TgAb IRMA CT - Radim S.p.A.

TgAb IRMA CT
REF KT8CT
100
Italiano p. 3
English p. 11
KT8CT – TgAb irma CT
M91 – Rev.01 – 09/2004 – Pag. 1/24

Reagenti del Kit - Kit Reagents
Reag. Quant, Stato fisico, Physical state
CT
100 Pronte per l'uso, Ready for use.
CAL
6 x 1 mL Pronto per l'uso, Ready for use.
CONJ I 125
1 x 10 mL Pronto per l'uso, Ready for use.
DIL
CTR
WASH
1x15 ml Conc
2 x 1 mL Pronto per l'uso, Ready for use.
1 x 50 mL Conc
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DOSAGGIO IMMUNORADIOMETRICO PER LA DETERMINAZIONE
QUANTITATIVA DEGLI AUTOANTICORPI ANTI-TIREOGLOBULINA (TGAB)
NEL SIERO UMANO
PER USO DIAGNOSTICO IN VITRO
1. APPLICAZIONI CLINICHE
Pazienti affetti da tireopatie anche molto diverse tra loro, come ipo ed
ipertiroidismo (morbo di Hashimoto e morbo di Graves) presentano spesso nel
siero autoanticorpi diretti contro l'antigene microsomiale (TMAB) e la
tireoglobulina (TGAB). L'autoimmunità tiroidea è più frequente nelle donne. La
concentrazione degli anticorpi nelle donne aumenta con l'età, dal 10 % (18-24
anni) al 30 % (55-65 anni) per il TGAB e dal 15% (18-24 anni) al 24% (55-65 anni)
per il TMAB. Elevate concentrazioni di TGAB possono condurre allo sviluppo di
tireopatie croniche che si risolvono spesso in ipotiroidismi. Le tireopatie
asintomatiche con ipertiroidismo transitorio sono frequenti come effetto postpartum.
In soggetti che presentano gozzi moderati si è riscontrata un'elevata
concentrazione di TMAB e/o anti-TPO. La valutazione di TGAB, TMAB e/o anti-
TPO è stata recentemente proposta tra le indagini per le gravidanze a rischio. Nel
mixedema idiopatico significativi livelli di TGAB e TMAB evidenziano lo stadio
terminale di tireopatia autoimmune cronica atrofica. Nei pazienti in età giovanile
un evidente gozzo associato a valori elevati di TGAB e TMAB è generalmente
sintomo del morbo di Hashimoto, caratterizzato da una progressiva diminuzione
delle funzioni tiroidee che porta fino all'ipotiroidismo. Nel morbo di Graves il gozzo
tossico è associato a tiroiditi croniche, come confermato da alti livelli di TGAB e
TMAB. Il monitoraggio del TGAB, TMAB ed anti-TPO è frequentemente usato
durante la terapia. Il dosaggio del TGAB può dare informazioni sul rischio di
trasmissione di malattie autoimmuni all’interno dello stesso nucleo familiare.
2. PRINCIPIO DEL METODO
II presente kit utilizza provette sensibilizzate con Tireoglobulina umana. Nella
prima incubazione gli autoanticorpi presenti nei Calibratori e nei campioni in
esame si legano all'antigene adeso alla fase solida. Dopo un lavaggio,si aggiunge
il Coniugato Radioattivo (a-human IgG- 125 I) nelle provette. Il Coniugato durante
l'incubazione si lega agli anticorpi precedentemente fissati. L'eccesso dei reagenti
è rimosso per aspirazione e lavaggio. La radioattività residua nelle provette è
misurata in un contatore di raggi gamma e sarà direttamente proporzionale alla
quantità di autoanticorpi anti-Tireoglobulina presenti nel campione.
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3. REAGENTI CONTENUTI NEL KIT: PREPARAZIONE E STABILITA'
− I reagenti sono sufficienti per 100 tubi.
− Il kit deve essere conservato a 2-8°C.
− La data di scadenza di ciascun reagente é indicata sulla rispettiva etichetta.
CT Provette Sensibilizzate: 100 provette sensibilizzate con
Tireoglobulina umana. Le provette non utilizzate devono essere
riposte a 2-8°C nella loro custodia, accuratamente richiusa.
CAL Calibratori: 1 flacone (1 ml) di Calibratore Zero e 6 flaconi (1 ml) di
anticorpi anti-Tireoglobulina in matrice proteica alle seguenti
concentrazioni: 0, 25, 50, 150 , 500 e 2000 IU/ml. Pronti per l'uso .
