 

formules des cas spéciaux), par ex. : 

OD = 0,502 x PM(STD) avec limite supérieure 

OD = 0,352 x PM(STD) avec limite inférieure 

Si la valeur d'absorbance moyenne mesurée du sérum standard est DO 0,64, la fourchette 

du seuil est de 0,225 à 0,321 DO. 

français 17 

FR

Méthode 2 : 


Détermination en continu des activités d'anticorps avec l'aide de la courbe de référence 

Les variations entre les tests (déviations de jour en jour et déviations entre laboratoires) 

sont compensées par multiplication de la valeur mesurée obtenue pour un échantillon de 

patient par le facteur de correction F. Ce facteur est calculé comme suit : 

F = 

français 18 

valeur de référence de DO (du sérum standard) 

valeur réelle de DO (du sérum standard) 

Cette procédure est nécessaire pour ajuster le niveau réel du test de l'utilisateur avec la 

courbe de référence spécifique au lot. Premièrement, les déviations journalières doivent 

être corrigées en calculant le facteur de correction F. 

1. La moyenne des deux valeurs de DO du sérum standard doit être calculée et il faut 

vérifier que cette valeur est dans les limites de la fourchette de validité. 

2. Calcul du facteur F : la valeur de référence donnée est divisée par la moyenne de 

l'extinction du sérum standard : 

F = valeur de référence d'extinction du sérum STD / valeur moyenne d'extinction du 

sérum STD. 

3. Toutes les valeurs mesurées pour les échantillons du patient sont multipliées par F. 

4. Les activités des anticorps en UI/ml ou U/ml peuvent être déterminées à partir de la 

courbe de référence, avec des valeurs corrigées. 

Pos: 39 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für all e D okumente/ELISA classic/T estauswertung/Automatische Auswer tung @ 4\mod_1255347464244_23.doc @ 21353 @ 3

8.3.2 Évaluation automatique du test avec le logiciel SERION evaluate 

Après saisie des quatre paramètres et de la valeur de référence du sérum standard, les 

activités des anticorps sont calculées en ligne à partir des séries de tests de SERION 

ELISA classic, traités et mesurés, par le logiciel d'évaluation SERION evaluate. 

Si la densité optique du standard est hors des limites de validité, le message suivant 

apparaîtra. 

„Valeurs de référence hors limite pour les groupes suivants : Groupe 1-24.” ou 

„Valeur de référence diffère de plus de 20 % dans les groupes suivants : Groupe 1-24.” 

Dans ces cas, la série de tests n'est pas valide et doit être refait. 

Les paramètres et la valeur de référence doivent être modifiés seulement s'il y a un 

changement de lot (le tableau d'évaluation contient les paramètres et les valeurs de 

référence). La vérification de la saisie correcte des données spécifiques au lot est basée 

sur la vérification de l'activité du sérum standard (en UI/ml ou U/ml). La valeur moyenne 

calculée des unités doit correspondre à la valeur unitaire indiquée sur le certificat 

spécifique au lot. Une correction automatique des valeurs mesurées est effectuée. Dans la 

version standard, les affichages à la sortie de l'imprimante sont les suivants : 

Pos: 40 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für all e D okumente/ELISA classic/T estauswertung/Quantifi zierungsgrenzen @ 6\mod_1258098664276_23.doc @ 24401 @ 2 

8.4 Limites de la quantification 

français 19 

Code d'échantillon 

Valeur de DO 

UI/ml ou U/ml 

Évaluation 

Les limites de quantification sont mentionnées sur le certificat de contrôle de la qualité du 

test SERION ELISA classic. La linéarité de la dilution dans les limites de cette fourchette a 

été démontrée lors des études d'évaluation complètes. Dans le cas où l'échantillon du 

patient donne un résultat au dessus de la limite supérieure de quantification, l'échantillon 

peut être testé à une dilution plus élevée. L'activité de l'anticorps ainsi déterminée doit être 

multipliée par un facteur de dilution additionnel. 

Pos: 41 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für mehrer e D okumente/T estauswertung/Grenzwertber eich ( für T este mehrerer Ig-Klassen) @ 9\mod_1276070736543_23.doc @ 32156 @ 2 

8.5 Fourchettes limites 

Les limites des fourchettes du test SERION ELISA classic EBV VCA IgG/IgM, EBV 

EBNA1 IgG, EBV EA IgG sont mentionnées sur le certificat de contrôle de la qualité et 

indique la fourchette pour les résultats limites des tests. Les valeurs obtenues, lors de 

l'analyse de l'échantillon du patient, qui sont en dessous de cette fourchette indiquent un 

résultat de test négatif; les valeurs qui sont au dessus sont interprétées comme des 

résultats positifs. Dans les cas où les résultats sont des la fourchette limite, une 

interprétation définitive du résultat n'est pas possible. Dans de tels cas, le test doit être 

refait en parallèle avec un échantillon prélevé une ou deux semaines plus tard (paire de 

sérum). 

Pos: 42 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für all e D okumente/ELISA classic/T estauswertung/Kapi tel überschrift: Interpretation der Ergebnisse @ 0\mod_1190013774869_23.doc @ 9941 @ 2 

FR

8.6 Interprétation des résultats 


Le diagnostic primaire de la mononucléose primaire (MI) se fait principalement par la 

détection d'anticorps anti-antigène précoce (AP) et contre le complexe protéique appelé 

l'antigène de la capside virale (VCA), dont l'importance est connue depuis quelque temps. 

Très peu de temps après une infection, les anticorps IgM dirigés contre AP et VCA 

apparaissent et ensuite, après disparition de l'infection aiguë, ils diminuent pour 

disparaître complètement. Par contre, l'IgG anti-VCA, qui est produit presque au même 

moment, persiste tout au long de la vie, bien que les niveaux d'activité peuvent varier. 

Dans le cas de la réactivation (par ex., suite à une immunosuppression) il y a une 

augmentation importante à la fois de l'IgG anti-AP et de l'IgG anti-VCA, et, dans de rares 

cas, des IgM anti-VCA peuvent être détectés. 

Les patients souffrant du lymphome de Burkitt et du cancer rhino-pharyngien, ont les 

mêmes niveaux élevés d'IgG VCA caractéristiques, qu'on voit lors des réactivations. En 

outre, la présence des anticorps IgA anti-VCA apporte des données pour le diagnostic du 

cancer rhino-pharyngien. Des niveaux élevés d'anticorps anti-AP sont, de la même façon, 

caractéristiques des patients souffrant du cancer rhino-pharyngien ou qui sont en 

réactivation. 

Plusieurs semaines après l'infection primaire, les anticorps dirigés contre l'antigène 

nucléaire 1 de l'EBV (EBNA1) apparaissent et restent détectables tout au long de la vie, 

même s'ils peuvent disparaître si le patient est immunosupprimé. Seuls, ou en présence 

des anticorps IgG anti-VCA, ils sont considérés comme un marqueur des infections 

passées. Une diminution de l'IgG EBNA1 est fréquemment observée suite à la réactivation 

du virus. Ceci est généralement accompagné par une augmentation de l'activité IgG anti- 

VCA alors que les anticorps contre les AP apparaissent. 

Les résultats limites lors du test SERION ELISA classic EBNA1 IgG en association avec 

des résultats positifs lors du test SERION ELISA classic EBV VCA IgG sont interprétés 

comme étant positifs et comme la preuve d'une infection passée. 

Dans environ 25 % des cas de nouvelle infection de CMV, les anticorps IgM anti-VCA sont 

produits ce qui peut entraîner une combinaison inhabituelle d'anticorps de IgG EBNA1 

positif, IgG VCA positif et IgM VCA positif. La présence d'IgG EBNA1 est cependant une 

preuve définitive d'une infection EBV passée. 

Dans le tableau suivant, sont présentées les diverses combinaisons d'anticorps possibles 

et de leur interprétation. 

français 20

Schéma d'interprétation de base 

Ce schéma d'interprétation de base est principalement destiné à différentier entre un 

statut immunitaire séronégatif, une infection primaire et une infection passée à l'aide des 4 

marqueurs sérologiques les plus importants EA IgG, VCA IgG, VCA IgM et EBNA1 IgG : 

EA IgG VCA IgM VCA IgG EBNA1 IgG Interprétation 

Pos: 44 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für all e D okumente/ELISA classic/T estauswertung/Kapi tel überschrift: Refer enzbereiche gesunder Pr obanden @ 8\mod_1258644290978_23.doc @ 26751 @ 2 

- - - - séronégativité 

+ - - - 

- + - - 

+ + - - 

+ + + - 

+ - + - 

- + + - 

- - + - 

- - + + 

- - - + 

++ - ++ + 

++ + ++ + 

8.7 Fourchette de références des personnes en bonne santé 

français 21 

infection aiguë ou récente 

infection antérieure 

réactivation 


Des tests sur des échantillons de sérum aléatoires provenant de donneurs de sang, 

prélevés dans la région du sud de l'Allemagne, avec le test SERION ELISA classic EBV 

VCA IgM / IgG, EBNA1 IgG et EA IgG nous donne la distribution suivante. Sur les 131 

sérums testés avec le SERION ELISA classic EBV VCA IgM, 131 (100 %) étaient négatifs. 

126 (96,2 %) étaient positifs lorsque testés avec le SERION ELISA classic EBV VCA IgG, 

3 (2,3 %) ont donné un résultat positif et 2 (1,5 %) ont été évalués comme limites. En 

outre, les résultats provenant du test de 131 sérums avec le SERION ELISA classic 

EBNA1 IgG sont les suivants: 120 sérums (91,6 %) positifs et 11 (8,4 %) sérums négatifs. 

Le test ELISA classic EA IgG a donné les résultats suivants : 28 (21,4 %) positifs, 11 

(8,4 %) limites et 92 sérums (70,2 %) négatifs. À partir de ces résultats, une 

séroprévalence supérieure à 96 % est calculée pour la population générale. 

Pos: 46 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für all e D okumente/ELISA classic/Leistungsmer kmale/Kapi tel überschrift Leistungsmer kmale @ 0\mod_1184676089844_23.doc @ 2104 @ 1 

FR

9 CARACTÉRISTIQUES DE PERFORMANCE 

Pos: 47 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für all e D okumente/ELISA classic/Leistungsmer kmale/Kapi tel überschrift: Sensiti vität und Spezi fität @ 0\mod_1190013251494_23.doc @ 9926 @ 2 

9.1 Sensibilité et Spécificité 


Pour l'évaluation des tests SERION ELISA classic EBV VCA IgM, EBV VCA IgG et EBV 

EBNA1 IgG, ils ont été testés dans une étude comparative avec plusieurs ELISA EBV 

disponibles dans le commerce. 

SERION ELISA classic EBV EA IgG : 

Le SERION ELISA classic EBV EA IgG a été évalué par rapport à 4 autres tests ELISA 

avec un panel de 133 sérums parmi lesquels 38 étaient positifs et 95 négatifs. Étant donné 

que 2 des tests (3 & 4) ont démontré une sensibilité ou une spécificité extrêmement faible, 

seuls les deux autres tests restants (1 & 2) ont été utilisés dans l'étude de comparaison. 

Les résultats non concordants entre ces deux tests et le SERION ELISA classic EBV EA 

IgG ont été examinés avec un immunoblot et selon les résultats de l'immunoblot, ils ont 

été mis dans le groupe des sérums positifs ou négatifs. Ces groupes de sérums ont été 

utilisés pour déterminer la sensibilité, spécificité et les valeurs prédictives, positives et 

négatives, aussi bien que l'efficacité du calcul. Les résultats limites ont été exclus du 

calcul. 


EBV-EA-IgG 

français 22 


sensibilité 81,8 % 100 % 75,0 % 30,8 % 100,0 % 

spécificité 97,6 % 81,0 % 85,7 % 100 % 3,6 % 

value prédictive (+) 93,1 % 77,6 % 77,4 % 100 % 34,1 % 

value prédictive (-) 93,2 % 100 % 84,0 % 70,0 % 100 % 

efficacité 93,2 % 88,5 % 81,5 % 73,5 % 35,7 % 

SERION ELISA classic EBV VCA IgM : 

155 échantillons de sérums ayant des réactivités d'anticorps différentes (groupe positif de 

78 et groupe négatif de 77 échantillons de sérums) ont été testés dans une étude interne 

en comparaison avec 4 autres tests ELISA disponibles dans le commerce. Les sérums ont 

été définis comme positifs ou négatifs, respectivement, lorsque des résultats cohérents ont 

été obtenus dans 4 essais sur 5. Les sérums discordants ont été analysés par immunoblot 

et ensuite catégorisés comme positifs ou négatifs, selon les résultats de l'immunoblot. La 

sensibilité et la spécificité ont été calculées avec des groupes positifs et négatifs, alors que 

les résultats négatifs n'ont pas été pris en compte lors de ces calculs. 

SERION ELISA classic EBV VCA IgG : 

Le test SERION ELISA classic EBV VCA IgG a été évalué lors d'une étude externe avec 

209 échantillons de sérums positifs, 71 échantillons de sérums négatifs, en comparaison 

avec l'immunoblot. Les sérums classés comme limites n'ont pas été utilisés pour le calcul 

de la sensibilité et de la spécificité.

SERION ELISA classic EBV EBNA 1 IgG : 

L'évaluation du SERION ELISA classic EBV EBNA 1 IgG a été vérifiée en comparaison 

avec le test d'un compétiteur avec un panel de 130 sérums positifs et un panel de 69 

sérums négatifs. Les résultats de tests limites n'ont pas été utilisés pour le calcul de la 

sensibilité et de la spécificité. 

Les résultats sont résumés dans le tableau suivant : 

Essai EBV-VCA 

IgG 

français 23 


Essai EBV-VCA 

IgM 

Essai EBV-EBNA1 

Sensibilité 98,1 % 97,4 % 98,5 % 

Spécificité 98,5 % 97,3 % > 99 % 

Pos: 49 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für all e D okumente/ELISA classic/Leistungsmer kmale/Kapi tel überschrift Präzisi on @ 0\mod_1184676568397_23.doc @ 2119 @ 2 

9.2 Reproductibilité 


La reproductibilité intra-essais a été déterminée en analysant des sérums ayant des 

réactivités différentes, 20 fois dans un même test. La reproductibilité inter-essais a été 

déterminée en analysant des sérums ayant des réactivités différentes, lors de 10 tests 

indépendants. 

Écart type 

IgG 

Coefficient de Variation (CV %) = x 100 

SERION ELISA classic EBV EA IgG : 

Valeur moyenne 

Échantillon 

Valeur 

moyenne 

(DO) 

Intra-essai 

(CV %) 


(DO) 

Inter-essai 

(CV %) 

Faiblement positif 0,616 4,5 0,637 5,5 

positif 0,746 5,3 0,814 6,6 

Fortement positif 2,125 3,0 2,191 2,8 

FR

SERION ELISA classic EBV VCA IgM : 

Échantillon 

Valeur 

moyenne 

(DO) 

Intra-essai 

(CV %) 

français 24 


(DO) 

Inter-essai 

(CV %) 

positif 1,582 5,1 1,703 6,4 


SERION ELISA classic EBV VCA IgG : 

Échantillon 

Valeur 

moyenne 

(DO) 

Intra-essai 

(CV %) 


(DO) 

Inter-essai 

(CV %) 


positif 1,355 2,4 1,510 4,5 


SERION ELISA classic EBV EBNA1 IgG : 

Échantillon 

Valeur 

moyenne 

(DO) 

Intra-essai 

(CV %) 


(DO) 

Inter-essai 

(CV %) 


positif 0,952 2,5 1,093 4,1 

Fortement positif 1,622 3,1 1,799 4,2 

Pos: 51 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für all e D okumente/ELISA classic/Allgemei ne Texte ELISA classic/Sicherheitsmaßnahmen @ 4\mod_1255337096255_23.doc @ 21191 @ 122

10 MESURES DE SÉCURITÉ 

10.1 Mises en garde 

Le test SERION ELISA classic est conçu pour être utilisé par un personnel compétent qui 

est familier avec les bonnes pratiques de laboratoire. 

Tous les réactifs de la trousse et les prélévements humains doivent être manipulés avec 

précaution, en usant des bonnes pratiques de laboratoire. 

- Cette trousse contient des composants du sang humain. Même si tous les sérums 

de contrôle et de seuil sont négatifs pour l'anticorps anti-VIH, HBs-Ag (Antigène de 

surface du virus de l'hépatite B) et l'anticorps anti-VHC, ils doivent être considérés 

comme potentiellement infectieux. 

- Il ne faut pas pipeter à la bouche. 

- Il ne faut pas fumer, consommer de la nourriture ou des boissons dans les endroits 

où les réactifs de la trousse ou les échantillons sont manipulés. 

- Utilisez des gants jetables et portez une blouse et des lunettes de protection lors de 

la manipulation des réactifs de la trousse ou des échantillons. Lavez-vous bien les 

mains après la manipulation. 

- Les échantillons de patient et autres produits potentiellement infectieux doivent être 

décontaminés après chaque série de tests. 

- Les réactifs doivent être stockés dans un endroit sûr et doivent être inaccessibles 

pour les personnes non autorisées, comme des enfants. 

- Solution d'arrêt : corrosif (C); provoque des brûlures acides (R34) 

Utilisez des lunettes de protection, des gants et une blouse lors de la manipulation! 

10.2 Élimination 

Veuillez respecter les dispositions légales pertinentes! 

