Emoglobinopatie strutturali - Andrea Mosca

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HPLC dell’emoglobina • Principio: scambio ionico, le Hb vengono separate in base alla loro carica elettrica. • Colonna: contiene una fase stazionaria a scambio cationico (cioè con gruppi carichi negativamente). • Campione: lisato eritrocitario. Le diverse Hb (cariche +) presenti nel campione vengono adsorbite sulla fase stazionaria. • Eluizione: vengono utilizzati tamponi a pH e forza ionica crescenti che determinano il distacco selettivo delle varie frazioni emoglobiniche in rapporto alla loro carica netta. • Rivelatore: assorbanza 415 nm Separazione HPLC (a scambio cationico) di lisato eritrocitario proveniente da soggetto portatore eterozigote di Hb S [β6Glu Val]. Detector:415 nm (A 1c=3.4 %; F=0.5 %; A 0=50.9 %; A 2=4.0 %; S=38.5 %). 15 16
Separazione HPLC (a scambio cationico) di lisato eritrocitario proveniente da soggetto portatore eterozigote di Hb J [α50His Asp]. Detector 415 nm (A1c=1.7 %; J=25.4 %; A0=60.9 %; A2=1.8 %;): 17 HbA Test di solubilita’ per la HbS HbS
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Page 7: Elettroforesi dell’emoglobina •
Page 11: • Esami di secondo livello: - Iso

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