Conservante: NaN3 (

MATERIALE RADIOATTIVO
Radionuclide presente: I 125
5. INFORMATIVA (D.Lgs. 230/95 – D.Lgs. 241/00 art. 19) E NORME DI
SICUREZZA E PREVENZIONE
Per ottenere risultati corretti e riproducibili, è necessario osservare le
seguenti norme:
− Non mescolare reagenti di lotti differenti.
− Non usare i reagenti dopo la data di scadenza.
− Non esporre i reattivi e i campioni a calore intenso o a forti sorgenti di
inquinamento.
− Usare vetreria perfettamente pulita ed esente da contaminazioni di ioni
metallici o sostanze ossidanti.
− Usare acqua distillata o deionizzata, conservata in recipienti perfettamente
puliti.
− Evitare accuratamente contaminazioni tra campioni; a tal fine è consigliabile
usare pipette con puntali monouso per ogni campione e per ogni reattivo.
− Non modificare in alcun modo il Procedimento Operativo di esecuzione del
test. Eventuale non rispetto di:
• sequenza e quantità nell’aggiunta dei reattivi
• tempi e temperatura di incubazione
può dare luogo a risultati clinici errati.
− Ricostituire gli eventuali reagenti liofili secondo le modalità descritte sulle
etichette. Eventuale utilizzo di reattivi o volumi non idonei, può provocare
l’ottenimento di dati clinici non attendibili.
− In caso di procedura manuale è importante l’utilizzo di pipette calibrate e
possedere un’adeguata manualità tecnica. In particolare è essenziale una
buona precisione nella preparazione e dispensazione dei reattivi. E’ necessario
un adeguato piano di manutenzione (pulizia e calibrazione) di tale
strumentazione.
− Accertarsi che tutta la strumentazione usata (vetreria, bagno termostatato,
agitatore e lavatore, contatore gamma, frigoriferi usati per la conservazione dei
kit e dei campioni) sia perfettamente funzionante, adeguatamente calibrata e
sia soggetta ad un regolare piano di manutenzione. Un uso non accurato di
ognuno di questi strumenti può produrre errori metodologici che possono
condizionare la riproducibilità e l’affidabilità dei risultati ottenuti.
− Utilizzare un adeguato metodo per la corretta identificazione dei campioni.
Possibili conseguenze possono essere sia la perdita di specificità del
dispositivo che risultati analitici errati.
Con lo scopo di ridurre i rischi di tipo fisico, biologico e chimico, è
necessario osservare le seguenti norme di sicurezza:
− Utilizzare dispositivi di protezione individuale (es.: guanti monouso, camice,
ecc.) durante la manipolazione di materiale radioattivo e/o potenzialmente
infetto e durante il dosaggio.
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− Non pipettare i reagenti con la bocca.
− Non fumare, mangiare, bere o applicare cosmetici durante l'esecuzione del
dosaggio.
− La manipolazione di sostanze radioattive deve essere eseguita in aree
specificamente predisposte.
− Le sostanze radioattive devono essere conservate nei loro contenitori originali
in un’area specificamente predisposta.
− E’ necessario compilare un registro che indichi dettagliatamente l’ingresso, la
conservazione e l’eliminazione di tutto il materiale radioattivo ricevuto.
− E’ necessario eliminare immediatamente qualunque contaminazione
radioattiva secondo le procedure stabilite.
− I materiali di origine umana utilizzati nella preparazione del presente kit sono
stati saggiati per la presenza di HBsAg, anti-HIV e anti-HCV e sono risultati
ripetutamente negativi. Comunque nessun test attualmente disponibile
garantisce l'assenza degli agenti virali responsabili della sindrome da
immunodeficienza acquisita, dell'epatite B ed epatite C. Tutti i reagenti
contenenti materiale biologico e tutti i campioni di siero umano devono essere
considerati potenzialmente infettivi.
− Evitare la produzione di schizzi e la formazione di aerosol; qualora ciò si
verificasse ripulire accuratamente con ipoclorito di sodio ad una
concentrazione del 3%. Il mezzo adoperato per la pulizia deve essere trattato
come residuo potenzialmente infetto ed eliminato secondo le modalità
opportune.
− La sodio azide contenuta come conservante in alcuni reagenti, può reagire con
il piombo ed il rame delle tubature formando azidi di metallo altamente
esplosive. Per evitare la formazione e l'accumulo di tali composti far scorrere
abbondante acqua sui reagenti eliminati.