Pos: 52 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für all e D okumente/ELISA classic/Liter atur/Kapitelüberschrift: Liter atur @ 0\mod_1190013903728_23.doc @ 9957 @ 1 

français 25 

FR

11 RÉFÉRENCES 
















=== Ende der Liste für T extmar ke Inhalt === 

français 26

Aggiornamenti 

Prestare attenzione alle differenze rispetto alla versione precedente. 

Versione attuale n.: V 22.11/12-1 

Versione precedente: V 21.10/01-1 

Aggiornamento del capitolo: Aggiornamento generale, 5, 7.2.1 


Epstein-Barr Virus VCA IgG/IgM, Epstein-Barr Virus EBNA1 IgG, 


INDICE 

1 CAMPO DI APPLICAZIONE 

2 RILEVANZA DIAGNOSTICA 

3 PRINCIPIO DEL TEST SERION ELISA classic 

4 COMPONENTI DEL KIT 

5 MATERIALI NECESSARI, MA NON FORNITI 

6 CONSERVAZIONE E STABILITÀ 

7 PROCEDURA PER IL TEST SERION ELISA classic 

7.1 Segni di deterioramento 

7.2 Preparazione e conservazione dei campioni 

7.3 Preparazione dei reagenti del kit 

7.4 Schema riassuntivo della procedura 

7.5 Procedura manuale 

7.6 Procedura automatica 

7.7 Controllo positivo / controllo di accuratezza 

8 VALUTAZIONE DEL TEST 

8.1 Quantificazione a singolo punto con il metodo 4PL 

8.2 Criteri di validità 

8.3 Calcolo SERION ELISA classic EBV VCA IgG/IgM, EBV EBNA1 IgG, EBV EA IgG 

8.4 Limiti di quantificazione 

8.5 Zona grigia 

8.6 Interpretazione dei risultati 

8.7 Valori di riferimento negli individui sani 

9 CARATTERISTICHE DI PRESTAZIONE 

9.1 Sensibilità e specificità 

9.2 Riproducibilità 

10 MISURE DI SICUREZZA 

10.1 Avvertenze 

10.2 Smaltimento 

11 BIBLIOGRAFIA 

versione attuale nr.: V 22.11/12-1 

versione precedente: V 21.10/01-1 

IT

Pos: 1 /Arbeitsanl eitung en ELISA classi c/Gültig für nur ein Dokument/U pdate/U pdate: EBV @ 10\mod_1322572463655_33.doc @ 45738 @ Pos: classic/Allgemeine @ 4\mod_1255336385816_33.doc 2 /Arbeitsanleitungen Texte ELISA @ classic/Einleitung classic/Gültig 21168 @ für "Enzymimmunoassay" 




Dosaggio immunoenzimatico per la determinazione degli anticorpi umani 

per uso diagnostico in vitro 


SERION ELISA classic Epstein-Barr Virus VCA IgG N. di ordinazione: ESR1361G 

SERION ELISA classic Epstein-Barr Virus VCA IgM N. di ordinazione: ESR1361M 

SERION ELISA classic Epstein-Barr Virus EBNA1 IgG N. di ordinazione: ESR1362G 

SERION ELISA classic Epstein-Barr Virus EA IgG N. di ordinazione: ESR1363G 

Pos: classic/Allgemeine 0\mod_1177351044007_33.doc 4 /Arbeitsanleitungen Texte ELISA @ 173 classic/Kapitelüberschrift classic/Gültig @ 1 für alle Dokumente/ELISA 


1 CAMPO DI APPLICAZIONE 


I test SERION ELISA classic Epstein-Barr Virus EA IgG, VCA IgG, IgM e EBNA1 IgG sono 

immunodosaggi quantitativi e qualitativi per la determinazione nel siero o nel plasma degli 

anticorpi umani diretti contro componenti del virus di Epstein-Barr (EBV). I test SERION 

ELISA classic Epstein-Barr Virus EA IgG e SERION ELISA classic EBV VCA IgM sono 

consigliati per la diagnosi delle infezioni acute e delle riattivazioni. Il test SERION ELISA 

classic Epstein-Barr Virus VCA IgG consente di individuare le infezioni primarie e recenti. 

Il test SERION ELISA classic EBNA1 IgG è consigliato per rilevare le infezioni pregresse. 

Pos: 6 /Arbeitsanl eitung en ELISA classi c/Gültig für alle D okumente/ELISA cl assic/Allgemei ne T exte ELISA cl assic/Kapitelüberschrift "Diag nostische Bedeutung" @ 0\mod_1177351537598_33.doc @ 224 @ 1 

2 RILEVANZA DIAGNOSTICA 


Il virus di Epstein-Barr (EBV) è un patogeno umano appartenente alla famiglia degli 

Herpesvirus, diffuso in tutto il mondo. Come per tutti gli Herpesvirus, la prevalenza nella 

popolazione generale è elevata: fino al 90-95% nella popolazione adulta. Nei Paesi in via 

di sviluppo, l’infezione primaria si verifica in genere nel primo anno di vita ed è spesso 

asintomatica. Al contrario, nei Paesi con standard igienici elevati, l’infezione primaria si 

verifica soprattutto negli adolescenti e nei giovani adulti. Si osserva un picco di infezione 

nella fascia d’età compresa tra 15 e 20 anni e circa il 50% delle persone infette sviluppa 

una mononucleosi infettiva. il virus si trasmette principalmente attraverso la saliva, ma 

sono possibili anche altre vie di trasmissione, ad esempio tramite emoderivati o trapianti di 

midollo osseo. 

Nell’infezione primaria sono interessate inizialmente le ghiandole salivari e con la saliva il 

virus raggiunge il naso e la gola. In questa fase, la sintomatologia è simil-influenzale. Il 

virus si dissemina nel’organismo tramite i linfociti B infetti, normalmente regolati dal 

sistema immunitario, ma stimolati alla proliferazione da parte del virus. I linfociti B infetti 

del sangue periferico sono atipici e presentano forme variabili, un citoplasma decisamente 

basofilo e un nucleo evidente. Con la progressione della malattia si possono osservare 

febbre elevata, splenomegalia, linfadenite, trombocitopenia ed epatite. A causa del tipo di 

disseminazione e trasmissione del virus, che avviene principalmente attraverso la saliva, 

la mononucleosi infettiva o febbre ghiandolare è anche stata chiamata “malattia del bacio”. 

Raramente, una mononucleosi acuta può sfociare in una malattia attiva cronica. In tal 

caso, la sintomatologia può persistere per periodi considerevoli. La patogenesi di questa 

italiano 2

complicanza non è nota, ma si sospettano una predisposizione genetica e/o un’infezione 

dovuta a un ceppo particolarmente litico. 

Un’altro quadro clinico raro è la mononucleosi cronica che, al contrario dell’infezione acuta 

cronica, dopo la risoluzione dei sintomi e un periodo di latenza che può durare diversi 

anni, si riattiva con conseguenze talvolta fatali. Le ragioni e cause di questo quadro clinico 

non sono note. 

Alcuni disturbi genetici, come l’XLPS (sindrome linfoproliferativa legata al cromosoma X), 

possono indurre una proliferazione incontrollata dei linfociti B in seguito all’infezione da 

EBV e spesso causano un’infezione cronica. 

L’immunosoppressione iatrogena, ad esempio in caso di trapianto, può riattivare il virus 

latente, o un'aumentata probabilità di infezione primaria può indurre il rigetto del trapianto 

a causa del virus EBV. Anche i pazienti affetti da AIDS sono più suscettibili all’infezione e 

alle riattivazioni a causa dell’immunodeficienza. 

In alcune aree geografiche, il virus EBV è strettamente associato all’incidenza del 

carcinoma nasofaringeo. Questo carcinoma che interessa faringe, naso e gola è composto 

da cellule epiteliali non differenziate e tende a metastatizzare. La malattia è diffusa in tutto 

il mondo, ma è particolarmente comune in determinate regioni della Cina meridionale. La 

predisposizione genetica e aspetti ambientali come l'alimentazione sono oggetto di 

discussione come cofattori di questo carcinoma. 

Anche il linfoma di Burkitt è un tumore associato al virus EBV, soprattutto in Africa e in 

Papua Nuova Guinea. Questo tumore monoclonale a cellule B è più frequente in regioni 

con elevata incidenza della malaria e in oltre il 90% dei tumori è presente il virus EBV. Gli 

effetti dell’infezione da plasmodio sulla risposta immunitaria rendono oggetto di 

discussione il ruolo della malaria come cofattore nel linfoma di Burkitt. Casi sporadici di 

linfoma di Burkitt si osservano anche in altre regioni, ma in questi casi si rileva meno 

comunemente il virus EBV e si ritiene che altri cofattori, come alterazioni genetiche dovute 

a traslocazione cromosomica, siano responsabili del tumore. 

La risposta anticorpale al virus EBV è estremamente variabile a causa della complessità 

del virus e dell’eterogeneità degli stadi dell’infezione. Durante la fase attiva dell’infezione 

vengono prodotti anticorpi diretti contro circa 100 diversi antigeni virali. Nell’infezione 

latente, la risposta è diretta contro circa 10 antigeni (EBNA 1-6, proteine tardive di 

membrana 1-3). Per questo, sono stati sviluppati sistemi di determinazione degli anticorpi 

che utilizzano singole componenti / proteine anziché il virus intero. In questo modo è 

possibile correlare la produzione di anticorpi diretti contro determinati antigeni con le varie 

fasi di malattia e con la sua progressione. 

italiano 3 

IT

Figura 1: Titoli anticorpali dopo infezione da EBV 

Fonte: http://www.viomecum.ch/de/konz/Infektiologie/393-394_EBV.html 

La Figura 1 riporta la risposta immunitaria tipica in termini di produzione di anticorpi dopo 

infezione da EBV. Nella fase iniziale si osserva la produzione di IgM dirette contro 

l’antigene precoce (EA) Le concentrazioni massime di anticorpi tendono a coincidere con 

l’esordio della sintomatologia e, circa due settimane dopo l’infezione iniziale, si assiste alla 

produzione di IgG anti-EA, IgM anti-VCA (Virus Capsid Antigen) e IgG anti-VCA. La 

concentrazione massima di IgM anti-VCA si osserva circa tre settimane dopo l’esordio dei 

sintomi. Le IgG anti-EA sono spesso rilevabili per periodi considerevoli dopo l’infezione. 

Successivamente, le concentrazioni di IgM anti-VCA e quindi di IgG anti-EA si riducono. 

Le IgG anti-VCA raggiungono un picco sei settimane dopo l’esordio della sintomatologia e 

persistono a livelli elevati per tutta la vita. Circa tre settimane dopo la comparsa dei sintomi 

vengono prodotti gli anticorpi IgG anti-EBNA1, indicatori di un’infezione pregressa, che 

raggiungono un picco dopo circa sette mesi e persistono a livelli elevati per tutta la vita 

dopo un’infezione normale da EBV. Una riattivazione del virus (a seguito di 

immunosoppressione) induce un aumento significativo delle IgG anti-EA, mentre i titoli 

delle IgM anti-VCA aumentano raramente. Le IgG anti-EBNA1 scompaiono solo 

occasionalmente dopo immunosoppressione; le IgG anti-EA rappresentano quindi un buon 

marcatore di riattivazione. 

Pos: 8 /Arbeitsanl eitung en ELISA classi c/Gültig für alle D okumente/ELISA cl assic/T estprinzip/Testpri nzip ELISA classic @ 4\mod_1255342796551_33.doc @ 21211 @ 1 

italiano 4

3 PRINCIPIO DEL TEST SERION ELISA classic 

Il test ELISA (Enzyme Linked Immunosorbent Assay, dosaggio immunoenzimatico) è un 

immunodosaggio particolarmente indicato per la determinazione degli anticorpi nel campo 

della sierologia infettiva. La reazione si basa sull’interazione specifica degli anticorpi con 

gli antigeni corrispondenti. Le strisce reattive della piastra per microtitolazione del test 

SERION ELISA classic sono rivestite con antigeni specifici dell’agente patogeno di 

interesse. Se il siero del paziente contiene gli anticorpi specifici, questi si legano 

all’antigene fissato sulle strisce. Un anticorpo secondario, coniugato con l’enzima fosfatasi 

alcalina, rileva e lega il complesso immune. Il substrato incolore p-nitrofenilfosfato è quindi 

convertito nel composto colorato p-nitrofenolo. L’intensità di segnale del prodotto della 

reazione è proporzionale alla concentrazione dell’analita nel campione e viene misurata 

con metodo fotometrico. 


Zusammensetzung/EBV: Inhalt und Zusammensetzung @ 8\mod_1261062632666_33.doc 

@ 28079 @ 1 

italiano 5 

IT

4 COMPONENTI DEL KIT 

Componenti del test Pezzi / 

volume 

Strisce reattive per microtitolazione separabili, ciascuna con otto pozzetti 

singoli rivestiti da antigene 

(96 in totale) MTP , 

1 telaio. 

Il materiale di rivestimento è inattivato. 

Siero standard (pronto per l’uso) STD 

Siero umano in tampone fosfato contenente proteine; 

negativo per anti-HIV Ab, HBs-Ag (antigene di superficie del virus dell’epatite B) e 

anti-HCV Ab; 

conservante: sodio azide < 0,1 %; 

colorante: amaranto O. 

Siero di controllo negativo (pronto per l’uso) NEG 

Siero umano in tampone fosfato contenente proteine; 

negativo per anti-HIV Ab, HBs-Ag (antigene di superficie del virus dell’epatite B) e 

anti-HCV Ab; 


colorante: verde di lissamina V. 

Coniugato anti- IgA, IgG o IgM umane (pronto per l’uso) APC 

Anticorpo policlonale anti-IgA, IgG o IgM umane, 

coniugato con fosfatasi alcalina, stabilizzato con soluzione stabilizzante contenente 

proteine; 

conservanti: metilisotiazolone 0,01 %, bromonitrodiossano 0,01 %. 

Soluzione di lavaggio concentrata (sufficiente per 1000 ml) WASH 

Soluzione di sodio cloruro con Tween 20 e Tris/HCl 30 mM, pH 7,4; 

conservante: sodio azide < 0,1 %, 

Tampone di diluizione DILB o tampone di diluizione speciale S1 DILBS1 

(Tampone di diluizione speciale per SERION ELISA classic EBV EA IgG. 

Agitare immediatamente prima dell’uso!) 

Tampone fosfato contenente proteine con Tween 20 ( DILB ) 

e lisato di E. coli ( DILBS1 ); 


colorante: blu di bromofenolo 0,01 g/l. 

Soluzione di arresto STOP 

Sodio idrossido 1,2 N 

Substrato (pronto per l’uso) pNPP 

Para-nitrofenilfosfato in tampone privo di solvente; 

conservante: sodio azide < 0,1 % 

(Il substrato nel flacone chiuso può avere un colore leggermente giallo, che non 

compromette la qualità del prodotto!) 

Certificato di controllo qualità con curva standard e tabella di valutazione INFO 

(Quantificazione degli anticorpi in UI/ml o U/ml). 

italiano 6 

12 pezzi 

2 x 2 ml 

2 ml 

13 ml 

33,3 ml 

2 x 50 ml 

15 ml 

13 ml 

2 pagine 

Pos: 10 /Arbeitsanleitungen ELISA classic/Gültig für mehrere Dokumente/Zusätzlich 

benötigte Materialien/Z200 Zusätzlich benötigte Materialien (für Teste mit IgM- 

Nachweis) @ 9\mod_1316422545600_33.doc @ 36493 @ 1

5 MATERIALI NECESSARI, MA NON FORNITI 

- normale equipaggiamento di laboratorio 

- per la determinazione delle IgM: adsorbente SERION Rf, n. di ordinazione Z200 

(20 ml) 

- fotometro per piastre da microtitolazione con filtro, lunghezza d’onda 405 nm, 

lunghezza d’onda di riferimento consigliata 620 nm - 690 nm (ad es. 650 nm) 

- incubatore a 37 °C 

- camera umida 

- acqua distillata 

- Click-Clips (n. di ordinazione VT120) 


classic/Lagerung und Haltbarkeit/Lagerung und Haltbarkeit @ 

4\mod_1255343176800_33.doc @ 21243 @ 1 

italiano 7 

IT

6 CONSERVAZIONE E STABILITÀ 

Reagente Conservazione Stabilità 

Strisce per 

microtitolazione 

(rivestite con 

antigene) 

Sieri di controllo / sieri 

standard 

non aperto 

dopo l’apertura a 2 – 8 °C nella busta di alluminio 

chiusa, con essiccante 

Le strisce non utilizzate devono essere conservate 

all’asciutto nella busta di alluminio chiusa. 

italiano 8 

vedere data di 

scadenza; 

validità minima: quattro 

settimane; 

validità in caso di uso 

e conservazione 

corretti fino alla data di 

scadenza 

dopo l’apertura a 2 – 8 °C vedere data di 

scadenza; 

Coniugato soluzione pronta per l’uso a 2 – 8 °C 

Tampone di diluizione non aperto 

Evitare le contaminazioni, ad es. utilizzando puntali 

sterili. 

dopo l’apertura a 2 – 8 °C 

Gettare via le soluzioni torbide. 

Soluzione di lavaggio concentrata dopo l’apertura a 2 – 8 °C 

alla diluizione di lavoro a 2 – 8 °C 

alla diluizione di lavoro a temperatura ambiente 

I flaconi usati per le diluizioni di lavoro devono essere 

lavati regolarmente. Gettare via le soluzioni torbide. 

Substrato soluzione pronta per l’uso a 2 – 8 °C, al riparo dalla 

luce 

Evitare le contaminazioni, ad es. utilizzando puntali 

sterili. 

