ANALYSEMETODER - Oslo universitetssykehus

(bundet til en fast fase), mens det andre er bærer av et eller annet egnet merkestoff,
og fungerer derved som "merkelapp". De to anvendte antistoffene benyttes i
overskudd, slik at all tilgjengelig analytt i de respektive inkubater bindes til det
immobiliserte antistoffet under inkubering. Det merkede antistoffet vil også bindes til
de samme analyttmolekyler, og mengden bundet merket antistoff vil derfor direkte
gjenspeile mengden analytt til stede.
På samme måte som ved de kompetitive assays, er det nødvendig å skille bundet og
ubundet merket reagens (antistoff) etter endt inkubering for at responssignalet skal
kunne registreres. Som nevnt vil de non-kompetitive assays nesten alltid operere
med det ene antistoffet koblet til en fast fase, og kalles derfor ofte for "two-site
immunometric sandwich" assays.
I og med at det benyttes to eptioper på analytten og to antistoffer, kan denne type
immunoassay bare benyttes til bestemmelse av anlytter som er store nok til å
inneholde to uavhengige epitoper.
Homogene immunoassays
Kravet om stadig hurtigere analysesvar, sammen med behovet for forenklede analyser,
har ført til en økende etterspørsel etter de såkalte "non-separation" assays.
Dette er analyser der det ikke må skilles mellom fritt og bundet merket reagens for
måling av responssignalet (homogene assays). Metoden er basert på at
merkestoffets egenskaper er forskjellige i fri og bunden form.
MERKESTOFFER
De non-kompetitive metoder er langt mere sensitive og spesifikke enn de tidligere
kompetitive assays. Dette skyldes i vesentlig grad anvendelsen av monoklonale
antistoffer og innføringen av nye typer merkestoffer med langt høyere spesifikk
aktivitet enn det man kunne oppnå ved merking med radioaktivitet.
I de første kompetitive assays ble det utelukkende benyttet radioaktivitet som
merkelapp. Etter hvert ble det også introdusert andre merkestoffer som f.eks.
merking med enzym, og fluorescerende prober som fluorescin-isotiocyanat. Kravet
om mer og mer sensitive immunometriske metoder, behovet for en økende grad av
rasjonalisering, kravet om økt holdbarhet av merket reagens og strengere rutiner i
forbindelse med kast og arbeid med radioaktive substanser har ført til en stadig
søken etter nye merkestoffer og innføring av såkalte "black box " instrumenter. Nye
merkestoffer som luminol og akridin-estere (chemiluminiscence), og lanthanidchelater
(time-resolved fluorescense) har på grunn av dette sett dagens lys.
BEREGNING AV RESULTATER
Ved de fleste kompetitive og non-kompetitive assays må som nevnt merket fritt
reagens separeres fra merket bundet reagens før måling av responssignalet
(heterogene assays). Siden det i dag anvendes en rekke forskjellige merkestoffer
med responssignaler basert på vesentlig forskjellige prinsipper, er bruk av spesielle