− I reagenti per cui non si fornisce la scheda di sicurezza non contengono
sostanze chimiche pericolose o se presenti, queste sono al di sotto dei limiti di
concentrazione definiti nel D.Lgs.285/98 e nella direttiva CEE 91/155.
− Ai sensi del D.L. italiano n. 22 del 05.02.97, che fa riferimento alle direttive
CEE (91/156/CEE, 91/689/CEE, 94/62/CEE) tutti i rifiuti provenienti da
lavorazioni manuali e/o in automatico sono classificati rifiuti speciali pericolosi
con codice di classificazione CER 180103 (rifiuti infetti o potenzialmente
infetti); devono quindi essere eliminati affidandoli a ditte autorizzate al ritiro ed
allo smaltimento.
− Tutti i rifiuti provenienti da lavorazioni con radioisotopi devono essere smaltiti
affidandoli a ditte autorizzate al ritiro in accordo a quanto previsto nel D.Lgs.
241/2000.
− L'acquisto, la detenzione, l'impiego e lo smaltimento di materiale radioattivo
(sia solido che liquido) sono soggetti alle disposizioni locali previste dalle
autorità legislative.
La quantità di radioattività alla data di riferimento è specificata
nell’etichetta esterna del kit.
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6. RACCOLTA E PREPARAZIONE DEI CAMPIONI
Il dosaggio può essere effettuato su siero. I campioni fortemente lipemici od
emolizzati devono essere scartati. I campioni possono essere conservati a 2-8°C
per 1 giorno; per periodi più lunghi aliquotare e congelare a -20°C. Assicurarsi che
i campioni siano perfettamente limpidi prima di dosarli. Si consiglia di non
congelare e scongelare ripetutamente i campioni.
Prediluizione del campione
I campioni devono essere prediluiti 1:101 prima del dosaggio, come segue:
10 Pl di Campioni + 1000 Pl di Diluente.
Calibratori e Siero di Controllo sono già prediluiti e pronti per l'uso.
NOTA: Nel caso in cui i campioni devono essere testati simultaneamente per
TGAB e TPOAb (cat. KT15CT), è possibile effettuare un'unica prediluizione
utilizzando lo stesso diluente dei campioni.
7. PROCEDIMENTO OPERATIVO
− Attendere che i reagenti ed i campioni raggiungano la temperatura ambiente.
− Agitare i campioni per inversione prima dell'uso.
7.1 Preparare le provette sensibilizzate per: Calibratori (0-5), i sieri di Controllo, i
Campioni e provette non sensibilizzate per l'Attività Totale.
7.2 Dispensare 100 El di ciascun Calibratore, dei Sieri di Controllo e dei
Campioni prediluiti nelle rispettive provette.
7.3 Agitare e coprire le provette con del parafilm o fogli di alluminio.
7.4 Incubare per 2 ore a T.A. su agitatore orbitale (150 rpm)
7.5 Al termine dell'incubazione aspirare accuratamente la miscela di
incubazione da tutte le provette.
7.6 Lavare le provette 2 volte con 1 ml di Soluzione di lavaggio
opportunamente diluita. Aspirare completamente il liquido da tutte le
provette oppure decantare asciugando il bordo delle provette su carta
bibula.
7.7 Dispensare 100 El di Coniugato Radioattivo in tutte le provette.
7.8 Agitare e coprire le provette con del parafilm o fogli di alluminio.
7.9 Incubare per 90 minuti a T.A. su agitatore orbitale (150 rpm) o O.N. a
T.A.
7.10 Aspirare accuratamente la miscela di incubazione da tutte le provette,
eccetto quelle dell'attività totale.
7.11 Lavare le provette 2 volte con 1 ml di Soluzione di lavaggio
opportunamente diluita. Aspirare completamente il liquido da tutte le
provette oppure decantare asciugando il bordo delle provette su carta
bibula.
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7.12 Misurare la radioattività presente nelle provette in un contatore gamma per 1
minuto. Si raccomanda di controllare il fondo dello strumento prima di
effettuare il conteggio. Per non variare la sensibilità del sistema é
necessario che il fondo sia ridotto al minimo oppure opportunamente
corretto.
8. SCHEMA DEL DOSAGGIO: vedi pag. 23
9. CALCOLO DEI RISULTATI
Calcolare le conte per minuto (cpm) dei conteggi relativi ai Calibratori ed ai
campioni o le relative percentuali di legame.
