Anti TRANSGLUTAMINASI IgG EIA WELL R REF - Radim S.p.A.

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7.6 Dispensare 100 µL di Coniugato Enzimatico in tutti i pozzetti. 7.7 Incubare per 30±2 minuti in agitazione a 1200 rpm a temperatura ambiente (18-25°C), coprendo la micropiastra con il copripiastra adesivo fornito nel kit. 7.8 Lavare i pozzetti come al punto 7.5. 7.9 Dispensare 100 µL di Cromogeno in tutti i pozzetti. 7.10 Incubare per 10 minuti in agitazione a 1200 rpm a temperatura ambiente (18-25°C), al riparo dalla luce. 7.11 Dispensare 100 µL di Reagente Bloccante in tutti i pozzetti. 7.12 Leggere la densità ottica delle soluzioni a 450 nm in uno spettrofotometro preferibilmente bicromatico con lunghezza d'onda di riferimento a 620 nm (azzerando lo strumento con il Bianco). Nel caso di estinzione in overflow, utilizzare la lettura spettrofotometrica a 405 nm. La lettura deve essere effettuata entro 15 minuti dal termine del dosaggio. * Qualora si utilizzasse nel procedimento operativo uno strumento automatico per micropiastre RADIM e/o SEAC, far riferimento al relativo manuale. 8. SCHEMA DEL DOSAGGIO: vedi p. 22 9. CALCOLO DEI RISULTATI * Disegnare la curva su carta millimetrata, riportando sull'asse delle ascisse le concentrazioni dei calibratori e su quello delle ordinate l'assorbanza ottenuta per ciascun calibratore. Interpolando sulla curva di calibrazione le assorbanze relative ai sieri di controllo e a ciascun campione, si otterranno le corrispondenti concentrazioni di IgG anti-Transglutaminasi, espresse in U/mL. * Nel caso si utilizzi uno strumento automatico per micropiastre RADIM e/o SEAC, la lettura spettrofotometrica è eseguita automaticamente a 3 lunghezze d'onda: 450, 405 e 620 nm, permettendo l'ampliamento del range di lettura. 9.1 Esempio di Calcolo I valori sotto riportati debbono essere considerati unicamente un esempio e non devono essere utilizzati in luogo dei dati sperimentali. Descrizione Assorbanza 450 nm IgG anti- Transglutaminasi Calibratore 0 U/mL 0.003 Calibratore 7 U/mL 0.565 Calibratore 25 U/mL 1.640 K10TG - Anti-Transglutaminasi IgG EIA WELL M412 – Rev.1 – 04/2008 – Pag. 8/24
Calibratore 50 U/mL 3.150 Calibratore 100 U/ml 5.350 Siero Controllo Negativo 0.250 3.1 U/ml Siero Controllo Positivo 1.900 29.3 U/ml Campione 1 0.151 1.8 U/mL Campione 2 2.800 44.2 U/mL Interpolando sulla curva di calibrazione, i campioni dosati risultano avere rispettivamente un titolo di IgG anti-Tranglutaminasi di 1.80 e 44.2 U/mL. 9.2 Criteri di Accettazione Prima di procedere al calcolo dei risultati verificare che le dosi dei controlli rientrino nei range riportati sul Certificato di Controllo Qualità allegato al kit. Se i valori ottenuti non rispecchiano quelli attesi, è necessario ripetere il dosaggio. 9.3 Interpretazione dei Risultati I sieri di soggetti non celiaci presentano valori di IgG anti-Transglutaminasi inferiori a 7 U/ml. I campioni con valori di IgG compresi tra 5-7 U/ml sono da considerare di dubbia interpretazione e devono essere dosati nuovamente per conferma. Valori normali: ≤ 5 U/ml Zona grigia: 5-7 U/ml Valori patologici: ≥ 7 U/ml 10. CARATTERISTICHE METODOLOGICHE 10.1 Specificità Clinica La specificità clinica del metodo è stata valutata su un campione rappresentativo di soggetti non celiaci, risultando pari a 100%. 10.2 Sensibilità Clinica La sensibilità clinica del metodo è stata valutata su un campione rappresentativo di soggetti positivi agli anticorpi IgG anti-transglutaminasi, risultando pari a 95%. 10.3 Specificità Analitica Il presente metodo analitico non ha mostrato interferenze con sieri positivi a patologie autoimmuni sistemiche . 10.4 Sensibilità Analitica La sensibilità analitica del metodo è definita come minima dose significativamente distinguibile dal calibratore zero. E’ stata valutata dispensando 10 replicati del calibratore zero e leggendo la media delle D.O.+2 D.S. sulla curva di calibrazione. La sensibilità analitica è risultata pari a 0.24 U/ml. 10.5 Precisione K10TG - Anti-Transglutaminasi IgG EIA WELL M412 – Rev.1 – 04/2008 – Pag. 9/24
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