Eliminare la soluzione se vira verso il giallo 

(estinzione contro acqua distillata > 0,25 OD).) 

24 mesi dopo la data 

di produzione 


scadenza; 


di produzione 


scadenza; 


di produzione; 

24 mesi 


scadenza; 

2 settimane; 

1 settimana 


scadenza; 


di produzione 

Soluzione di arresto dopo l’apertura a temperatura ambiente vedere data di 

scadenza 

Pos: 12 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für all e D okumente/ELISA classic/T estdurchführung/Überschrift: Durchführ ung @ 0\mod_1184679699953_33.doc @ 2476 @ 1

7 PROCEDURA PER IL TEST SERION ELISA classic 


7.1 Segni di deterioramento 

Utilizzare solo i reagenti SERION ELISA classic con gli immunodosaggi SERION ELISA 

classic. I componenti non devono essere sostituiti con reagenti di altri produttori. I sieri 

standard e di controllo degli immunodosaggi SERION ELISA classic sono destinati 

esclusivamente all’uso con il kit corrispondente e non devono essere utilizzati con altri lotti. 

Il tampone di diluizione, la soluzione di lavaggio, il substrato e la soluzione di arresto 

possono essere utilizzati con tutti gli immunodosaggi SERION ELISA classic, 

indipendentemente dal numero di lotto e dal test. 

Per ogni classe immunoglobulinica, il coniugato è disponibile in tre differenti 

concentrazioni: BASSA, MEDIA, ALTA. La concentrazione è riportata sull’etichetta nel 

modo seguente: 

ad es. IgG + coniugato IgG a concentrazione bassa 

IgG ++ coniugato IgG a concentrazione media 

IgG +++ coniugato IgG a concentrazione alta 

In casi rari è necessario utilizzare un coniugato speciale per garantire una qualità costante 

dei nostri prodotti. I coniugati speciali vengono prodotti con un numero di lotto distinto, non 

recano il segno “+” e non sono intercambiabili con altri coniugati. 

Prestare la massima attenzione alle informazioni riportate sull’etichetta! 

Finché sono chiusi e conservati correttamente, tutti i componenti dei test SERION ELISA 

classic possono essere utilizzati fino alla data di scadenza riportata sulle etichette. I 

reagenti non possono essere utilizzati dopo la data di scadenza. 

La diluizione o qualsiasi modifica apportata ai reagenti può comportare una perdita di 

sensibilità. 

Non esporre i reagenti alla luce intensa durante la conservazione e l’incubazione. Dopo 

l’uso, i reagenti devono essere chiusi saldamente per evitare l’evaporazione e la 

contaminazione. 

Per aprire la busta di alluminio della piastra per microtitolazione, tagliare solo l’estremità 

del lato appositamente contrassegnato, per poter richiudere correttamente la busta. Non 

utilizzare le strisce se la busta di alluminio risulta danneggiata o se la busta contenente le 

strisce rimanenti e l’agente essiccante non è stata richiusa correttamente. 

Per evitare contaminazioni, utilizzare tecniche asettiche per prelevare aliquote dalle 

provette dei reagenti. Per evitare risultati falsamente positivi, prestare attenzione a non 

toccare o bagnare con la pipetta la parte superiore delle pareti dei pozzetti quando si 

dispensa il coniugato. Prestare attenzione a non scambiare i tappi dei flaconi e/o dei 

flaconcini. 

Per ottenere risultati riproducibili, mescolare con cura i reagenti. Prima dell’uso, agitare i 

contenitori dei sieri di controllo e tutti i campioni dopo la diluizione (ad es. utilizzando un 

vortex). 

Pipettare con attenzione e attenersi ai tempi e alle temperature di incubazione indicati. Se, 

quando si dispensano i campioni e i sieri di controllo, il coniugato o il substrato, trascorre 

un arco di tempo significativo tra la pipettata nel primo pozzetto e la pipettata nell'ultimo 

pozzetto della piastra da microtitolazione, possono derivarne tempi di pre-incubazione 

differenti, con conseguenti effetti sulla precisione e la riproducibilità dei risultati. 

italiano 9 

IT

Solo attenendosi scrupolosamente alle istruzioni è possibile ottenere risultati ottimali. 

L’immunodosaggio SERION ELISA classic è valido solo se vengono rispettati i criteri di 

validazione specifici per ogni lotto, riportati nel certificato di controllo qualità. 

Un lavaggio corretto consente di evitare risultati non specifici. Pertanto, la procedura di 

lavaggio deve essere effettuata con cura. Riempire tutti i pozzetti a fondo piatto con volumi 

uguali di tampone di lavaggio. Al termine di questa procedura, assicurarsi che non 

rimangano residui del tampone di lavaggio nei pozzetti, per evitare effetti di diluizione non 

controllabili. Evitare la formazione di schiuma! 

Per evitare confusioni, prestare attenzione a non danneggiare la scritta (agente patogeno / 

classe anticorpale) sulle strisce reattive per microtitolazione durante le procedure di 

lavaggio e aspirazione. 


7.2 Preparazione e conservazione dei campioni 

I campioni lipemici, emolitici o itterici (siero o plasma) devono essere analizzati solo con 

cautela. Campioni contaminati non devono essere analizzati. Sono campioni idonei i 

campioni di siero o plasma (EDTA, citrato, eparina) prelevati secondo le metodiche 

standard di laboratorio. I campioni non devono essere sottoposti ad inattivazione termica. 


7.2.1 Diluizione dei campioni 

Prima dell’analisi, i campioni dei pazienti (V1) devono essere diluiti nel tampone di 

diluizione (V2) nel modo seguente: 



(tampone di diluizione speciale B231-S1!) 

SERION ELISA classic Epstein-Barr Virus VCA IgG (tampone di diluizione B231) 

SERION ELISA classic Epstein-Barr Virus EBNA1 IgG (tampone di diluizione B231) 

Il tampone di diluizione del test SERION ELISA classic EBV EA IgG (B231-S1) non è 

intercambiabile con il tampone di diluizione dei test SERION ELISA classic EBV VCA o 

EBNA1. 

V1 + V2 = 1 + 100 aggiungere 10 µl di campione del paziente 

italiano 10 

a ogni 1.000 µl di tampone di diluizione 


Dopo la diluizione e prima di dispensare i campioni nella piastra per microtitolazione, i 

campioni devono essere miscelati con cura per ottenere una soluzione omogenea. 



Pos: Dokumente/Testdurchführung/Probenverdünnung: mit IgM-Nachweis) 19 /Arbeitsanleitungen @ 9\mod_1316422765852_33.doc ELISA classic/Gültig für Rheumafaktor-Interferenz mehrere @ 36510 @ 

(für Tests 

Interferenza con i fattori reumatoidi 

I fattori reumatoidi sono autoanticorpi appartenenti principalmente alla classe IgM, che si 

legano preferenzialmente ai complessi immuni IgG. La presenza di anticorpi IgM non 

specifici (fattori reumatoidi) può causare risultati falsamente positivi nel dosaggio delle 

IgM. Inoltre, esiste la possibilità che gli anticorpi IgG con legame forte competano con gli 

anticorpi IgM patogeno-specifici con legame debole per il legame all’antigene adeso sulla 

micropiastra, di conseguenza gli anticorpi IgG si legano all’ antigene al posto degli 

anticorpi IgM patogeno-specifici ottenendo un risultato falsamente negativo per le IgM. 

Pertanto, è necessario pretrattare i campioni con un adsorbente del fattore reumatoide 

prima di determinare le IgM (SERION Rf-Absorbent, n. di ordinazione: Z200 (20 ml/100 

test)). Per l’adsorbimento del Rf, incubare il campione del paziente in tampone di 

diluizione Rf per 15 minuti a temperatura ambiente oppure per una notte a 4 °C. La 

procedura è descritta in un manuale di istruzioni distinto. 


Prima dell’analisi, l’adsorbente del fattore reumatoide (V1) deve essere diluito 1+4 nel 

tampone di diluizione (V2). 

V1 + V2 = V3 (1 + 4) aggiungere 200 µl di adsorbente Rf 

italiano 11 

a ogni 800 µl di tampone di diluizione 

I campioni dei pazienti (V4) devono essere diluiti in questo tampone di diluizione Rf (V3): 

V4 + V3 = 1+100 aggiungere 10 µl di campione del paziente 

a ogni 1.000 µl di tampone di diluizione Rf 


Dopo la diluizione e prima di dispensare i campioni nella piastra per microtitolazione, i 

campioni devono essere miscelati con cura per ottenere una soluzione omogenea. 


7.2.2 Conservazione dei campioni 

Non conservare i campioni dei pazienti per più di 7 giorni a 2 – 8 °C. Per una durata più 

lunga dei campioni conservare a temperature ≤ - 20 °C. Evitare di congelare e scongelare 

ripetutamente i campioni. I campioni diluiti possono essere conservati per una settimana a 

2 – 8 °C. 

classic/Testdurchführung/Reagenzienvorbereitung, 4\mod_1255343795606_33.doc Pos: 23 /Arbeitsanleitungen ELISA @ 21307 classic/Gültig @ 233 für Teil alle 1 Dokumente/ELISA 

@ 

IT

7.3 Preparazione dei reagenti del kit 

Portare tutti i reagenti a temperatura ambiente prima dell’uso. 

7.3.1 Strisce reattive per microtitolazione 

Le strisce reattive per microtitolazione inserite in un telaio sono confezionate in una 

busta di alluminio con un agente essiccante. Prelevare dal telaio i pozzetti non 

necessari e riporli nella busta di alluminio. Chiudere la busta con cura per garantire 

la chiusura ermetica. 

7.3.2 Sieri di controllo / sieri standard 

I sieri di controllo e i sieri standard sono pronti per l’uso e non devono essere 

ulteriormente diluiti. I sieri di controllo e i sieri standard devono essere inclusi in ogni 

analisi, indipendentemente dal numero di strisce reattive per microtitolazione 

utilizzate. I sieri standard devono essere analizzati in duplicato. 


Non trattare i sieri di controllo con l’adsorbente Rf. 


7.3.3 Coniugato AP anti- IgA, IgG o IgM umane (pronto per l’uso) 

I coniugati con la medesima concentrazione e della stessa classe 

immunoglobulinica sono intercambiabili. Evitare la contaminazione dei coniugati 

pronti per l’uso, ad es. utilizzando puntali sterili. 

7.3.4 Soluzione di lavaggio 

Diluire la soluzione di lavaggio concentrata (V1) 1:30 con acqua distillata, per un 

volume finale di V2. 

Esempio: 

italiano 12 

Tampone concentrato (V1) Volume finale(V2) 

33.3 ml 1.000 ml 

1.0 ml 30 ml 

7.3.5 Tampone di diluizione per campioni (pronto per l’uso) 

Tampone di diluizione speciale per SERION ELISA classic EBV EA IgG. 

7.3.6 Substrato (pronto per l’uso) 

Evitare la contaminazione della soluzione substrato pronta per l’uso, ad es. 

utilizzando puntali sterili. 

7.3.7 Soluzione di arresto (pronta per l’uso) 

Pos: 26 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für all e D okumente/ELISA classic/T estdurchführung/Testabl auf/Ü berschrift Testablauf @ 0\mod_1180955922843_33.doc @ 736 @ 2

7.4 Schema riassuntivo della procedura 




analisi quantitativa 

Per il rilevamento delle IgM eseguire l’adsorbimento del fattore reumatoide, vedere n. 

7.2.1; Incubare 15 minuti a temperatura ambiente o tutta la notte a 4°C 


italiano 13 

diluizione del campione 1 

(campioni dei pazienti) 

1 + 100 

Dispensare i campioni diluiti e i sieri di controllo / 

standard pronti per l’uso nei pozzetti per microtitolazione (100 µl) 

 

INCUBAZIONE 60 min/ 37 °C 

camera umida 

 

LAVARE (4 x 300 µl DIL WASH )² 

 

Dispensare la soluzione di coniugato APC (100 µl) 

 

INCUBAZIONE 30 min./ 37 °C 

camera umida 

 

LAVARE (4 x 300 µl DIL WASH )² 

 

Dispensare la soluzione di substrato pNPP (100 µl) 

 

INCUBAZIONE 30 min./ 37 °C 

camera umida 

 

Dispensare la soluzione di arresto STOP (100 µl) 

 

LEGGERE L’ESTINZIONE a 405 nm 

1 Tamponi di diluizione speciali per i seguenti test SERION ELISA classic: 

Borrelia burgdorferi IgG, IgM, EBV EA IgG, Parvovirus B19 IgM e Hantavirus Puumala IgG, IgM 


2 Per uso manuale: 

al termine della procedura di lavaggio, picchiettare la piastra su carta bibula. 

IT

7.5 Procedura manuale 

1. Collocare la quantità necessaria di pozzetti nel telaio e preparare un foglio 

protocollo. 

2. Aggiungere 100 µl di campione diluito o dei controlli pronti per l’uso nei 

pozzetti corrispondenti delle strisce reattive per microtitolazione. Lasciare vuoto un 

pozzetto per il bianco substrato, ad es.: 

IgA/IgG/IgM analisi quantitativa 

pozzetto n. 

pozzetto A1 Bianco substrato 

pozzetto B1 Controllo negativo 

pozzetto C1 Siero standard 

pozzetto D1 Siero standard 

pozzetto E1 Paziente 1… 

3. Incubare i campioni per 60 minuti (+/- 5 min) a 37 °C (+/- 1°C) in camera umida 

4. Dopo l’incubazione, lavare tutti i pozzetti con la soluzione di lavaggio (con 

dispositivo automatico o manualmente): 

- aspirare o gettare via la soluzione di incubazione rovesciando la piastra per 


- riempire ogni pozzetto con 300 µl di soluzione di lavaggio 

- aspirare o gettare via la soluzione di lavaggio rovesciando la piastra per 


- ripetere per 3 volte la procedura di lavaggio (per un totale di 4 lavaggi!) 

- asciugare picchiettando la piastra per microtitolazione su carta bibula 

5. Aggiunta del coniugato 

Aggiungere 100 µl del coniugato IgA/IgG/IgM pronto per l’uso ai pozzetti 

corrispondenti (ad eccezione del bianco substrato) 

6. Incubare il coniugato per 30 minuti (+/- 1 min)* a 37 °C (+/- 1 °C) in camera 

umida. 

7. Dopo l’incubazione, lavare tutti i pozzetti con la soluzione di lavaggio (come sopra) 

8. Aggiunta del substrato 

Aggiungere a ogni pozzetto 100 µl della soluzione di substrato pronta per l’uso 

(compreso il pozzetto per il bianco substrato!) 

9. Incubare il substrato per 30 minuti (+/- 1 min)* a 37 °C (+/- 1 °C) in camera umida. 

10. Arresto della reazione 

Aggiungere a ogni pozzetto 100 µl di soluzione di arresto e miscelare scuotendo 

leggermente la piastra per microtitolazione. 

11. Determinare l’estinzione 

Determinare la densità ottica (OD) entro 60 minuti a 405 nm contro il bianco 

substrato; lunghezza d’onda di riferimento tra 620 nm e 690 nm (ad es. 650 nm). 

_____________________ 

* Si prega di notare che, in particolari condizioni di lavoro, possono essere necessarie 

modifiche interne al laboratorio dei tempi di incubazione. 

Pos: 30 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für all e D okumente/ELISA classic/T estdurchführung/Automatische Testdurchführung @ 5\mod_1255350306938_33.doc @ 21546 @ 2 

italiano 14

7.6 Procedura automatica 

I SERION ELISA possono essere analizzati con strumenti automatici e validati sia con 

Immunomat TM , sia con DYNEX DSX ® e DS2 ® . L’analisi automatica viene effettuata 

analogamente alla procedura manuale. Si prega di notare che, in particolari condizioni di 

lavoro, possono essere necessarie modifiche interne di laboratorio ai tempi di incubazione. 


7.7 Controllo positivo / controllo di accuratezza 

Per la verifica periodica del metodo di analisi, in conformità ai requisiti dei sistemi di 

gestione qualità interni al laboratorio, raccomandiamo l’uso dei controlli SERION ELISA 

controls per determinare la precisione e l’affidabilità delle analisi effettuate con SERION 

ELISA classic. L’uso dei SERION ELISA controls è descritto nei manuali di istruzioni 

specifici. 


italiano 15 

IT

8 VALUTAZIONE DEL TEST 



8.1 Quantificazione a singolo punto con il metodo 4PL 

Una corrispondenza ottimale dei segnali di estinzione con i valori quantitativi è data dalle 

funzioni non lineari, che consentono di correlare le curve sigmoidali direttamente, senza 

ulteriore trasformazione, ai valori OD. La determinazione della concentrazione anticorpale 

con il SERION ELISA classic viene effettuata con il modello logistic-log a 4 parametri (4 

PL), ideale per una corrispondenza esatta della curva. Il modello si basa sulla formula 

seguente: 

OD = A + 

1 + e 

italiano 16 

D - A 


I parametri A, B, C e D rappresentano l'andamento esatto della curva: 

1. asintoto inferiore parametro A 

2. pendenza della curva parametro B 

3. punto di flesso parametro C 

4. asintoto superiore parametro D 

L’Istituto Virion\Serion GmbH (Würzburg, Germania) determina le curve standard per 

ciascun lotto in test ripetuti e in condizioni ottimali. Non è più quindi necessaria una lunga 

e dispendiosa costruzione della curva standard da parte dell’utilizzatore. 