Cpm legati alla fase solida
B/T % = ------------------------------------ x 100
Cpm dell'attività totale
Riportare i valori su una carta da grafico semi-log, ponendo in ascissa le
concentrazioni dei Calibratori ed in ordinata le conte per minuto corrispondenti,
oppure i rapporti (B/T) %. Il Calibratore Zero deve essere considerato come la
prima concentrazione della curva di taratura. La lettura della dose dei campioni è
effettuata mediante interpolazione dei rispettivi conteggi o percentuali di legame
sulla curva di taratura.
9.1 Esempio di Calcolo
I valori sotto riportati devono essere considerati unicamente un esempio e non
devono essere utilizzati in luogo dei dati sperimentali.
Descrizione cpm B/T % TGAB
Attività Totale (T) 149887
Calibratore 0 IU/ml 359 0.24
Calibratore 25 IU/ml 839 0.56
Calibratore 50 IU/ml 1792 1.19
Calibratore 150 IU/ml 5849 3.88
Calibratore 500 IU/ml 19477 12.95
Calibratore 2000 IU/ml 71217 47.31
Controllo 1 3418 2.24 109 IU/ml
Controllo 2 40697 26.75 880 IU/ml
9.2 Valori Normali
I valori riportati nella tabella seguente sono soltanto indicativi. Si raccomanda a
ciascun laboratorio di stabilire i propri intervalli di riferimento.
< 100 IU/ml: negativo per anticorpi anti-
Tireoglobulina.
> 120 IU/ml: positivo per anticorpi anti-
Tireoglobulina.
100-120 IU/ml Valori dubbi
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9.3 Criteri di accettazione
Prima di procedere al calcolo dei risultati, verificare che la concentrazione del
siero di controllo rientri nel range di accettazione descritto nel Foglio di Controllo
Qualità.
10. CARATTERISTICHE METODOLOGICHE
10.1 Specificità
Il presente metodo non ha mostrato reazioni crociate con autoanticorpi anti – TPO
e/o con TPO.
L’impiego di hTG altamente purificata per la produzione della fase solida riduce la
possibilità di cross – reazioni con proteine aspecifiche.
10.2 Sensibilità
La sensibilità é stata calcolata sulla curva di calibrazione ed espressa come
minima dose significativamente distinguibile dalla risposta del Calibratore Zero
(valore medio + 2 D.S.). Tale dose é risultata pari a 2.0 IU/ml.
10.3 Precisione
La precisione é stata valutata misurando la ripetibilità e la riproducibilità (variabilità
intra-saggio ed inter-saggio) su 3 sieri a differenti concentrazioni di TGAB.
Ripetibilità (Intra-saggio)
Siero Media ± D.S. C.V. Replicati
(IU/ml) % n.
a 24.15 ± 2.23 9.24 10
b 146.36 ± 15.26 10.42 10
c 423.32 ± 46.06 10.88 10
Riproducibilità (Inter-saggio)
Siero Media ± D.S. C.V. Dosaggi
(IU/ml) % n.
a 104.7 ± 13.8 13.14 10
b 482.6 ± 62.3 12.91 10
c 943.1 ± 80.3 8.52 10
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10.4 Accuratezza
L'accuratezza del metodo é stata valutata mediante il test di recupero ed il test di
parallelismo.
Test di Parallelismo
Un siero a medio contenuto di TGAb è stato dosato a varie diluizioni effettuate
con il Diluente dei campioni.
Diluizione Atteso
(IU/mL)
Misurato
(IU/mL)
S1 indiluito 225.99
1: 2 112.99 86.1
1: 4 56.49 54.42
1: 8 28.24 20.72
1: 16 14.12 12.91
10.5 Effetto Saturazione
L’effetto saturazione è stato verificato con sieri fortemente positivi i quali hanno
evidenziato un B/T maggiore dell’ultimo punto della curva di calibrazione .
Non si evidenzia effetto saturazione fino alla concentrazione U 3.000.000 IU/ml.
