Anais do Congresso de Pesquisa, Ensino e Extensão ... - UFG

2. Material e métodos
O 4-fluorbenzaldeidotiossemicarbazona (4-FTC) foi sintetizado pelo
Laboratório de Bioatividade Molecular do Instituto de Química, UFG, coordenado
pela professora Drª Cecília Maria Alves de Oliveira, para objeto de estudo.
A linhagem celular de adenocarcinoma de próstata PC-3 foi mantida em meio
de cultura HAM-F12, suplementado com 10% de soro fetal bovino e antibióticos, em
atmosfera contendo 5 % de CO2 a 37ºC. Para avaliar o potencial indutor de
apoptose, as células (1x10 6 ) foram cultivadas em placa de Petri de 35x10 mm estéril
e expostas ao 4-FTC (0,02 µM) por 48 h. Foram lavadas com PBS e coradas com o
corante Giemsa. As alterações morfológicas foram observadas em microscopia
óptica de campo claro.
A externalização da fosfatidilserina foi analisada através da marcação com
Anexina V-FITC/IP. Na determinação das fases do ciclo celular as células PC-3
foram fixadas com solução fixadora (etanol a 70% gelado), e incubadas a 4 °C, 24 h;
lavadas em PBS gelado e ressuspendidas com solução contendo 200 µg/mL de
RNAse A e 50 µg/mL de IP (iodeto de propídio), incubadas a 4 °C, protegidas de luz
por 1 h. Para a análise da indução de formação de vesículas ácidas autofágicas, as
células foram marcadas com o corante laranja de acridina. As amostras foram
analisadas por citometria de fluxo (FACSCanto II, Becton Dickinson).
Os resultados das avaliações foram expressos em média e desvio padrão. A
diferença entre controle e células tratadas com 4-FTC foi avaliada usando teste t não
pareado, a diferença entre grupos por análise de variância (ANOVA) e o teste de
Tukey para múltiplas comparações. A significância estatística foi considerada
quando p < 0.05. As análises estatísticas foram realizadas usando o software
GraphPad Prism (versão 5.0).
3. Resultados e discussão
Os mecanismos de morte celular, principalmente as vias indutoras de
apoptose, são alvos importantes para o desenvolvimento de novos agentes
quimioterápicos. A atividade indutora de apoptose na linhagem celular PC-3 não foi
observada através da análise morfológica, pois apenas alterações discretas não
características de apoptose foram observadas, comparado ao controle (Figura 1),
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