Per la determinazione delle concentrazioni anticorpali, una curva standard e una tabella di 

valutazione specifiche per il lotto sono allegate a ogni kit SERION ELISA classic. Il 

software di valutazione SERION evaluate e il software basato su Microsoft ® Excel 

SERION activity sono disponibili su richiesta. 

Per compensare le normali oscillazioni e per valutare il test di controllo, in ogni test viene 

utilizzato un siero standard. Il controllo qualità del produttore determina il valore di 

riferimento e l’ambito di validità del siero di controllo. All’interno di tale ambito si 

garantisce la quantificazione corretta della concentrazione anticorpale. 


8.2 Criteri di validità 

- Il bianco substrato deve essere < 0,25 OD. 

- Il controllo negativo deve fornire un risultato negativo. 

- Con i test quantitativi SERION ELISA classic, il valore OD medio (dopo sottrazione 

del bianco substrato!) del siero standard deve essere compreso nel range di 

validità, riportato nel certificato di controllo qualità specifico per ogni lotto. 

- Le oscillazioni dei valori OD del siero standard non devono superare il 20 %. 

Se questi criteri non sono soddisfatti, il test non è valido e deve essere ripetuto. 

Pos: 35 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für all e D okumente/ELISA classic/T estauswertung/Auswertung: Ü berschrift @ 0\mod_1180968661538_33.doc @ 973 @ 2 

8.3 Calcolo SERION ELISA classic EBV VCA IgG/IgM, EBV EBNA1 IgG, 


Pos: 36 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für all e D okumente/ELISA classic/T estauswertung/Nichtautomatisierte Auswertung @ 4\mod_1255348011764_33.doc @ 21387 @ 3 

8.3.1 Valutazione non automatica 

Per la valutazione dei test, al kit SERION ELISA classic sono allegati un certificato di 

controllo qualità con curva standard e una tabella di valutazione specifici per ogni lotto, per 

poter correlare i valori OD ottenuti alla corrispondente attività anticorpale. Il bianco 

substrato deve essere sottratto da tutti i valori OD prima della valutazione. 


s 

Metodo 1: determinazione qualitativa 

Per fissare gli ambiti di cut-off, moltiplicare il valore medio di OD dello standard con i 

numeri riportati nel certificato di controllo qualità (vedere le formule per determinazioni 

particolari),ad es.: 

OD = 0,502 x MW(STD) con cut-off superiore 

OD = 0,352 x MW(STD) con cut-off inferiore 

Se il valore di assorbanza medio del siero standard è 0,64 OD, il range del cut-off è 

compreso tra 0,225 e 0,321 OD. 

italiano 17 

IT

Metodo 2: 


Determinazione continua dell’attività anticorpale tramite la curva standard 

Le cosiddette variazioni intersaggio (oscillazioni che possono verificarsi di giorno in giorno 

e di laboratorio in laboratorio) vengono compensate moltiplicando il valore misurato nel 

campione del paziente con il fattore di correzione F. Il fattore di correzione è calcolato nel 

modo seguente: 

F = 

italiano 18 

valore OD di riferimento (del siero standard) 

valore OD attuale (del siero standard) 

Questa procedura è necessaria per correlare il livello attuale del test effettuato 

dall’utilizzatore alla curva standard specifica per il lotto. Innanzitutto, le deviazioni 

giornaliere devono essere corrette con il calcolo del fattore di correzione F. 

1. Calcolare la media dei due valori OD del siero standard e verificare che rientrino nel 

range di validità prestabilito. 

2. Calcolo del fattore F: il valore di riferimento viene diviso per la media di estinzione 

del siero standard: 

F = valore di riferimento estinzione siero STD / valore medio estinzione siero STD. 

3. Tutti i valori determinati con i campioni dei pazienti vengono moltiplicati per F. 

4. Le attività anticorpali espresse in UI/ml o U/ml possono essere determinate tramite 

la curva standard con i valori corretti. 

Pos: 39 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für all e D okumente/ELISA classic/T estauswertung/Automatische Auswer tung @ 4\mod_1255347464244_33.doc @ 21355 @ 3

8.3.2 Valutazione automatica del test con il software SERION evaluate 

Inserendo i quattro parametri e il valore di riferimento del siero standard, le attività 

anticorpali vengono calcolate online dal software di valutazione SERION evaluate in base 

alle analisi effettuate e misurate con SERION ELISA classic . 

Se la densità ottica dello standard non è compresa nel range di validità, apparirà il 

seguente messaggio (in lingua inglese). 

“Standard values out of ranges in following groups: Group 1-24.” oppure 

“Standard value differ more than 20 % in following groups: Group 1-24.” 

In questi casi, l’analisi non è valida e deve essere ripetuta. 

I parametri e il valore di riferimento devono essere modificati solo in occasione del cambio 

di lotto (la tabella di valutazione riporta i parametri e i valori di riferimento). L’inserimento 

corretto dei dati specifici per il lotto può essere controllato in base all’attività (in UI/ml o 

U/ml) assegnata al siero standard. Il valore medio calcolato in unità deve corrispondere al 

valore in unità riportato nel certificato specifico del lotto. Viene effettuata una correzione 

automatica dei valori misurati. Nella versione standard, la stampa riporta quanto segue: 


8.4 Limiti di quantificazione 

italiano 19 

Codice campione 

Valore OD 

UI/ml o U/ml 

Valutazione 

I limiti di quantificazione sono specificati nel certificato di controllo qualità del test SERION 

ELISA classic. La linearità della diluizione in questo ambito è stata dimostrata in ampi studi 

di validazione. Qualora un campione di un paziente fornisca un risultato superiore al limite 

di quantificazione superiore, può essere analizzato a una diluizione maggiore. L’attività 

anticorpale così determinata deve essere moltiplicata per il fattore di diluizione 

addizionale. 


8.5 Zona grigia 

La zona grigia del test SERION ELISA classic EBV VCA IgG/IgM, EBV EBNA1 IgG, 

EBV EA IgG è specificata nel certificato di controllo qualità e indica i valori del test della 

zona grigia. I valori dei campioni dei pazienti inferiori a tale zona grigia indicano un 

risultato negativo, mentre i valori superiori alla zona grigia sono considerati positivi. Se i 

risultati sono all’inerno della zona grigia non è possibile un’interpretazione definitiva dei 

dati. In questi casi, ripetere il test in parallelo con un nuovo campione prelevato dopo una 

o due settimane (coppia di sieri). 


IT

8.6 Interpretazione dei risultati 


La diagnosi della mononucleosi infettiva primaria si basa principalmente sulla 

determinazione degli anticorpi diretti contro l’antigene precoce (EA) e contro il complesso 

proteico denominato antigene capsidico virale (VCA), la cui importanza è nota da tempo. 

Poco dopo l’infezione appaiono gli anticorpi IgM diretti contro EA e VCA, che si riducono o 

scompaiono completamente con la risoluzione dell’infezione acuta. Al contrario, le IgG 

anti-VCA, che vengono prodotte pressoché contemporaneamente, persistono per tutta la 

vita, ma i livelli di attività possono variare. In caso di riattivazione (ad esempio dopo 

immunosoppressione) si assiste a un aumento significativo dei livelli di IgG anti-EA e IgG 

anti-VCA e, raramente, le IgM anti-VCA possono essere rilevabili. 

I pazienti con linfoma di Burkitt e carcinoma nasofaringeo presentano gli stessi 

caratteristici livelli elevati di IgG anti-VCA osservati nelle riattivazioni. Inoltre, la 

determinazione degli anticorpi IgA anti-VCA è un supporto alla diagnosi di carcinoma 

nasofaringeo. Livelli aumentati di anticorpi anti-EA sono caratteristici dei pazienti affetti da 

carcinoma nasofaringeo o che presentano una riattivazione. 

Diverse settimane dopo l’infezione primaria appaiono gli anticorpi diretti contro l’antigene 

nucleare 1 del virus EBV (EBNA1), che rimangono rilevabili per tutta la vita, ma possono 

scomparire in caso di immunosoppressione. Da soli o in combinazione con gli anticorpi 

IgG anti-VCA, sono considerati un marcatore dell’infezione pregressa. In seguito alla 

riattivazione virale si assiste spesso a un declino delle IgG anti-EBNA1, in genere 

accompagnato da un aumento dell’attività IgG anti-VCA e dalla ricomparsa degli anticorpi 

anti-EA. 

I risultati compresi nella zona grigia nel test SERION ELISA classic EBNA1 IgG in 

combinazione con risultati positivi nel test SERION ELISA classic EBV VCA IgG sono 

considerati positivi e segno di un’infezione pregressa. 

In circa il 25% dei casi di infezione recente da CMV vengono prodotte IgM anti-VCA e si 

ottiene un quadro inusuale di positività delle IgG anti-EBNA1, delle IgG anti-VCA e delle 

IgM anti-VCA. La presenza di IgG anti-EBNA1 è comunque la conferma definitiva di 

un'infezione pregressa da EBV. 

Nella tabella seguente sono riportate le combinazioni possibili di anticorpi e la relativa 

interpretazione. 

italiano 20

Schema interpretativo 

Questo schema interpretativo serve innanzitutto a distinguere tra sieronegatività, infezione 

primaria ed infezione pregressa grazie ai quattro marcatori sierologici principali IgG anti- 

EA, IgG anti-VCA, IgM anti-VCA e IgG anti-EBNA1. 

IgG anti- 

EA 


IgM anti- 

VCA 

IgG anti- 

VCA 

italiano 21 

IgG anti- 

EBNA1 

Interpretazione 

- - - - sieronegatività 

+ - - - 

- + - - 

+ + - - 

+ + + - 

+ - + - 

- + + - 

- - + - 

- - + + 

- - - + 

++ - ++ + 

++ + ++ + 

8.7 Valori di riferimento negli individui sani 

infezione acuta o recente 

infezione pregressa 

riattivazione 


L’analisi di sieri di donatori di sangue scelti a caso, provenienti dalla Germania 

meridionale, con i test SERION ELISA classic EBV VCA IgM / IgG, EBNA1 IgG e EA IgG 

ha fornito i seguenti risultati. Su 131 sieri analizzati con il test SERION ELISA classic , 131 

(100 %) sono risultati negativi. Centoventisei sieri (96,2 %) sono risultati positivi con il test 

SERION ELISA classic EBV VCA IgG, tre sieri (2,3 %) sono risultati positivi e due (1,5 %) 

sono risultati all’interno della zona grigia. Inoltre, analizzando 131 sieri con il test SERION 

ELISA classic EBNA1 IgG sono stati ottenuti i seguenti dati: 120 sieri (91,6 %) sono 

risultati positivi e 11 (8,4 %) negativi. Con il test ELISA classic EA IgG sono stati ottenuti i 

seguenti risultati: 28 sieri (21,4 %) positivi, 11 sieri (8,4 %) compresi nella zona grigia e 92 

sieri (70,2 %) negativi. Ne deriva una sieroprevalenza >96 % nella popolazione generale. 


IT

9 CARATTERISTICHE DI PRESTAZIONE 

Pos: 47 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für all e D okumente/ELISA classic/Leistungsmer kmale/Kapi tel überschrift: Sensiti vität und Spezi fität @ 0\mod_1190013251494_33.doc @ 9928 @ 2 

9.1 Sensibilità e specificità 


I test SERION ELISA classic EBV VCA IgM, EBV VCA IgG e EBV EBNA1 IgG sono stati 

valutati in uno studio comparativo con diversi ELISA EBV disponibili in commercio. 

SERION ELISA classic EBV EA IgG 

Il test SERION ELISA classic EBV EA IgG è stato confrontato con altri quattro test ELISA 

utilizzando un pannello di 133 sieri, tra cui 38 campioni positivi e 95 campioni negativi. 

Poiché due test (3 e 4) hanno presentato una sensibilità o specificità estremamente bassa, 

solo gli altri due test (1 e 2) sono stati utilizzati nello studio comparativo. I risultati 

discordanti in questi due test e nel SERION ELISA classic EBV EA IgG sono stati 

analizzati tramite immunoblot e quindi classificati come positivi o negativi sulla base dei 

dati ottenuti. Questi pannelli di sieri sono stati utilizzati per determinare la sensibilità, la 

specificità, i valori predittivi positivi e negativi e per il calcolo di efficienza. I risultati 

all’interno della zona grigia non sono stati inclusi nel calcolo. 



italiano 22 


sensibilità 81,8 % 100 % 75,0 % 30,8 % 100,0 % 

specificità 97,6 % 81,0 % 85,7 % 100 % 3,6 % 

valore predittivo (+) 93,1 % 77,6 % 77,4 % 100 % 34,1 % 

valore predittivo (-) 93,2 % 100 % 84,0 % 70,0 % 100 % 

efficienza 93,2 % 88,5 % 81,5 % 73,5 % 35,7 % 

SERION ELISA classic EBV VCA IgM 

Centocinquantacinque campioni di siero con reattività anticorpale differente (un pannello 

positivo di 78 campioni e un pannello negativo di 77 campioni) sono stati analizzati in uno 

studio interno in confronto con altri quattro test ELISA disponibili in commercio. I sieri sono 

stati definiti, rispettivamente, positivi o negativi, in presenza di risultati concordanti in 4 test 

su 5. I sieri con risultati discordanti sono stati analizzati tramite immunoblot e quindi 

classificati come positivi o negativi in base ai risultati ottenuti con l’immunoblot. La 

sensibilità e la specificità sono state determinate con questi pannelli di campioni positivi e 

negativi; i risultati all’intenro della zona grigia non sono stati inclusi nel calcolo. 

SERION ELISA classic EBV VCA IgG 

Il test SERION ELISA classic EBV VCA IgG è stato confrontato con l’immunoblot in uno 

studio esterno condotto con 209 campioni di siero positivi e 71 campioni di siero negativi. I 

sieri con risultati all’interno della zona grigia non sono stati inclusi nel calcolo della 

sensibilità e specificità.

SERION ELISA classic EBV EBNA 1 IgG 

Il test SERION ELISA classic EBV EBNA1 IgG è stato confrontato con il test di un altro 

produttore utilizzando un pannello di 130 sieri positivi e 69 sieri negativi. I risultati 

all’interno della zona grigia non sono stati inclusi nel calcolo della sensibilità e della 

specificità. 

I risultati sono riassunti nella tabella seguente: 

EBV VCA 

IgG 

italiano 23 


EBV VCA 

IgM 

EBV EBNA1 

Sensibilità 98,1 % 97,4 % 98,5 % 

Specificità 98,5 % 97,3 % > 99 % 


9.2 Riproducibilità 


La riproducibilità intrasaggio è stata determinata analizzando per 20 volte in una sessione 

di analisi sieri con reattività differente. La riproducibilità intersaggio è stata determinata 

analizzando sieri con reattività differente in 10 sessioni di analisi indipendenti. 

Deviazione standard 

IgG 

Coefficiente di variazione (CV %) = x 100 

SERION ELISA classic EBV EA IgG 

Campione 

Valore medio 

(OD) 

Intrasaggio 

(CV %) 

Valore medio 

Valore medio 

(OD) 

Intersaggio 

(CV %) 

debolmente 

positivo 

0,616 4,5 0,637 5,5 

positivo 0,746 5,3 0,814 6,6 

fortemente 

positivo 

2,125 3,0 2,191 2,8 

IT

SERION ELISA classic EBV VCA IgM 

Campione 

Valore medio 

(OD) 

Intrasaggio 

(CV %) 

italiano 24 

Valore medio 

(OD) 

Intersaggio 

(CV %) 

positivo 1,582 5,1 1,703 6,4 

fortemente 

positivo 

2,249 7,9 2,311 8,7 

SERION ELISA classic EBV VCA IgG 

Campione 

Valore medio 

(OD) 

Intrasaggio 

(CV %) 

Valore medio 

(OD) 

Intersaggio 

(CV %) 

debolmente 

positivo 

0,554 2,2 0,644 7,1 

positivo 1,355 2,4 1,510 4,5 

fortemente 

positivo 

1,437 3,0 1,636 4,5 

SERION ELISA classic EBV EBNA1 IgG 

Campione 

Valore medio 

(OD) 

Intrasaggio 

(CV %) 

Valore medio 

(OD) 

Intersaggio 

(CV %) 

debolmente 

positivo 

0,305 2,8 0,341 8,4 

positivo 0,952 2,5 1,093 4,1 

fortemente 

positivo 

1,622 3,1 1,799 4,2 

Pos: 51 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für all e D okumente/ELISA classic/Allgemei ne Texte ELISA classic/Sicherheitsmaßnahmen @ 4\mod_1255337096255_33.doc @ 21193 @ 122

10 MISURE DI SICUREZZA 

10.1 Avvertenze 

Il SERION ELISA classic deve essere utilizzato da personale qualificato che abbia 

familiarità con la buona pratica di laboratorio. 

Maneggiare con attenzione tutti i reagenti del kit e i campioni di origine umana, secondo le 

regole della buona pratica di laboratorio. 

- Questo kit contiene emoderivati di origine umana. Benché tutti i sieri di controllo e 

cut-off siano risultati negativi per gli anticorpi anti-HIV, per HbsAg (antigene di 

superficie del virus dell’epatite B) e per gli anticorpi anti-HCV, devono essere 

considerati potenzialmente infetti. 

- Non pipettare con la bocca. 

- Non fumare, mangiare o bere nelle aree dove vengono maneggiati i campioni o i 

reagenti del kit. 

- Indossare guanti monouso, camici da laboratorio e occhiali di protezione quando si 

lavora con i reagenti del kit o con i campioni. Al termine, lavarsi accuratamente le 

mani. 

- Decontaminare i campioni dei pazienti e gli altri materiali potenzialmente infetti dopo 

l’esecuzione del test. 