11. LIMITI DEL DOSAGGIO
I risultati del dosaggio devono essere interpretati con cautela e convalidati da
valutazioni cliniche ed ulteriori prove diagnostiche
12. LEGENDA SIMBOLI: vedi pag. 19
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IMMUNORADIOMETRIC ASSAY FOR THE QUANTITATIVE DETERMINATION
OF ANTI-THYROGLOBULIN AUTOANTIBODIES (TGAB) IN HUMAN SERUM
FOR IN VITRO DIAGNOSTIC USE ONLY
1. CLINICAL APPLICATIONS
Autoimmune thyroid diseases encompass a wide spectrum of different clinical
symptoms varying from hypo- to hyperthyroidism (Hashimoto's disease and
Graves' disease). The link between these extremes is the presence of serum
auto-antibodies directed against the microsomal antigen (TMAB) and/or
thyroglobulin (TGAB). Thyroid autoimmunity is more frequently registered in
women. Antibody prevalence in women increases with age, rising from
approximately 10% at the age of 18-24 up to 30% at the age of 55-65 for TGAB
and from 15% at the age of 18-24 up to 24% at the age of 55-65 for TMAB. These
significant TGAB and TMAB titers can lead to the development of chronic
thyroiditis, often resulting in hypothyroidism. Asymptomatic thyroid diseases with
transient hyperthyroidism have been frequently noted in post-partum conditions.
Subjects with moderate-sized goiters exhibit high TMAB and/or anti-TPO levels. A
rise in TGAB, TMAB and/or anti-TPO has recently been proposed as an
independent marker for at "at-risk" pregnancies. In cases of primary myxoedema,
significant TGAB and TMAB levels indicate the end-stage of autoimmune atrophic
chronic thyroiditis. In younger patients, a firm goiter found in combination with high
TGAB and TMAB levels is generally a sign of Hashimoto's disease, characterized
by a progressive decrease in thyroid function leading to hypothyroidism. In
Graves' disease, the toxic goiter is associated to chronic thyroiditis, as confirmed
by high TGAB and TMAB levels. Monitoring of TGAB, TMAB and anti-TPO levels
is frequently used for treatment follow-up. TGAB can also be used as a marker for
identification of family members exposed to the risk of transmission of
autoimmune conditions.
2. PRINCIPLE OF THE ASSAY
This test uses tubes coated with human thyroglobulin. During the first incubation
the autoantibodies possibly present in Calibrators and samples are bound to the
antigen coated on the solid phase. After washing to remove all unbound material,
125 I labelled a-human Igg is bound to the antibodies captured in the first step. The
excess Conjugate is removed by aspiration and washing. The radioactivity of the
Conjugate bound to the solid phase is measured in a gamma counter and is
directly proportional to anti-Thyroglobulin autoantibodies (TGAB) concentration in
samples.
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3. REAGENTS PROVIDED WITH THE KIT: PREPARATION AND STABILITY
− The reagents are sufficient for 100 tubes.
− Store the kit at 2-8°C.
− The expiry date of each reagent is shown on the vial label.
CT Coated Tubes: 100 tubes coated with human Thyroglobulin. Unused
tubes should be placed at 2-8°C in the appropriate bag and carefully
sealed.
CAL Calibrators: 1 vial (1 ml) of Zero Calibrator and 6 vials (1 ml) of anti-
Thyroglobulin antibodies in serum matrix, at the following
concentrations: 0, 25, 50, 150, 500 and 2000 IU/ml. Ready for use and
. Preservative: NaN3 (

RADIOACTIVE MATERIAL
Radionuclide: 125 I
5. ITALIAN DECREES (D.Lgs. 230/95 – D.Lgs. 241/00 art. 19) AND RULES OF
PREVENTION AND SECURITY
In order to obtain correct and reproducible results, the following rules must
be observed:
− Do not mix reagents of different lots.
− Do not use reagents beyond their expiry date.
− Do not store or leave reagents and samples at high temperatures or areas of
possible contamination.
− Use thoroughly clean glassware, free from metal ion contamination or oxidizing
substances.
− Use distilled or deionized water, stored in perfectly clean containers.
− Carefully avoid any contamination among samples; for this purpose,
disposable tips should be used for each sample and reagent.
− Do not modify in any way the "Assay Procedure". If you not respect:
• exact incubation times and quantities adding the reagents
• incubation times and temperature
may cause incorrect clinical results.
− Reconstitute lyophilized reagents, if present, as described on the relative
labels. Any deviation in reagent use or wrong volumes, may affect the reliability
of results obtained.
− In case of manual procedure, it is important to use calibrated pipettes and have
appropriate technical manuals. Primary importance is a good precision
preparing and dispensing the reagents. Ensure that all the equipment used is
in perfect working order, has been correctly calibrated and is regularly
maintained.
− Ensure that all the equipment used (glassware, incubators, shakers, tube
washers, gamma counter and fridge/freezers used for reagent and sample
storage) is in perfect working order, has been correctly calibrated and is
regularly maintained. Any deviation from the correct use of the equipment
listed can produce errors in the methodology, this may affect the reproducibility
and reliability of results obtained.
− Utilise a suitable method for the correct identification of patient samples.
Incorrect identification may cause a specificity losses of the system and wrong
clinical results.
In order to reduce physical, biological and chemical risks, the following
precautions must be observed:
− Use protective individual articles (ex.: disposable gloves, lab coats, etc.) while
handling radioactive materials and/or potentially infectious material as well as
during the assay.
− Do not pipette reagents by mouth.
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− Do not smoke, eat, drink or apply cosmetics during the assay.
− All radiological work should be done in a designated area.
− Radioactive materials should be stored in their original container in a
designated area.
− A record book for logging receipt and disposal of all radioactive materials
should be kept.
− Any radioactive spills should be taken care of immediately in accordance with
established procedures.
− All material of human origin used for the preparation of this kit was tested
negative for HBsAg, anti-HIV and anti-HCV. Since no test at present can
guarantee complete absence of these viruses, all samples and reagents
containing biological material used for the assay must be considered
potentially infectious.
− Avoid splashing and aerosol formation; in such cases, carefully wash with a
3% sodium hypochlorite solution. Any cleaning material used for that purpose
must be treated as potentially infectious and disposed accordingly.
− The sodium azide used as preservative in some reagents may react with lead
and copper plumbing; to prevent build-up of explosive metal azides, the
reagents should be discarded by flushing the drain with large amounts of
water.
− The reagents for which a Safety Data Sheet is not supplied do not contain
hazardous chemical substances or, if they do, these are below the
concentration limits established by the Italian decree D.Lgs.285/98 in
compliance with EEC directive 91/155.
− According to Italian decree D.L. no. 22 dated 05.02.97, in compliance with EEC
directives (91/156/EEC, 91/689/EEC, 94/62/EEC), all waste products
originating from either manual and/or automated processing are classified as
hazardous special waste material (European classification code 180103,
infectious waste or potentially infectious waste). As such, they must be
eliminated (by) delegating them to special enterprises (companies), qualified
for waste collection and disposal.
− All radioactive waste originating from either manual and/or automated
processing, must be eliminated delegating them to special enterprises,
qualified for waste collection and disposal, according to D.Lgs.241/2000.
− Acquisition, storage, use and disposal of radioactive material (liquid and solid)
are subjected to regulation and ordination of local authorities.
Radioactivity contents to the reference date is shown on the kit external
label.
6. SPECIMEN COLLECTION AND PREPARATION
The assay can be performed in serum. Highly lipemic or hemolyzed samples must
be discarded. Keep samples at 2-8°C for 1 day; for longer periods it is advisable
to freeze samples in aliquots at -20°C. Make sure that samples are always
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perfectly clear before testing. Repeated freezing and thawing of samples should
be avoided.
Sample pre-dilution
Before testing, samples must be diluted 1:101 as follows:
10 Pl Sample + 1000 Pl Diluent
Calibrators and Control Serum are already prediluted and ready for use.
NOTE: when serum samples are to be tested simultaneously for TGAB and
TPOAb (cat. KT15CT) a unique pre-dilution for both assays can be made, by
using the same Diluent.
7. ASSAY PROCEDURE
− Allow reagents and samples to warm up at room temperature.
− Mix samples by inversion before use.
7.1 Prepare coated tubes for: Calibrators (0-5), Control Serum and Samples.
Uncoated test tubes may be used for Total Activity.
7.2 Pipette 100 El of each Calibrator, Control Serum and prediluted Sample into
the corresponding tubes.
7.3 Vortex and cover the tubes with parafilm or aluminum foil.
7.4 Incubate for 2 hours at T.A. (150 rpm)
7.5 At the end of the incubation, carefully aspirate the incubation mixture from
all tubes.
7.6 Wash the tubes twice with 1 ml of diluted Washing Solution. Aspirate all
liquid from the tubes or decant by drying the edges of the tubes with blotpaper.
7.7 Add 100 El of Radioactive Conjugate into all tubes.
7.8 Vortex and cover the tubes with parafilm or aluminum foil.
7.9 Incubate for 90 minutes at T.A. (150rpm) or O.N. at T.A.
7.10 Carefully aspirate the incubation mixture from all tubes, except for the Total
Activity tube.
7.11 Wash the tubes twice with 1 ml of diluted Washing Solution. Aspirate all
liquid from the tubes or decant by drying the edges of the tubes with blotpaper.
7.12 Count the radioactivity in the tubes for 1 minute by using a gamma counter.
We suggest to check the background of the instrument before counting the
assay. In order to avoid variations in the sensitivity of the system, the
background should be reduced to a minimum or adjusted properly.