- Conservare i reagenti in luogo sicuro e inaccessibile alle persone non autorizzate, 

ad es. ai bambini. 

- Soluzione di arresto: corrosivo (C); provoca ustioni (R34) 

Utilizzare occhiali di protezione, guanti e camici da laboratorio per la manipolazione! 

10.2 Smaltimento 

Rispettare le disposizioni di legge vigenti! 


italiano 25 

IT

11 BIBLIOGRAFIA 

















italiano 26

Обновления 

Пожалуйста, обратите внимание на изменения по сравнению с предыдущей версией 

Номер версии: V 22.11/12-1 

Предыдущая версия: V 21.10/01-1 

Изменение в главе: полностью переработано, 5, 7.2.1 





ОГЛАВЛЕНИЕ 

1 ОБЛАСТЬ ПРИМЕНЕНИЯ 

2 ДИАГНОСТИЧЕСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ 

3 ПРИНЦИП РАБОТЫ SERION ELISA classic 

4 СОСТАВ НАБОРА 

5 ДОПОЛНИТЕЛЬНО НЕОБХОДИМЫЕ МАТЕРИАЛЫ 

6 ХРАНЕНИЕ И СРОК ГОДНОСТИ 

7 ПРОВЕДЕНИЕ ТЕСТА SERION ELISA classic 

7.1 Общие указания 

7.2 Подготовка и хранение проб 

7.3 Приготовление реагентов 

7.4 Схема проведения анализа 

7.5 Проведение анализа вручную 

7.6 Проведение теста в автоматическом режиме 

7.7 Положительный контроль / контроль достоверности 

8 ОБРАБОТКА ДАННЫХ ТЕСТА 

8.1 Количественное определение одной точки по методу 4PL 

8.2 Критерии валидности 

8.3 Обработка данных SERION ELISA classic EBV VCA IgG/IgM, EBV EBNA1 IgG, EBV EA IgG 

8.4 Диапазон количественных измерений 

8.5 Области пограничных значений 

8.6 Интерпретация результатов 

8.7 Референсный диапазон значений, полученный для здоровой популяции людей 

9 ОТЛИЧИТЕЛЬНЫЕ ЧЕРТЫ 

9.1 Чувствительность и специфичность 

9.2 Воспроизводимость 

10 МЕРЫ БЕЗОПАСНОСТИ 

10.1 Предостережения и меры предосторожности 

10.2 Утилизация 

11 ЛИТЕРАТУРА 

Данная версия № V: V 22.11/12-1 

предыдущая версия: V 21.10/01-1 

RU

Pos: 1 /Arbeitsanl eitung en ELISA classi c/Gültig für nur ein Dokument/U pdate/U pdate: EBV @ 3\mod_1234173447824_78.doc @ 18120 @ 

Pos: 2 /Arbeitsanl eitung en ELISA classi c/Gültig für alle D okumente/ELISA cl assic/Allgemei ne T exte ELISA cl assic/Einl eitung " Enzymimmunoassay" @ 4\mod_1255336385816_78.doc @ 21177 @ 



Иммуноферментный набор для определения человеческих 

russian 2 

антител для диагностики in vitro 


SERION ELISA classic Epstein-Barr Virus VCA IgG № для заказа: ESR1361G 

SERION ELISA classic Epstein-Barr Virus VCA IgM № для заказа: ESR1361M 

SERION ELISA classic Epstein-Barr Virus EBNA1 IgG № для заказа: ESR1362G 

SERION ELISA classic Epstein-Barr Virus EA IgG № для заказа: ESR1363G 

Pos: 4 /Arbeitsanl eitung en ELISA classi c/Gültig für alle D okumente/ELISA cl assic/Allgemei ne T exte ELISA cl assic/Kapitelüberschrift " Anwendungsber eich" @ 0\mod_1177351044007_78.doc @ 182 @ 1 

1 ОБЛАСТЬ ПРИМЕНЕНИЯ 


Иммуноферментные тест-наборы SERION ELISA classic Epstein-Barr Virus EA IgG, 

VCA IgG/IgM и EBNA1 IgG это качественные и количественные тесты для выявления 

антител человека к вирусу Эпштейна-Барра (EBV) в сыворотке или плазме. Тесты 

SERION ELISA classic EBV EA IgG и SERION ELISA classic VCA IgM применяют для 

определения наличия острой или реактивированной инфекции. Тест SERION ELISA 

classic EBV VCA IgG служит для определения первичной или уже перенесенной 

инфекции. Тест SERION ELISA classic EBV EBNA1 IgG служит только для выявления 

прошедших инфекций. 

Pos: 6 /Arbeitsanl eitung en ELISA classi c/Gültig für alle D okumente/ELISA cl assic/Allgemei ne T exte ELISA cl assic/Kapitelüberschrift "Diag nostische Bedeutung" @ 0\mod_1177351537598_78.doc @ 233 @ 1 

2 ДИАГНОСТИЧЕСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ 


Вирус Эпштейна-Барра (EBV) является патологическим для человека ДНК-вирусом 

из семейства герпесных вирусов. Вирус Эпштейна-Барра распространен во всем 

мире. Как у всех герпесных вирусов степень зараженности очень высока и достигает 

у взрослых от 90% до 95%. В так называемых развивающихся странах первичная 

инфекция появляется в первые годы жизни и протекает часто субклинически. 

Наоборот, в странах с высоким уровнем гигиены первичная инфекция происходит не 

так рано. Чаще всего она встречается у подростков и молодых людей. Возрастной 

пик приходится на 15-20-летних. У прим. 50% инфицированных картина заболевания 

развивается как при инфекционном мононуклеозе. Заражение в основном 

происходит через контакт со слюной. Занесение инфекции через консервы крови или 

при пересадке костного мозга не так часты. 

В рамках первичной инфекции сначала заражаются слюнные железы. Через слюну 

затем заражаются клетки носовой полости. На этой стадии заболевание протекает с 

похожими на грипп симптомами. Через последующее заражение В-лимфоцитов 

вирус распространяется по всему организму. В-лимфоциты стимулируются вирусом 

к пролиферации, которая обычно контролируется иммуной системой. 

Инфицированные В-клетки можно выявить как характерные атипичные лимфоциты в 

периферийной крови. Эти клетки имеют изменчивые формы с заметной 

базофильной цитоплазмой и явно выраженным ядром клетки. При дальнейшем 

развитие заболевания возможна высокая температура, спленомегалия, 

лимфаденит, тромбоцитопения и гепатит. Из-за способа распространения 

заболевания, происходящего в основном через слюну, клиническую картину

первичной инфекции, инфекционный мононуклеоз (IM или железистая лихорадка), 

называют также «болезнь поцелуев». 

В редких случаях острый инфекционный мононуклеоз может перейти в хроническую 

активную инфекцию. При этом симптомы инфекционного мононуклеоза сохраняются 

длительное время. Патогенез данного заболевания еще не выяснен до конца. В 

качестве возможной причины рассматривается генетическая предрасположенность 

и/или инфекция с сильным литическим родом вируса. 

Другую редкую картину заболевания представляет собой хронический мононуклеоз. 

В противоположность к хронической активной инфекции, после затихания первичной 

инфекции, после длящегося годами латентного периода, наблюдается 

реактивирование, которое иногда заканчивается смертельно. Так же в данных 

случаях причины еще не выяснены. 

При некоторых генетических дефектах иммунная система не может больше 

контролировать EBV-инфекцию, что приводит к развитию хронической инфекции. 

Это указывает на наличие XLPS (х-спареный лимфопролиферативный синдром). 

При медикаментозном снижении иммунной компетенции, напр. в рамках 

трансплантации, может возникнуть реактивирование или первичная инфекция в 

легкой форме, что может частично повлечь за собой EBV-индуцированное 

отторжение трансплантата. Так же пациенты, зараженные СПИДом, в силу того, что 

их иммунная система ослаблена, могут быть подвержены реактивированию или 

первичной инфекции. 

В определенных районах вирус Эпштейна-Барра тесно связан с проявлением 

заболевания карциномы носоглотки. Эта опухоль носоглоточной полости состоит из 

недифференцированных эпителиальных клеток и очень склонна к метастазам. 

Заболевание широко распространено, однако чаще всего встречается в 

определенных южных районах Китая. Наряду с генетической предрасположенностью 

обсуждается в качестве сопровождающего фактора так же возможность влияния 

окружающей среды, например определенного питания. 

Еще одну опухоль, Буркитт-лимфома (BL), так же связывают с вирусом Эпштейна- 

Барра. Эта моноклональная В-клеточная опухоль часто встречается в Африке и на 

Папуа Новой Гвинее, т.е. в регионах с высокой степенью заболеваемости малярией. 

В более чем 90% этих лимптом выявляется вирус Эпштейна-Барра. Поскольку 

плазмодийные инфекции оказывают влияние на иммунную реакцию, наличие 

малярии обсуждается, как возможный сопровождающий фактор при возникновении 

Буркитт-лимфомы. Отдельными случаями BL может возникать и в других частях 

света. В таких случаях вирус очень редко бывает установлен в опухолях, что делает 

возможным предположение наличия других сопутствующих факторов (напр. 

генетические изменения хромосомной транслокации) для возникновения лимфомы. 

Реакция антител после инфицирования EBV проявляется гетерогенно из-за 

сложности вирусов и разнообразия различных инфекционных фаз. При активной 

фазе первичной инфекции образуются антитела к примерно 100 различным 

антигенам, в более поздней фазе (латентная фаза) затем еще к примерно 10 

протеинам (EBNA 1-6, Late Membrane Proteins(лате-мембранные-протеины) 1-3). На 

этом фоне, в последние годы была спланирована концепция на выявление антител, 

russian 3 

RU

при которой исследуется не весь антиген вируса, а отдельные компоненты / 

протеины вируса Эпштейна-Барра. Таким образом имеется возможность соотносить 

появление антител к определенным антигенам вируса Эпштейна-Барра с фазами и 

развитием EBV-инфекций. 

VCA IgM 

Рисунок 1: Ход развития антител после EBV-инфекции. 

Источник: http://www.viomecum.ch/de/konz/Infektiologie/393-394_EBV.html. 

Рисунок 1 показывает типичный ход развития антител после EBV-инфекции. Сразу 

после заражения вирусом Эпштейна-Барра в организме пациента образуются 

антитела IgM к ранним антигенам Early Antigen (EA). Максимальная концентрация 

антител наблюдается в то время, когда появляются симптомы заболевания. Через 2 

недели после заражения начинают вырабатываться антитела EA IgG, VCA(Virus 

Capsid Antigen) IgM и VCA IgG. Наибольшая концентрация антител VCA IgM бывает 

три недели после появления симптомов. Антитела EA IgG можно часто установить 

спустя длительное время после инфекции. После этого сначала понижается 

концентрация антител VCA IgM и позже EA IgG. Антитела VCA IgG достигают 

максимальной концентрации через 6 недель после появления симптомов и 

сохраняются на этом уровне всю жизнь. Через 3 недели после появления симптомов 

начинается образование антител EBNA 1 IgG, которые служат показателем 

прошедшей EBV-инфекции. Максимального значения они достигают примерно через 

семь месяцев. Концентрация антител EBNA 1 gG остается при нормальном течении 

EBV-инфекции всю жизнь на высоком уровне. При реактивировании, напр. через 

иммунную супрессию, титр антител EA IgG в большинстве случаев значительно 

возрастает, в то время как титр VCA IgM в большинстве случаев не повышается. 

Только в редких случаях после иммунной супрессии может произойти утрата 

антител EBNA 1 IgG, так что наличие антител EA IgG является надёжным 

показателем реактивирования. 

Pos: 8 /Arbeitsanl eitung en ELISA classi c/Gültig für alle D okumente/ELISA cl assic/T estprinzip/Testpri nzip ELISA classic @ 4\mod_1255342796551_78.doc @ 21220 @ 1 

russian 4

3 ПРИНЦИП РАБОТЫ SERION ELISA classic 

ELISA (Enzyme Linked Immunosorbent Assay) - это иммунологический метод, широко 

используемый в инфекционной серологии для выявления антигенов и антител. 

Реакция основывается на специфическом взаимодействии соотвествующих друг 

другу антител и антигенов. 

Стрипы микротитровального планшета SERION ELISA classic покрыты 

специфическими антигенами диагностируемого возбудителя инфекции. Если в 

сыворотке пациента присутствуют антитела к возбудителю, то они связываются с 

антигенами стрипов. Для детекции образовавшихся таким образом иммунных 

комплексов, используются вторичные антитела, меченные щелочной фосфатазой. 

Фермент катализирует реакцию, в результате которой бесцветный субстрат 

нитрофенилфосфат-р преобразуется в окрашенный продукт нитрофенол-р. 

Интенсивность окраски продукта реакции пропорциональна концентрации антител в 

пробе и измеряется фотометрическим методом. 


Zusammensetzung/EBV: Inhalt und Zusammensetzung @ 

8\mod_1261062632666_78.doc @ 28088 @ 1 

russian 5 

RU

4 СОСТАВ НАБОРА 

Компоненты набора Колич./ 

8-луночные стрипы; лунки с иммобилизованными антигенами (всего 12 

стрипов по 8 лунок) MTP , 

1 рамка держатель 

Напыленный материал деактивирован 

Стандартная сыворотка (готовая к использованию) STD 

Человеческая сыворотка в фосфатном буфере с протеином; отрицательная в 

отношении антител к HIV, антигенов HBs -Ag (поверхностных антигенов вируса 

гепатита B) и антител к HCV; консервант: < 0,1 % азид натрия 

Краситель: Amaranth O 

Отрицательная контрольная сыворотка (готовая к использованию) NEG 

Человеческая сыворотка в фосфатном буфере с протеином; отрицательная в 

отношении антител к HIV, антигенов HBs –Ag (поверхностных антигенов вируса 

гепатита B) и антител к HCV; консервант: < 0,1 % азид натрия 

Краситель: Lissamin-зеленый V 

Конъюгаты к человеческим IgG, IgA, IgM (готовые к использованию) APC 

Поликлональные антитела к человеческим IgG, IgA, IgM, конъюгированные со 

щелочной фосфатазой, стабилизированные протеиновым стабилизирующим 

раствором 

Консервант: 0,01 % метилизотиазолон 

0,01 % бромнитродиоксан 

Концентрат раствора для промывания (доводится до 1000 мл) WASH 

Раствор хлорида натрия с Tween 20, 30 mM Tris/HCl, pH 7,4 

Консервант: < 0,1 % азид натрия 

Буфер для разведения DILB или специальный буфер для разведения S1 

DILBS1 

(специальный буфер для разведения для SERION ELISA classic EBV EA IgG. 

Встряхнуть непосредственно перед использованием!) 

Фосфатный буфер с протеином, Tween 20 ( DILB ) и лизатом E. coli; ( DILBS1 ); 

Консервант: < 0,1% азид натрия; 

Краситель: 0,01 г/л бромфеноловой голубой. 

Стоп-реагент STOP 

1,2 Н гидроксид натрия 

Субстрат (готовый к употреблению) pNPP 

паранитрофенилфосфат 

Консервант: < 0,1 % азид натрия 

(Возможно лёгкое жёлтое окрашивание неоткрытого субстрата, не влияющее на 

качество!) 

Сертификат контроля качества со стандартной кривой и таблицей значений 

INFO 

(количественное выражение антител в мЕд/мл или Ед/мл) 

russian 6 

объём 

12 

2 х 2 мл 

2 мл 

13 мл 

33,3 мл 

2 x 50 ml 

15 мл 

13 мл 

2 стр.

Pos: 10 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für mehrer e D okumente/Z usätzlich benötigte M aterialien/Z 200 Zusätzlich benötigte M aterialien (für T este mit IgM-Nachweis) @ 5\mod_1255348816988_78.doc @ 21476 @ 1 

5 ДОПОЛНИТЕЛЬНО НЕОБХОДИМЫЕ МАТЕРИАЛЫ 

- Обычное лабораторное оборудование 

- Для определения IgM: SERION Rf-Absorbent (кат.номер Z200 (20 ml)) 

- Фотометр для микротитровальных планшетов со светофильтром на 405 нм и с 

референтным сфетофильтром на 620 - 690 нм (например, 650 нм) 

- Инкубатор 37°C 

- Влажная камера 

- Дистиллированная вода 

- Зажимы ( № для заказа VT120) 

Pos: 11 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für all e D okumente/ELISA classic/Lag erung und Hal tbar kei t/Lager ung und Haltbar keit @ 4\mod_1255343176800_78.doc @ 21252 @ 1 

russian 7 

RU

6 ХРАНЕНИЕ И СРОК ГОДНОСТИ 

Реактив Хранение Срок годности 

8-луночные стрипы 

микротитровального 

планшета (покрытые 

антигеном) 

Контрольные/ 

стандартные 

сыворотки 

в закрытом виде 

после вскрытия хранить в закрытой алюминиевой 

упаковке с влагопоглотителем при 2-8 °C 

Неиспользованные стрипы хранить в сухих условиях 

в специальном пакете из алюминиевой пленки, 

герметично закрытыми. 

после вскрытия упаковки при 2-8°C 

Конъюгат готовый к использованию раствор при 2-8°C 

Буфер для разведения В закрытом виде 

Следует избегать контаминации, напр., 

использовать стерильные наконечники пипеток. 

после вскрытия упаковки при 2-8 °C 

Помутневшие растворы не использовать. 

Раствор для промывки Концентрат после вскрытия упаковки при 2 – 8 °C 

Готовый раствор при 2 – 8 °C 

Готовый раствор при комнатной температуре 

Регулярно чистить ёмкость для готового раствора! 

Помутневшие растворы не использовать. 

Субстрат Готовый к использованию раствор при 2 – 8 °C, в 

защищеном от света месте. 

Следует избегать контаминации, напр., 

использовать стерильные наконечники пипеток. 

При наличие интенсивной жёлтой окраски 

(экстинкция против дистиллированной 

воды > 0,25 ОE) не использовать 

russian 8 

До истечения срока 

годности 

Минимальный срок 

годности 4 недели 


годности; 

24 месяца с даты 

выпуска 



28 месяцев с даты 






24 месяца 



2 недели; 

1 неделя 





Стоп-раствор После вскрытия при комнатной температуре До истечения срока 

годности 


classic/Testdurchführung/Überschrift: Durchführung @ 0\mod_1184679699953_78.doc @ 

2485 @ 1

7 ПРОВЕДЕНИЕ ТЕСТА SERION ELISA classic 


7.1 Общие указания 

При использовании набора SERION ELISA classic необходимо работать 

исключительно с реагентами SERION ELISA classic, и не заменять их реагентами 

других производителей. Стандартные и контрольные сыворотки, в зависимости от 

лота адаптированы к конкретному набору и не могут использоваться в наборах 

других лотов. Буфер для разведения, буфер для промывывания, субстрат и стопреагент 

могут использоваться во всех тестах SERION ELISA classic независимо от 

лота и наборов. 

Для каждого класса иммунглобулина имеются три разных концентрации конъюгата: 

НИЗКАЯ, СРЕДНЯЯ И ВЫСОКАЯ. Классификацию конъюгата можно распознать на 

этикетках по следующим обозначениям: 

Напр. IgG + IgG-конъюгат низкой концентрации 

IgG ++ IgG-конъюгат средней концентрации 

IgG +++ IgG-конъюгат высокой концентрации 

В некоторых тестах используют специальный конъюгат другого лота, не 

промаркированный символом "+". Специальный конъюгат нельзя заменять другими 

конъюгатами. 

Пожалуйста, всегда обращайте внимание на надписи на этикетках! 

При правильном хранении все компоненты теста SERION ELISA classic в закрытом 

виде можно использовать до истечения срока годности (см. указания на этикетке). 

Не следует использовать реагенты, срок годности которых истёк. 

Неправильное разведение реагентов может привести к понижению 

чувствительности. 

Реагенты при хранении и использовании необходимо защищать от прямых лучей 

солнца. После использования плотно закрыть упаковку, во избежание высыхания и 

бактериального загрязнения. 

Герметично закрытый пакет с микротитровальным планшетом разрезать только по 

намеченному месту. При повреждении пакета из алюминиевой пленки использовать 

планшет не рекомендуется. 

При аликвотировании реактивов следует соблюдать правила стерильности для 

предотвращения микробной контаминации. При раскапывании конъюгата не следует 

касаться наконечником пипетки лунок во избежание ложноположительных 

результатов. Необходимо следить за тем, чтобы флаконы закрывались своими 

крышками. 

russian 9 

RU

Воспроизводимость результатов зависит, кроме прочего, от тщательного 

перемешивания реагентов. Контрольные сыворотки и разведенные сыворотки 

пацентов необходимо тщательно перемешать перед использованием (например, с 

помощью вортекса). 

При постановке анализа необходимо следить за аккуратным раскапыванием лунок и 

соблюдать указанные в инструкции время и температуру инкубации. Значительные 

различия во времени между заполнением первой и последней лунок при внесении 

проб пациентов, контрольных сывороток, конъюгата и субстрата приводят к 

различиям инкубационного периода, которые могут значительно повлиять на 

точность и воспроизводимость измеренных значений. 

Лишь строгое соблюдение рабочей инструкции обеспечивает правильность 

результатов. 

Результаты теста SERION ELISA classic можно учитывать лишь в том случае, если 

соблюдены все критерии валидности, приведенные в сертификате контроля 

качества, прилагаемом к набору. 

Правильная промывка предовтращает неспецифическое взаимодействие. Поэтому 

необходимо следовать руководству по применению используемых приборов для 

промывания. Важно равномерное заполнение промывающим буфером и 

опорожнение лунок планшета во время промывки. Следует избегать образования 

пены! 

Избегать повреждения надписей микротитровальных стрипов, обозначающих 

возбудителя и класс антител, чтобы не перепутать. 


7.2 Подготовка и хранение проб 

Липидные, гемолизированные, а также иктеричные пробы (сыворотка или плазма) 

следует использовать с особым вниманием. Пробы, загрязненные бактериями, 

использовать не следует. Пригодными для исследований материалами являются 

пробы сыворотки или плазмы (EDTA, цитрат, гепарин), полученные стандартными 

лабораторными методами. Пробы нельзя деактивировать термическим способом. 


7.2.1 Разведение проб 

Перед началом теста пробы (V1) развести в буфере для разведения (V2) 



(специальный разбавляющий буфер B231-S1!) 

SERION ELISA classic Epstein-Barr Virus VCA IgG (разбавляющий буфер B231) 

SERION ELISA classic Epstein-Barr Virus EBNA1 IgG (разбавляющий буфер B231) 

russian 10

Разбавляющий буфер SERION ELISA classic EBV EA IgG (B231-S1) нельзя заменять 

разбавляющим буфером SERION ELISA classic EBV VCA и EBNA1. 

V1 + V2 = 1 + 100 по 10 мкл пробы пациента 

на каждые 1000 мкл разбавляющего буфера 


После каждого разведения и перед отбором пробы следует хорошо размешать 

мономиксером (например, Vortex) для получения гомогенного раствора. 

Pos: 18 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für nur ein D okument/Testdurchführ ung/Probenverdünnung/EBV: Pr obenver dünnung, T eil 2 Ü berschrift @ 0\mod_1188369220721_78.doc @ 6562 @ 


Pos: Dokumente/Testdurchführung/Probenverdünnung: mit IgM-Nachweis) 19 /Arbeitsanleitungen @ 0\mod_1184684696270_78.doc ELISA classic/Gültig für @ Rheumafaktor-Interferenz mehrere 2778 @ 

(für Tests 

Интерференция с ревматоидным фактором 

Ревматоидные факторы – это аутоантитела, главным образом, относящиеся к 

антителам класса M (IgM), связывающие иммунные комплексы IgG антител. 

Присутствие неспецифических антител IgM (ревматоидных факторов) может 

привести к ложноположительным результатам при определении специфических 

антител IgM. Более того, существует вероятность вытеснения IgM-антител с более 

слабыми связями IgG-антителами с более сильными связями. Результаты по IgM в 

этом случае окажуться ложноотрицательными. По этой причине пробы для 

определения IgM необходимо предварительно обработать абсорбентом 

ревматоидного фактора SERION-Rf-Absorbens (кат. номер Z200 (20 мл/100 

определений)). Абсорбция ревматоидного фактора происходит путем инкубирования 

пробы пациента в Rf-буфере в течение 15 минут при комнатной температуре или в 

течение ночи при температуре 4° C. Данная процедура описана в специальной 

инструкции по применению. 


0\mod_1190033756400_78.doc @ 10752 

Сначала производится разбавление абсорбента ревматоидного фактора (V1) 

разбавляющим буфером (V2) в соотношении 1+4. 

V1 + V2 = V3 (1 + 4) по 200 мкл Rf-абсорбента 

russian 11 

на каждые 800 мкл разбавляющего буфера 

Затем пробы пациента (V4) разбавляются в смеси Rf и разбавляющего буфера (V3): 

V4 + V3 = 1+100 по 10 мкл пробы пациента 

на каждые 1000 мкл Rf -разбавляющего буфера 

classic/Testdurchführung/Probenverdünnung: 4\mod_1255343607624_78.doc Pos: 21 /Arbeitsanleitungen ELISA @ classic/Gültig 21300 @ Mischung für alle der Dokumente/ELISA 

Proben @ 

После каждого разведения и перед отбором пробы следует хорошо размешать 

мономиксером (например, Vortex) для получения гомогенного раствора. 


RU

7.2.2 Хранение проб 

Пробы пациентов должны храниться не более 7 дней при температуре 2-8°C. Более 

длительное хранение проб возможно при температуре ≤ -20°C. Следует избегать повторных 

циклов замораживания и оттаивания. Разведенные пробы могут храниться при 2-8°C в 

течение одной недели. 


7.3 Приготовление реагентов 

Перед использованием все реагенты должны быть прогреты до комнатной 

температуры. 

7.3.1 Стрипы планшета 

Стрипы упакованы вместе с осушителем. Неиспользуемые стрипы следует снова 

положить в пакет из алюминиевой фольги с осушителем, который закрывается 

герметично. 

7.3.2 Контрольные сыворотки / стандартные сыворотки 

Контрольные и стандартные сыворотки готовы к использованию и не требуют 

дальнейшего разведения. При каждой постановке анализа, независимо от 

количества используемых стрипов, необходимо включать в анализ контрольные и 

стандартные сыворотки. Тестирование проводить в дублях. 

eis) Pos: Dokumente/Testdurchführung/Reagenzienvorbereitung: Nachweis) @ 24 0\mod_1184741119299_78.doc /Arbeitsanleitungen @ 0\mod_1184741119299_78.doc ELISA classic/Gültig @ 2882 @ für 2882 mehrere @ Rf-Absorbens (für Teste mit IgM- 

Контрольные сыворотки не обрабатывать Rf-абсорбентом (абсорбент 

ревматоидных факторов)! 

Pos: classic/Testdurchführung/Reagenzienvorbereitung, @ 21332 25 /Arbeitsanleitungen @ 33333 ELISA classic/Gültig für Teil alle 2 Dokumente/ELISA 

@ 4\mod_1255343884183_78.doc 

7.3.3 Конъюгат к человеческим IgA, IgG или IgM АР-конъюгат (готовый к 

использованию) 

Конъюгаты взаимозаменяемы в пределах одной концентрации и одного класса 

иммунноглобулинов. Строго избегать бактериального заражения готового к 

использованию конъюгата, используя для забора стерильные наконечники 

пипетки. 

7.3.4 Раствор для промывки 

Концентрат раствора для промывки (V1) разбавить дистиллированной водой в 

соотношении 1:30 до конечного объема (V2). 

Пример: 

Концентрат раствора для 

промывки (V1) 

russian 12 

Конечный объем (V2) 

33,3 мл 1000 мл 

1,0 мл 30 мл 

7.3.5 Буфер для разведения проб (готовый к использованию) 

Специальный буфер для разведения, предназначенный только для SERION 

ELISA classic EBV EA IgG. 

7.3.6 Субстрат (готовый к использованию) 

Во избежание загрязнения бактериями готового к использованию раствора 

субстрата, используйте только стерильные наконечники пипеток. 

7.3.7 Стоп-реагент (готовый к использованию)


classic/Testdurchführung/Testablauf/Überschrift Testablauf @ 

0\mod_1180955922843_78.doc @ 745 @ 2 

7.4 Схема проведения анализа 



количественный 

Для выявления IgM антител провести предварительную Rf-абсорбцию проб, см. 

пункт 7.2.1; инкубировать 15 минут при комнатной температуре или ночь при 4°C. 



russian 13 

Разбавление проб 1 

(пробы пациентов) 

1 + 100 

Внесение разведенных проб пациентов и 

готовых к использованию контрольных/стандартных сывороток в лунки планшета 

(100 мкл) 

 

ИНКУБАЦИЯ 60 мин./37°C 

влажная камера 

 

ПРОМЫВКА (4 x 300 мкл DIL WASH ]) 2 

 

Внесение раствора конъюгата APC (100 мкл) 

 



 

ПРОМЫВКА (4 x 300 мкл DIL WASH ]) 2 

 

Внесение раствора субстрата pNPP (100 мкл) 

 



Внесение стоп-реагента STOP (100 мкл) 

 

ИЗМЕРЕНИЕ ПОГЛОЩЕНИЯ при 405 нм 

1 Специальный буфер для разведения для следующих наборов SERION 

ELISA classic: Borrelia IgG, IgM, EBV EA IgG, Parvovirus B19 IgM, Hantavirus Puumala IgG, IgM. 

2 При проведении анализа вручную: после промывки хорошо вытряхнуть планшет на бумажные 

салфетки. 


RU

7.5 Проведение анализа вручную 

1. Установить необходимое количество лунок в рамку держатель и составить протокол 

маркировки лунок. 

2. Внести по 100 мкл разведенных проб и готовых к использованию контрольных 

образцов в соответствующие лунки планшета. Оставьте одну лунку пустой для 

субстратного бланка, например: 

IgA/IgG/IgM количественный 

russian 14 

Лунка A1 Субстратный бланк 

Лунка B1 Отрицательный контроль 

Лунка C1 Стандартная сыворотка 

Лунка D1 Стандартная сыворотка 

Лунка E1 Пациент 1.... 

3. Инкубация проб 60 минут (+/- 5 мин.) при 37°C (+/-1°C) во влажной камере. 

4. По истечении времени инкубации, промойте планшет (в промывателе или вручную): 

- аспирируйте содержимое лунок или удалите ее из лунок вытряхиванием 

- в каждую лунку внесите по 300 мкл промывочного раствора 

- аспирируйте промывочный раствор или удалите его вытряхиванием 

- повторите процедуру 3 раза (т.е. всего 4 раза) 

- удалите остатки жидкости постукиванием планшета в перевернутом положении по 

фильтровальной бумаге. 

5. Добавление конъюгата 

Внести по 100 мкл готового к использованию IgA/IgG/IgM конъюгата в соответствующие 

лунки планшета (кроме лунок для определения субстратного бланка). 

6. Инкубация конъюгата в течение 30 минут (+/-1 мин.) * при 37°C 

(+/-1°C) во влажной камере. 

7. По истечении времени инкубации промойте лунки (см. выше). 

8. Добавление субстрата 

Внести по 100 мкл готового к использованию раствора субстрата во все лунки (в т.ч. и в 

лунку для субстратного бланка). 

9. Инкубация субстрата в течение 30 минут (+/- 1 мин.) * при 37°C 

(+/1°C) во влажной камере. 

10. Остановка реакции 

Внесите по100 мкл стоп-раствора во все лунки, слегка встряхните планшет. 

11. Измерение поглощения 

Измерить оптическую плотность в лунках при длине волны 405 нм в течении 60 минут 

против бланка по субстрату. Референтная длина волны в пределах 620-690 нм 

(например, 650 нм). 

* Учтите, пожалуйста, что в особых условиях работы может возникнуть необходимость лабораторной 

адаптации инкубационного периода. 

Pos: 30 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für all e D okumente/ELISA classic/T estdurchführung/Automatische Testdurchführung @ 5\mod_1255350306938_78.doc @ 21555 @ 2

7.6 Проведение теста в автоматическом режиме 

Наборы SERION ELISA пригодны для применения с приборами Immunomat TM а также 

DYNEX DSX ® и DS2 ® и с приборами, построенными по их типу. Автоматический 

процесс аналогичен ручному анализу. Учтите, что при особых условиях работы 

может возникнуть необходимость в лабораторной адаптации инкубационного 

периода. 


7.7 Положительный контроль / контроль достоверности 

Для проведения внутрилабораторного контроля качества исследований, 

проведенных с использованием наборов SERION ELISA classic, мы рекомендуем 

использовать контрольные материалы SERION ELISA control. Процедура 

применения контрольных материалов описана в отдельной инструкции по 

использованию. 


russian 15 

RU

8 ОБРАБОТКА ДАННЫХ ТЕСТА 



8.1 Количественное определение одной точки по методу 4PL 

Определение концентрации антител с помощью наборов SERION ELISA classic 

производится по “логистической логарифмической модели с 4 параметрами (4PL)”, 

математическая функция которой описывается следующей формулой: 

OD = A + 

1 + e 

russian 16 

D - A 

B(C - ln Konz.) 

Параметры A, B, C и D точно передают ход кривой и определяют 

1. нижнюю асимптоту параметр A 

2. подъем кривой параметр B 

3. точку перегиба кривой параметр C 

4. верхнюю асимптоту параметр D 

Институт Вирион\Серион ГмбХ (Вюрцбург) (Virion\Serion GmbH (Würzburg)) для 

каждого лота наборов, получает стандартную кривую в нескольких тестированиях 

при соблюдении оптимальных условий. У пользователя нет необходимости в 

дорогостоящем и занимающем много времени построении стандартной кривой. 

Для расчета концентраций антител, к каждому набору прилагается стандартная 

кривая в виде графика и таблица значений. Они привязаны к конкретному лоту 

реагентов, и от лота к лоту меняются. Программное обеспечение для проведения 

расчетов SERION activity, SERION evaluate, предоставляется в ответ на запрос. 

Для выравнивания колебаний или смещений стандартной кривой, а также для 

контроля качества, используют стандартную сыворотку. Для каждой партии 

контрольной сыворотки производитель указывает референсное значение и диапазон 

валидности. 


8.2 Критерии валидности 

- Значение OD субстратного бланка < 0,25. 

- Отрицательный контроль дает отрицательный результат 

- При количественном методе SERION ELISA classic, полученное среднее 

значение OD стандартной сыворотки, после вычета значения субстратного 

бланка, должно быть в пределах диапазона валидности, указанного в 

сертификате контроля качества данного лота. 

- Отдельные значения OD стандартной сыворотки не должны расходиться более 

чем на 20 % (CV

Метод 2: 


Определение активности антител с помощью стандартной кривой 

Для того чтобы компенсировать отклонения (девиацию) результатов, полученных в 

разные дни, в различных лабораториях, используют корректирующий фактор F. 