8. ASSAY SCHEME: see pag. 23
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9. CALCULATION OF RESULTS
Calculate Calibrator and Sample counts per minute (cpm) or their percent binding:
Solid phase cpm
B/T % = ------------------------- x 100
Total activity cpm
Draw a calibration curve on semi-log graph paper by plotting the cpm or percent
binding (B/T)% of each Calibrator (y-axis) against the relative concentration (xaxis).
Consider the Zero Calibrator as the first concentration of the calibration
curve. Read the sample concentration by interpolatig the counts or percent
binding on the calibration curve.
9.1 Example of Calculation
The values shown below must be considered as an example and must not be
used in place of experimental data.
Description cpm B/T % TGAB
Total Activity (T) 149887
Calibrator 0 IU/ml 359 0.24
Calibrator 25 IU/ml 839 0.56
Calibrator 50 IU/ml 1792 1.19
Calibrator 150 IU/ml 5849 3.88
Calibrator 500 IU/ml 19477 12.95
Calibrator 2000 IU/ml 71217 47.31
Control 1 3418 2.24 109 IU/ml
Control 2 40697 26.75 880 IU/ml
9.2 Normal Values
The values reported below are indicative. We suggest that each laboratory
establishes its own normal range.
Lower than 100 IU/ml: negative for anti-Thyroglobulin antibodies.
Higher than 120 IU/ml: positive for anti-Thyroglobulin antibodies.
100-120 IU/ml Bordeline values
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9.3 Validation Criteria
Before proceeding to calculation of results, make sure the control serum
concentration is included within the value described on the Quality Control Sheet.
10. PERFORMANCES OF THE ASSAY
10.1 Specificity
No cross-reactions have been observed with human Thyroperoxidase
autoantibodies and with human Thyroperoxidase.
10.2 Sensitivity
The sensitivity was calculated based upon the calibration curve and expressed as
the minimal dose showing a significant difference from the Zero Calibrator (mean
value + 2 S.D.). This dose is 2 IU/ml.
10.3 Precision
Precision was evaluated determining the repeatability and the reproducibility of
the assay (intra- and inter-assay variability), on 3 sera at different TGAB
concentrations.
Repeatability (Intra-assay)
Serum Mean ± S.D. C.V. Replicates
(IU/ml) % n.
a 24.15 ± 2.23 9.24 10
b 146.36 ± 15.26 10.42 10
c 423.32 ± 46.06 10.88 10
Reproducibility (Inter-assay)
Serum Mean ± S.D. C.V. Assays
(IU/ml) % n.
a 104.7 ± 13.8 13.14 10
b 482.6 ± 62.3 12.91 10
c 943.1 ± 80.3 8.52 10
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10.4 Accuracy
Accuracy of the method has been checked by parallelism test.
Parallelism test
A medium TGAb concentration serum was tested at different dilutions with the
Diluent sample.
Dilution Expected
Measured
(IU/mL)
(IU/mL)
S1 undiluted 225.99
1: 2 112.99 86.1
1: 4 56.49 54.42
1: 8 28.24 20.72
1: 16 14.12 12.91
10.5 High-dose Effect
High-dose effect was verified with samples containing high antibody
concentrations .
Concentrations of IgG to Tg ≤ 3.000.000 IU/ml were observed with B/T higher
than last calibrator concentration .
11. LIMITS OF THE ASSAY
The results of the assay must be carefully interpreted and confirmed by clinical
evaluations and further diagnostic tests.