Полученные результаты пациентов умножают на F. Корректирующий фактор 

рассчитывают по формуле: 

Номинальное значение OD (стандартной сыворотки) 

F = 

Значение OD (стандартной сыворотки) в определенный день 

Этот метод необходим для того, чтобы привести в соответствие текущее значение 

теста и стандартную лотспецифическую кривую. Таким образом корректируются 

суточные отклонения. 

1. Из двух значений поглощения стандартной сыворотки рассчитать среднее 

значение и проверить, находится ли полученное значение в допустимых 

пределах. 

2. Расчет коэффициента "F": Указанное номинальное значение стандарта делится 

на среднее значение поглощения стандарта: 

F= номинальное значение стандарта / среднее значение поглощения стандарта. 

3. Все измеренные величины проб пациентов умножаются на "F". 

4. При помощи стандартной кривой и откорректированных значений, 

рассчитываются значения активности антител в мЕд/мл или Ед/мл. 

Pos: 39 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für all e D okumente/ELISA classic/T estauswertung/Automatische Auswer tung @ 4\mod_1255347464244_78.doc @ 21364 @ 3 

russian 18

8.3.2 Автоматическая обработка теста при помощи программы 

SERION evaluate 

В результате ввода четырех параметров и номинального значения стандартной 

сыворотки, активность антител SERION ELISA classic рассчитывается специальной 

программой для расчета SERION evaluate. 

В случае, если значение выходит за рамки области действительности, программа 

может выдать следующие сообщения об ошибках на английском языке: 

”Standard values out of ranges in following groups: 1-24” («Стандартные значения 

находятся вне диапазонов для следующих групп..») или 

”Standard values differ more than 20 % in following groups: 1-24” («Стандартные 

значения различаются более чем на 20 % в следующих группах..»). 

В этих случаях результат теста является недействительным и его следует 

повторить. 

Параметры и номинальное значение необходимо менять только при изменении 

партии (параметры и номинальное значение приведены в таблице значений). 

Верность ввода этих специфических для каждой партии значений можно проверить 

при помощи соответствующих стандартной сыворотке значений активности (в 

мЕд/мл или Ед/мл). Полученное среднее значение активности антител должно 

совпадать со значением, указанным в сертификате контроля качества партии. 

Корректировка значений производится автоматически. На распечатке результатов 

измерения появляется следующий текст: 


russian 19 

Sample code 

(Наименование пробы) 

OD-value (Значение OD) 

IU/ml или U/ml (мЕд/мл 

или Ед/мл) 

Evaluation (Подсчёт) 

8.4 Диапазон количественных измерений 

Диапазон количественных измерений, указанный в сертификате по контролю 

качества SERION ELISA classic, является диапазоном, в котором сохраняется 

линейность разведений. Если значение поглощения образца выше верхней границы 

диапазона измерений, сыворотку необходимо развести и измерить повторно. 

Полученное значение нужно умножить на коэффициент разведения. 


8.5 Области пограничных значений 

Области пограничных значений SERION ELISA classic EBV VCA IgG/IgM, EBV EBNA1 

IgG, EBV EA IgG указаны в сертификате контроля качества и обозначают области 

пограничных результатов измерения. Полученное значение пробы пациента ниже 

пограничной области характеризует отрицательный результат теста; полученное 

значение пробы пациента выше пограничной области расценивается как 

положительный результат теста. В случае, если результаты находятся в области 

пограничных значений, нельзя с уверенностью оценить пробу пациента. В случае 

пограничного результата, тест следует провести параллельно с новыми пробами 

(парных сывороток), взятыми с интервалом в одну-две недели. 


RU

8.6 Интерпретация результатов 


Диагноз первичной инфекции (Infektiöse Mononukleose, IM) основывается в основном 

на выявлении антител к ранним антигенам (Early Antigen) и протеиновым 

комплексам вирусных капсидных протеинов (Virus-Capsid-Antigen, VCA). Значение и 

проявление антител к VCA уже давно доказано. Вскоре после инфицирования 

вирусом появляются IgM-антитела к EA и VCA, которые исчезают с затуханием 

острой инфекции или существуют с незначительной активностью. Напротив, IgGантитела 

к VCA, возникающие почти одновременно или с легким запозданием, 

персистируют всю жизнь, при этом их активность вариируется. В случае 

реактивирования (напр. после иммунной супрессии) заметно увеличиваются 

антитела VCA IgG и ЕА IgG. В редких случаях можно опять выявить наличие 

VCA IgM антител. 

После реактивирования, а так же при лимфоме Буркитта или карциноме носоглотки 

характерен очень высокий уровень антител VCA IgG. Кроме того, диагноз карциномы 

носоглотки дополнительно подтверждается при выявлении антител VCA IgА. 

Повышенный уровень антител ЕА так же характерен у пациентов с диагнозом 

карциномы носоглотки и после реактивирования. 

Спустя много недель после первичной инфекции образуются антитела к ЕВV 

ядерному антигену 1 (EBNA 1), которые персистируют до конца жизни. При 

иммунной супрессии может произойти утрата антител к EBNA 1. Наряду с 

антителами VCA IgG они служат признаком имеющейся давней инфекции. 

Констелляция EBNA 1 IgG и VCA IgG рассматривается как прошедшая инфекция. 

После реактивирования, напр. после пересадки органов, часто наблюдается резкое 

снижение антител EBNA 1 IgG. При этом часто опять возрастают VCA 

специфические антитела IgG и опять образуются антитела к раннему антигену. 

Пограничные результаты в тесте SERION ELISA classic EBNA 1 IgG при 

одновременном положительном результате SERION ELISA classic EBV VСА IgG 

расцениваются как положительные, поскольку серологическая констелляция антител 

указывает на давнюю инфекцию. 

При свежей инфекции СМV в 25% случаев возможно новое образование антител 

VCA IgМ. Поэтому возможна необычная констелляция антител EBNA 1 IgG 

положительная, VCA IgG положительная и VCA IgМ положительная. Наличие EBNA 

1 IgG указывает тем не менее на давнюю инфекцию ЕВV. 

В следующей таблице представлены возможные констелляции антител и их 

диагностическое значение. 

russian 20

Общая схема интерпретации: 

Общая схема интерпретации в первую очередь служит помочь отличить 

серонегативность, первичную инфекцию и давнюю инфекцию при помощи четырех 

важных серологических признаков EA IgG, VCA IgG, VCA IgM и EBNA 1 IgG. 

EA IgG VCA IgM VCA IgG EBNA1 IgG Оценка 

- - - - серонегативность 

+ - - - 

- + - - 

+ + - - 

+ + + - 

+ - + - 

- + + - 

- - + - 

- - + + 

- - - + 

++ - ++ + 

++ + ++ + 


russian 21 

Свежая инфекция 

Давняя инфекция 

реактивирование 

8.7 Референсный диапазон значений, полученный для здоровой популяции людей 


Исследование сывороток неотобранных доноров из южных районов Германии 

тестом SERION ELISA classic EBV VCA IgM / IgG, EBNA1 IgG и EA IgG дало 

следующее распределение: из 131 исследуемых донорских сывороток были 131 (100 

%) в тесте SERION ELISA classic EBV VCA IgM определены как отрицательные. 

Тестирование тестом SERION ELISA classic EBV VCA IgG дало следующее 

распределение: 126 сывороток (96,2 %) были положительные, две сыворотки (1,5 %) 

были сомнительные и три (2,3 %) отрицательные. Из 131 донорских сывороток 120 

(91,6 %) были тестом SERION ELISA classic EBNA1 IgG определены как 

положительные и 11 сывороток (8,4 %) как отрицательные. Для теста ELISA classic 

EA IgG было следующее распределение: 28 (21,4 %) сывороток дали 

положительный результат, 11 сывороток (8,4 %) были сомнительными и 92 

сыворотки (70,2 %) были отрицательными. Из этого следует серопревалентность 

населения для EBV IgG в > 96 %. 


RU

9 ОТЛИЧИТЕЛЬНЫЕ ЧЕРТЫ 

classic/Leistungsmerkmale/Kapitelüberschrift: 0\mod_1190013251494_78.doc Pos: 47 /Arbeitsanleitungen ELISA @ 9937 classic/Gültig @ 2 Sensitivität für alle Dokumente/ELISA 

und Spezifität @ 

9.1 Чувствительность и специфичность 


Для оценки тестов SERION ELISA classic EBV VCA IgM, EBV VCA IgG и EBV EBNA1 

IgG они были проверены в сравнительном исследовании с несколькими другими 

имеющимися в продаже EBV-ELISAми. 


Тест SERION ELISA classic EBV EA IgG был протестирован в сравнении с четырьмя 

другими ELISAми на положительной панели из 38 сывороток и на отрицательной 

панели из 95 сывороток. Всего было проанализированно 133 сывороток. 

Поскольку в двух тестах (3+4) были очень низкие показания чувствительности и 

специфичности, для сравнения использовались только два других теста (1+2). 

Отличающиеся сыворотки этих тестов и теста SERION ELISA classic EBV EA IgG 

были проанализированны с помощью иммунблота и по результатам иммунблота 

были отнесены к положительной или отрицательной панели. С помощью этих 

панелей были расчитаны чувствительность, специфичность, прогноз положительных 

и отрицательных значений и эффективность. Сомнительные результаты при этом в 

расчеты не принимались. 

SERION ELISA 

classic EBV-EA- 

IgG 

russian 22 


Чувствительность 81,8 % > 99 % 75,0 % 30,8 % > 99 % 

Специфичность 97,6 % 81,0 % 85,7 % > 99 % 3,6 % 

Спрогнозированное 

значение (+) 

Спрогнозированное 

значение (-) 

93,1 % 77,6 % 77,4 % > 99 % 34,1 % 

93,2 % > 99 % 84,0 % 70,0 % > 99 % 

Эффективность 93,2 % 88,5 % 81,5 % 73,5 % 35,7 % 


Тест SERION ELISA classic EBV VCA IgM был проверен в сравнении с четырьмя 

другими ELISAми на положительной панели из 78 сывороток и на отрицательной 

панели из 77 сывороток. Всего было проанализированно 155 сывороток. При 

совпадении по крайней мере в четырех из пяти тестов сыворотка оценивалась, как 

положительная или отрицательная. Отличающиеся сыворотки были 

проанализированны с помощью иммунблота и по результатам иммунблота были 

отнесены к положительной или отрицательной панели. С помощью этих панелей 

были расчитаны чувствительность и специфичность. Сомнительные результаты при 

этом в расчеты не принимались.


Тест SERION ELISA classic EBV VCA IgG в рамках внеинститутского исследования 

был подтвержден на положительной панели из 209 сывороток и на отрицательной 

панели из 71 сывороток в сравнении с иммунблотом. Сомнительные результаты при 

расчете чувствительности и специфичности в подсчеты не принимались. 


Настройка теста SERION ELISA classic EBV EBNA1 IgG была подтверждена в 

сравнении с тестом ELISA одного конкурента на положительной панели из 130 

сывороток и на отрицательной панели из 69 сывороток. Сомнительные результаты 

при расчете чувствительности и специфичности в подсчеты не принимались. 

Обобщенные результаты приведены в следующей таблице: 

Функциональные параметры Чувствительность Специфичность 

SERION ELISA classic EBV VCA IgG 98,1 % 98,5 % 

SERION ELISA classic EBV VCA IgM 97,4 % 97,3 % 

SERION ELISA classic EBV EBNA1 IgG 98,5 % > 99 % 


russian 23 

RU

9.2 Воспроизводимость 


Точность в пределах серии сывороток определялась многократно при 

использовании сывороток с различной реактивностью (n = 20) в планшете с 

антигенным покрытием. Для определения точности вне серии пробы сывороток с 

различной реактивностью испытывались в 10 независимых друг от друга 

приготовлениях. 

russian 24 

Стандартное отклонение 

Коэффициент изменения (VK %) = x 100 


Среднее значение 

Среднее Внутрисе- Среднее Межсерий- 

Проба 

значение 

поглощения 

(OD) 

риный 

(VK %) 



(OD) 

ный 

(VK %) 

Слабополож. 0,616 4,5 0,637 5,5 

положительная 0,746 5,3 0,814 6,6 

Высокополож. 2,125 3,0 2,191 2,8 



Проба 



(OD) 

риный 

(VK %) 



(OD) 

ный 

(VK %) 


Высокополож. 2,249 7,9 2,311 8,7 



Проба 



(OD) 

риный 

(VK %) 



(OD) 

ный 

(VK %) 

Слабополож. 0,554 2,2 0,644 7,1 


Высокополож. 1,437 3,0 1,636 4,5


Проба 

Среднее 



(OD) 

Внутрисериный 

(VK %) 

russian 25 

Среднее 



(OD) 

Межсерийный 

(VK %) 

Слабополож. 0,305 2,8 0,341 8,4 


Высокополож. 1,622 3,1 1,799 4,2 

Pos: 51 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für all e D okumente/ELISA classic/Allgemei ne Texte ELISA classic/Sicherheitsmaßnahmen @ 4\mod_1255337096255_78.doc @ 21202 @ 122 

10 МЕРЫ БЕЗОПАСНОСТИ 

10.1 Предостережения и меры предосторожности 

Тест SERION ELISA classic предназначен только для использования специалистами, 

безупречно владеющими необходимыми навыками. 

При обращении с реагентами теста и пробами пациентов необходимо выполнение 

общепринятых лабораторных правил: 

- Упаковка теста содержит человеческие сыворотки. Хотя все контрольные сыворотки 

отрицательны на anti-HIV-Ab, HBs-Ag (Hepatitis B-Virus-surface Antigen) и anti-HCV-Ab их 

следует рассматривать, как потенциально инфекционно опасные материалы. 

- Не набирайте растворы в пипетку при помощи рта. 

- В помещениях, где ведется работа с реагентами набора и пробами пациентов, не 

разрешается принимать пищу, пить или курить. 

- При обращении с реагентами теста и пробами пациентов следует избегать прямого 

контакта, поэтому следует использвать лабораторный халат, одноразовые перчатки и 

защитные очки. Руки по окончании работы следует тщательно вымыть. 

- Пробы пациентов и все потенциально инфекционные материалы после проведения 

теста следует подвергнуть обеззараживанию. 

- Реагенты необходимо хранить в месте, недоступном для детей. 

- Стоп-раствор: 

10.2 Утилизация 

Едкий (C); R34: вызывает химические ожоги, 

необходимо использовать защитные очки, перчатки и лабораторный халат 

Пожалуйста, выполняйте предписания, предусмотренные действующим законодательством! 


RU

11 ЛИТЕРАТУРА 

















russian 26

2°C 

SERION ELISA classic (V 11/12-1) 

Symbole auf den Etiketten/ symbols on labels/ symboles et étiquettes/ simboli sulle etichette/ символы на 

этикетках/símbolos sobre las etiquetas/ σύµβολα στις ετικέτες/ símbolos nos rótulos / Symboly na štítcích / 

symboler på etiketter/ symboler på etiketterna/ Symbole na etykietach/ symboly na označení/ Simboli na 

oznakah/ symbol på etiketter 

96 

8°C 

Hersteller/ Manufacturer/ Fabricant/ Produttore/Производитель/ Fabricante/ Κατασκευαστής/ 

Fabricante/ Výrobce/ Fremstiller/ Tillverkare/ Producent/ Výrobca/ Izdelovalec/ Produsent 

Ausreichend für 96 Tests/ sufficient for 96 tests/ suffisant pour 96 tests/ sufficiente per 96 test/ 

достаточно для 96 тестов / suficiente para 96 pruebas/ επαρεκεί για 96 δοκιµασίες/ suficiente para 

96 ensaios/ stačí na 96 testů/ nok til 96 test/ tillräckligt för 96 tester/ Wystarcza na 96 testów/ 

postačuje na 96 testov/ Zadostuje za 96 testov/ Tilstrekkelig til 96 tester 

LOT Charge/ lot/ lot / lotto/ lote/ παρτίδα/ lote/ šarže/ lot/ lot/ seria/ šarža/ serija/ lot /lot 

REF Referenz oder Bestellnummer/ reference or order number/ numéro de référence ou de commande/ 

numero di riferimento o ordinazione/ ссылка или номер для заказа / referencia o número de pedido/ 

Αριθµός αναφοράς ή παραγγελίας/ referência ou número para encomenda/ reference nebo číslo 

objednávky/ reference eller bestillingsnummer/ referens eller beställningsnummer/ Numer 

referencyjny lub numer zamówienia/ referenčné číslo alebo číslo objednávky/ referenčna ali kataloška 

številka/ Referanse eller ordrenummer 

Lagern zwischen 2 und 8 Grad Celsius/ store between 2 and 8 degree celsius/ entre 2 et 8 degré 

celsius/ conservare a temperatura compresa tra 2 e 8 gradi centigradi/ хранить при температуре от 

2 до 8 градусов цельсия / conservar entre 2 y 8 grados celsius/ Φύλαξη µεταξύ 2 και 8 βαθµούς 

Κελσίου/ Armazenar entre 2º e 8º Celsius/ uchovávejte při teplotě 2 až 8 °C/ opbevares mellem 2 og 8 

grader celsius/ förvara vid 2 till 8 grader Celsius/ Przechowywać w temp. pomiędzy 2 a 8 stopni 

Celsjusza/ skladovať pri teplote 2 až 8 stupňov Celzia/ Shranjujte pri temperaturi od 2 do 8 C/ 

Oppbevares mellom 2 og 8 grader Celsiu 

CE-Markierung bei Erfüllung der IVD Richtlinie 98/79 EG/ CE marking according to IVD guideline 

98/79 EC/ Étiquetage CE selon les directives DIV/ marcatura CE in conformità alla direttiva IVD 98/79 

EC/ маркировка СЕ согласно директивам IVD 98/79 /marca CE según la directiva IVD 98/79 CE/ 

Σήµανση CE σύµφωνα µε την οδηγία IVD 98/79 EΕ/ Marcação CE de acordo com a Directiva 98/79/ 

značení CE podle směrnice IVD 98/79/ES/ CE-mærkning iht. IVD-retningslinje 98/79/EF/ CEmärkning 

enligt riktlinjerna för IVD i direktiv 98/79/EC/ Oznakowanie CE zgodne z wytycznymi dot. 

diagnostyki in vitro 98/79 EC/ označenie CE podľa smernice IVD 98/79/ES/ oznaka CE, skladna s 

smernico IVD 98/79/ES/ CE-merking i henhold til IVD-retningslinjer 98/79/EØF 

0197 CE-Markierung bei Erfüllung der IVD Richtlinie 98/79 EG gemäß Anhang II, Liste B/ CE marking 

according to IVD guideline 98/79 EC according to annex II, list B/ Étiquetage CE selon les directives 

DIV 98/79 CE selon l'annexe II, liste B/ marcatura CE in conformità alla direttiva IVD 98/79 EC 

secondo l’allegato II, elenco B/ маркировка СЕ согласно директивам IVD 98/79, приложение II, 

список В / marca CE según la directiva IVD 98/79 CE de acuerdo con el anexo II, lista B/ Σήµανση 

CE σύµφωνα µε την οδηγία IVD 98/79 EΕ, σύµφωνα µε το παράρτηµα ΙΙ, κατάλογο Β/ Marcação CE 

de acordo com a Directiva 98/79/ CE relativo aos dispositivos médicos de diagnóstico in vitro, 

segundo a lista B do anexo II/ značení CE podle směrnice IVD 98/79/ ES podle příloh II, seznamu B/ 

CE-mærkning iht. IVD-retningslinje 98/79 /EF iflg. anneks II, liste B/ CE-märkning enligt riktlinjerna för 

IVD i direktiv 98/79/EC, bilaga II, lista B/ Oznakowanie CE zgodne z wytycznymi dot. diagnostyki in 

vitro 98/79 EC, zgodnie z aneksem II, lista B/ označenie CE podľa smernice IVD 98/79 ES v znení 

dodatku II, zoznam B/ oznaka CE, skladna s smernico IVD 98/79/ES in seznamom B v Dodatku II/ 

CE-merking i henhold til IVD-retningslinjer 98/79/EØF, tillegg II, liste B 

Verfallsdatum/ expiry date/ date d'expiration/ data di scadenza/ срок годности до /fecha de 

caducidad/ ηµεροµηνία λήξης/ data de validade/ datum exspirace/ udløbsdato/ förfallodatum/ data 

upływu ważności/ dátum exspirácie/ datum izteka roka uporabnosti/ utløpsdatp 

MTP Mikrotiterplatte (brechbare Streifen)/ microtiter plate (breakable strips)/ plaque de microtitration 

(bandelettes détachables)/ piastra per microtitolazione (strisce separabili)/ микротитровальная 

панель (отрывные стрипы) /placa de microtitulación (tiras rompibles)/ Πλάκα µικροτιτλοποίησης 

(αποσπωµενες ταινίες)/ placa de microtitulação (tiras quebráveis)/ mikrotitrační deska (rozlomitelné 

proužky)/ mikrotiterplade (afbrækkelige strimler)/ mikrotiterplatta (brytbara strips)/ Płytka 

mikrotitracyjna (paski do odrywania)/ mikrotitračná platnička (rozlomiteľné prúžky)/ vsebnik za 

mikrotitriranje (z razdelki, ki jih je mogoče odlomiti)/ Mikrotiterplate (avbrytbare strips) 

AG Antigen/ antigen/ Antigène/ antigene/ антиген /antígeno/ αντιγόνο/ antigénio/ antigen/ antigen/ 

antigen/ Antygen/ antigén/ antigen/ Antigen

AK Antikörper/ antibodies/ Anticorps/ anticorpi/ антитела / anticuerpos/ αντίσωµα/ anticorpos/ protilátky/ 

antistoffer/ antikroppar/ Przeciwciała/ protilátky/ protitelesa/ Antistoffer 

CAG Kontrollantigen/ control antigen/ antigène de contrôle/ antigene di controllo/ контрольный антиген 

/antígeno de control/ αντιγόνο ελέγχου/ antígeno de controre/ kontrolní antigen/ kontrolantigen/ 

kontrollantigen/ antygen kontrolny/ kontrolný antigén/ kontrolni antigen/ kontrollantigen 

STD Standardserum/ standard serum/ Sérum standard/ siero standard/ стандартная сыворотка /suero 

patrón/ πρότυπος ορός/ soro padrão/ standardní sérum/ standardserum/ standardserum/ Surowica 

standardowa/ štandardné sérum/ standardni serum/ Standardserum 

POS Positivkontrolle/ positive control/ Contrôle positif/ controllo positivo/ положительные контроли /control 

positivo/ θετικός έλεγχος/ controlo positivo/ pozitivní kontrola/ positiv kontrol/ positiv kontroll/ Kontrola 

pozytywna/ pozitívna kontrola/ pozitivna kontrola/ Positiv kontroll 

C/O Grenzwertiges Serum/ cut-off serum/ Sérum seuil/ siero cut-off/ сомнительные сыворотки 

(пограничные)/suero de corte/ οριακός ορός (cut-off)/ soro cut-off/ cut-off sérum/ cutoff-serum/ cutoffserum/ 

Surowica „cut-off"/ sérum na určenie hraničnej hodnoty/ mejni serum/ Stoppserum 

NEG Negativkontrolle/ negative control/ Contrôle négatif/ controllo negativo/ отрицательные контроли 

/control negativo/ αρνητικός έλεγχος/ controlo negativo/ negativní kontrola/ negativ kontrol/ negativ 

kontroll/ Kontrola negatywna/ negatívna kontrola/ negativna kontrola/ Negativ kontroll 

APC Alkalisches Phosphatase Konjugat antihuman/ alkaline phosphatase conjugate anti-human/ conjugué 

phosphatase alcaline anti-humain/ coniugato con fosfatasi alcalina anti-umano/ античеловеческий 

щелочной конъюгат фосфатазы / conjugado anti humano de fosfatasa alcalina/ Σύζευξη αλκαλικής 

φωσφατάσης/ conjugado anti-humano com fosfatase alcalina/ konjugát alkalické fosfatázy antihumánní/ 

alkalisk phosphatase konjugat antihumant/ antihumant alkaliskt fosfatas-konjugat/ Antyludzki 

koniugat fosfatazy alkalicznej/ konjugát antihumánnej alkalickej fosfatázy/ konjugat alkalne 

fosfataze, antihumani/ Alkalisk fosfatase-konjugat, anti-humant 

++++ niedrig-konzentriertes Konjugat/ conjugate with low concentration/ conjugué à faible concentration/ 

coniugato a concentrazione bassa/ конъюгат низкой концентрации /conjugado con concentración 

baja/ Σύζευξη χαµηλής συγκέντωσης/ conjugado de baixa concentração/ konjugát s nízkou 

koncentrací/ konjugat med lav koncentration/ konjugat med låg koncentration/ koniugat o niskim 

stężeniu/ konjugát so strednou koncentráciou/ konjugat z majhno koncentracijo/ Konjugat med lav 

konsentrasjon 

++- mittel-konzentriertes Konjugat/ conjugate with medium concentration/ conjugué à concentration 

moyenne/ coniugato a concentrazione media/ конъюгат средней концентрации /conjugado con 

concentración media/ Σύζευξη µέτριας συγκέντρωσης/ conjugado de concentração intermédia/ 

konjugát se střední koncentrací/ konjugat med medium koncentration/ konjugat med medelhög 

koncentration/ koniugat o średnim stężeniu/ konjugát so strednou koncentráciou/ konjugat s srednjo 

koncent/ Konjugat med middels konsentrasjon 

++++ hoch-konzentriertes Konjugat/ conjugate with high concentration/ conjugué à concentration élevée/ 

coniugato a concentrazione alta/ высококонцентрированный конъюгат/ conjugado con 

concentración alta/ σύζευξη υψηλής συγκέντρωσης/ conjugado de elevada concentração/ konjugát 

s vysokou koncentrací/ konjugat med høj koncentration/ konjugat med hög koncentration/ koniugat o 

wysokim stężeniu/ konjugát s vysokou koncentráciou/ konjugat z veliko koncentracijo/ Konjugat med 

høy konsentrasjon 

RF Rheumafaktor-Absorbens (Rf-Absorbens)/ rheumatoid factor absorbent (rf-absorbent)/ absorbant de 

facteur rhumatoïde (rf-absorbant)/ adsorbente del fattore reumatoide (adsorbente Rf)/ абсорбент 

ревматоидного фактора (Rf-абсорбент) /absorbente de factor reumatoide (material absorbente de 

Rf)/ Απορροφητής ρευµατοειδούς παράγοντα (απορροφητής Rf)/ absorvente de factor reumatóide 

(absorvente de Fr)/ absorbent revmatoidního faktoru (rf-absorbent)/ reumafaktor- absorptionsmiddel 

(rf-absorptionsmiddel)/ reumafaktor-absorptionsmedel (rf-absorptionsmedel)/ Absorbent czynnika 

reumatoidalnego (absorbent RF)/ absorbent reumatoidného faktora (absorbent rf)/ absorbent 

revmatoidnega faktorja (absorbent RF)/ Revmatoid faktor-absorbent (rf-absorbent) 

DILB 

DILBS1 

DILBS2 

DILBS3 

Verdünnungspuffer für Serum/ dilution buffer for sera/ sérum pour le tampon de dilution/ tampone di 

diluizione per sieri / разбавляющий буфер для сыворотки / solución amortiguadora para los sueros/ 

ρυθµιστικό διάλυµα αραίωσης για ορούς/ tampão de diluição para soro/ ředicí pufr pro séra/ 

fortyndingsbuffer til sera/ spädningsbuffert för serum/ bufor rozcieńczający do surowic / pufor na 

riedenie sér/ pufer za redčenje seruma/ Fortynningsbuffer til serum

WASH Waschlösungskonzentrat/ washing solution concentrate/ concentré de solution de lavage / soluzione 

di lavaggio concentrata / промывочный концентрат /concentrado de solución de lavado/ 

συµπύκνωµα έκπλυσης/ concentrado de solução de lavagem/ koncentrát promývacího roztoku/ 

vaskeopløsningskoncentrat/ tvättlösningskoncentrat/ Stężony roztwór do płukania/ koncentrát 

premývacieho roztoku/ koncentrat za raztopino za izpiranje/ Vaskeløsningskonsentrat 

pNPP pNPP Substrat/ pNPP substrate/ substrat Pnpp/ substrato pNPP/ pNPP субстрат / sustrato pNPP/ 

Υπόστρωµα pNPP/ substrato pNPP/ pNPP substrát/ pNPP-substrat/ pNPP-substrat/ Substrat pNPP/ 

substrát pNPP/ substrat pNPP/ pNPP-substrat 

STOP Stopplösung/ stopping solution/ solution d'arrêt/ soluzione di arresto/стоп-раствор/ solución de 

parada/ διάλυµα διακοπής/ solução de paragem/ zastavovací roztok/ stopopløsning/ stopplösning/ 

roztwór zatrzymujący reakcję/ ukončovací roztok/ raztopina za ustavitev reakcije/ stoppeløsning 

ätzend/ corrosive/ corrosif/ corrosivo/ едкий /corrosivo/ διαβρωτικό/ corrosivo/ žíravý/ ætsende/ 

frätande/ czynnik korozyjny/ korozívne/ jedko/ etsende 

ätzend/ corrosive/ corrosif/ corrosivo/ едкий /corrosivo/ διαβρωτικό/ corrosivo/ žíravý/ ætsende/ 

frätande/ czynnik korozyjny/ korozívne/ jedko/ etsende 

INFO Gebrauchsanweisung, Zertifikat (Standardkurve und Auswertetabelle), CD/ instructions, certificate 

(standard curve and evaluation table), CD/ instructions, certificat (courbe de référence et tableau 

d'évaluation), CD/ istruzioni per l’uso, certificato (curva standard e tabella interpretativa), CD/ 

Инструкция по применению, сертификат (стандартная кривая и таблица для оценки), 

компактный диск /instrucciones, certificado (curva patrón y tabla de evaluación), CD/ Οδηγίες χρήσης, 

Πιστοποιητικό (πρότυπη καµπύλη και πίνακας υπολογισµού), CD/ instruções, certificado (curva 

padrão e tabela de avaliação), CD/ (standardní křivka a vyhodnocovací tabulka), CD/ brugsanvisning, 

certifikat (standardkurve og evalueringstabel), CD/ instruktioner, certifikat (standardkurva och 

utvärderingstabell), CD/ Instrukcje, certyfikat (krzywa standardowa i tabela do określania wyników/ 

CD/ pokyny, certifikát (štandardná krivka a hodnotiaca tabuľka), disk CD/ navodila, certifikat 

(standardna krivulja in ocenjevalna tabela), CD/ Instruksjoner, sertifikat (standardkurve og 

evalueringstabell), CD 

RTU gebrauchsfertig/ ready-to-use/ prêt à l'emploi/ pronto per l'uso/ готовый к использованию /listo para 

usar/ έτοιµο προς χρήση/ pronto a utilizar/ připravený k použití/ klar til brug/ bruksfärdig/ gotowy do 

użycia/ pripravené na použitie/ pripravljen za uporabo/ klar til bruk 

CONC Konzentrat/ concentrate/ concentré/ concentrato/ концентрат / concentrado/ Συµπύκνωµα/ 

concentrado/ koncentrát/ koncentrat/ koncentrat/ Koncentrat/ koncentrát/ koncentrat/ Konsentrat 

DIL verdünnen oder lösen in/ dilute or disolve in/ diluez ou dissoudre dans/ diluire o sciogliere in/ 

разбавить или растворить в /diluir o disolver en/ αραίωση ή διάλυση σε/ diluir ou dissolver em/ 

nařeďte nebo rozpusťte v/ fortynd eller opløs i/ späd eller lös i/ Rozcieńczyć lub rozpuścić w/ rozriediť 

alebo rozpustiť v/ razredčite ali raztopite v/ Fortynnes eller løses opp i 

AQUA destilliertes Wasser/ aqua detillata/ eau distillée/ acqua distillata/ дистиллированная вода /agua 

destilada/ αποσταγµένο νερό/ água destilada/ destilovaná voda/ destilleret vand/ destillerat vatten/ 

woda destylowana/ destilovaná voda/ destilirana voda/ Destillert vann 

IVD In-vitro Diagnostik Anwendung/ in-vitro diagnostic use/ utilisation en diagnostic in-vitro/ uso 

diagnostico in vitro/ использование в диагностике ин-витро /uso diagnóstico in-vitro/ ∆ιάγνωση, 

χρήση in-vitro/ para diagnóstico in vitro/ diagnostické použití in-vitro/ til in-vitro diagnostik/ in vitrodiagnostisk 

användning/ do diagnostyki in vitro/ diagnostické použitie in-vitro/ uporaba pri diagnostiki 

in vitro/ In vitro-diagnostisk bruk


102 Masern Virus / Measles Virus / Rougeole 1262 Parainfluenza Virus 2 

103 Mumps Virus / Parotitis virus / Oreillons 1263 Parainfluenza Virus 3 

104 Varicella-Zoster Virus (VZV) 127 Mycoplasma pneumoniae 

105 Herpes simplex Virus 1/2 128 Adenovirus 

1051 Herpes simplex Virus 1 129 Röteln Virus / Rubella virus / virus de rubéole 

1052 Herpes simplex Virus 2 130 Diphtherie / Diphtheria 

106 Legionella pneumophila 1-7 1311 Coxiella burnetii (Q-Fieber) Phase 1 / Coxiella 

burnetii (Q-fever) phase 1 

107 Echinococcus 1312 Coxiella burnetii (Q-Fieber) Phase 2 / Coxiella 

burnetii (Q-fever) phase 2 

108 Tetanus 132 Aspergillus fumigatus 

109 Cytomegalovirus 133 Enterovirus 

110 Toxoplasma gondii 134 Coxsackievirus 

112 FSME Virus / TBE Virus 135 Echovirus 

113 Resp. Syncytial Virus (RSV) 1361 Epstein-Barr Virus VCA 

114 Dengue Virus 1362 Epstein-Barr Virus EBNA 1 

116 Brucella 1363 Epstein-Barr Virus Early Antigen 

117 Candida albicans 137 Chlamydia 

118 Helicobacter pylori 1371 Chlamydia pneumoniae 

120 Bordetella pertussis 1372 Chlamydia trachomatis 

1201 Bordetella pertussis Toxin 138 Yersinia 

121 Borrelia burgdorferi 139 Campylobacter jejuni 

122 Parvovirus B19 140 Bacillus anthracis 

1231 Influenza A Virus 142 Francisella tularensis 

1232 Influenza B Virus 143 Tyroperoxidase 

125 Leptospira 144 Thyroglobulin 

126 Parainfluenza Virus 1, 2, 3 145 Hantavirus Puumala 

1261 Parainfluenza Virus 1

EBV V 22-deu-NEU - virion\serion

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