12. SYMBOLS LEGEND: see pag. 19
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M91 – Rev.01 – 09/2004 – Pag. 18/24

12. SIMBOLI, SYMBOLS, SYMBOLES, SÍMBOLOS, SÍMBOLOS, SYMBOLE,
OPQRSTU, SYMBOLIT, SYMBOLER
EN 980 - EDMA
REF codice di riferimento o di ordine / reference or order code /
Référence ou numéro de commande / referencia o número de
pedido / referência ou número da encomenda / Referenz oder
Bestellnummer / Z[\]Z^_ `abc^deb_ f `gaghhijkg_ / Refarans
veye siparil numarsm / referennní nebo objednací níslo
LOT Lotto / lot / Lot / lote / lote / charge / `gaek\g / parti / šarqe
Data di scadenza / expiry date / date d’expiration / Fecha de
caducidad / Data de vencimento / Verfallsdatum / rPiabPsdkg
jfts_ / Son kullanma targhi / datum expirace
IVD Per uso diagnostico in-vitro / For in-vitro diagnostic use / Pour
diagnostic in-vitro / Para uso diagnóstico In-vitro / aplicação do
diagnóstico In-vitro / Für den Gebrauch in der IN-VITRO-
DIAGNOSTIK / h]g in vitro \]ghd[ye]Zf zafys / in –vitro
diagnostik kullanmm / pro pouqití in-vitro
Marcatura CE secondo le direttive IVD 98/79 CE / CE marking
according to IVD guidelines 98/79 EC / marquage CE conforme
aux directives IVD 98/79 EC / marcado CE según directiva de
IVD 98/79 CE / marcação-CE segundo a directriz-IVD 98/79 /
CE-Markierung bei Erfüllung der IVD Richtlinie 98/79 EG /
{sPgdys CE |}yi] Zb]dbe]Zf_ b\shkg_ IVD 98/79 EC / 98/79 EC
IVD tüzü~üne göre CE ilareti / CE oznanení dle IVD 98/79 EU
Conservare a 2-8°C / keep at 2-8°C / conserver à 2-8°C /
Conservar a 2-8°C / conservar a 2-8°C / Lagerung bei 2-8°C /
ÄÅjgts yebÇ_ 2-8°C / 2-8°C da saklaymnmz / skladovat pÉi 2-8°C
Fabbricante / Manufacturer / Fabriquant / produzido por /
Fabricante / produkt der / ZgegyZiÇ}Ñieg] g`^ / tarafmndan
üretilmiltir / výrobce
Rischio biologico / Biohazard / Risque Biologique / Riesgo
Biológico / Risco Biológico / B]bjbh]Z^_ Zkd\Çdb_ /
………………….
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100
Consultare la metodica operativa / consult instructions for use /
consulter le mode opératoire / consultar las instrucciones de
uso / consultar as instruções de uso / Schauen Sie die
Arbeitsanleitung an / yǵ|bÇjiÇeikei e]_ b\shki_ zafys_ /
kullanmmda balvurulacak bilgiler / Sledujte návod k pouqití
Sufficiente per 100 test / sufficient for 100 tests / suffisant pour
100 déterminations / suficiente para 100 determinaciones /
Componentes para 100 testes / genügend für 100 Tests /
i`gaZik h]g 100 eiye / 100 test için yeterli / dostanující pro 100
testä
RDATE Data di Riferimento / Reference date / Date de référence /
Fecha de referencia / Data de refêrencia / Referenzdatum /
sµiabµsdkg |gãµbd^µsys_ / Referans Targhi / referennní
datum
RCNS Ricostituire con / reconstitute with / reconstituer avec /
reconstituir con / reconstituir com / rekonstituiren mit /
gdgyÇye}eg] µi / ile karmltmrma / rekonstituovat s
H2O Acqua distillata o deionizzata / deionized or distilled water / eau
deionisée ou distillée / agua destilada o desionizada / água
destilada ou deionizada / Deionisiertes oder Destilliertes
Wasser / g`]bd]yµådb -g`iyeghµådb dia^ / deiyonize veya
distile su / deionizovaná nebo destilovaná voda
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SCHEMA DEL DOSAGGIO, ASSAY SCHEME
Prediluizione del Campione, Sample predilution: 1/101
Provette
Tubes
A.Tot
Tot Act
(T)
CAL
(0-5)
CTR Campioni,
Samples
Reag.
CAL (0 - 5) ---- 100 Pl ---- ----
CTR 1 ---- ---- 100 Pl ----
CTR 2 ---- ---- 100 Pl ----
Sample 100 Pl
− Agitare e incubare, Mix and incubate: 2h T.A. su agitatore orbitale (150 rpm).
− Aspirare e lavare, Aspirate and wash: 2 x 1 ml.
CONJ 100 Pl 100 Pl 100 Pl 100 Pl
− Agitare e incubare / Mix and incubate
A: 90 minuti T.A./R.T. (150 rpm-U/min)
O, or
B: 18-24 h. a T.A./R.T.
− Aspirare e lavare, Aspirate and wash: 2 x 1 ml.
− Leggere, Read.
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RADIM S.p.A. - Via del Mare, 125 - 00040 Pomezia (Roma) Italia – Tel.: 0039/06/91249.1 - Fax:
0039/06/91249.443; National Order Entry: 0039/06/91249.702; Export Dept.:
0039/06/91249.701; Customer Care: 0039/06/91249.700; www.radim.it
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