Leia o artigo completo - Revista Analytica

Artigo
COMPARAÇÃO POR MEIO DE BIOENSAIO DE DUAS
FORMULAÇÕES DE UM PRODUTO COMERCIAL
REPELENTE DE INSETOS À BASE DE DEET
BIOASSAY COMPARISON OF TWO FORMULATIONS
OF A COMMERCIAL PRODUCT DEET-BASED INSECT
REPELLENT
RESUMO
O ingrediente ativo DEET ([N-N]-diethyl-m-toluamide) está disponível em produtos comerciais
variando sua concentração de 5% a 100%, o que determina sua eficiência e efeito
residual em repelir mosquitos. No mercado brasileiro o produto OFF! Loção Hidratante com
7,1% de DEET declarado no rótulo foi substituído por nova fórmula sem concentração declarada.
Por meio de bioensaio previamente padronizado em caixas com fêmeas do mosquito
Aedes aegypti comparou-se a capacidade de repelência dessas duas formulações, nos
dedos das mãos dos pesquisadores, para os períodos: logo após, duas e quatro horas após
a aplicação dos produtos. Não houve diferença significativa entre as fórmulas para as duas
primeiras avaliações, mas a nova fórmula foi menos eficiente na última avaliação, levando à
conclusão de que contem menos ingrediente ativo.
Palavras-chave: Dietiltoluamida.Repelência. Aedes aegypti.
ABSTRACT
The active ingredient DEET ([NN]-diethyl-m-toluamide) is available in commercial products
ranging from 5% to 100%, thus determining its’ efficiency and residual effect in repelling
mosquitoes. In the Brazilian market, OFF! LoçãoHidratante with 7.1% DEET, according to
the label, was replaced by a new formula with no declared concentration. Using standardized
bioassays with caged females of Aedesaegyptiwe compared the repellency of both formulations
on our fingers, for the periods: just after, two and four hours after application of the
products. There was no significant difference between the formulae for the first two evaluations,
but the new formula was less efficient at the last evaluation, leading to the conclusion
that it contain less active ingredient.
Keywords: Diethyltoluamide. Repellency. Aedes aegypti.
INTRODUÇÃO
Não resta dúvida de que a melhor maneira de se ficar protegido
das picadas de mosquitos e das doenças que transmitem
é evitando ambientes onde eles ocorrem ou vestindo
roupas protetoras ou ainda usando repelentes de insetos (1).
Mas quando se deseja exatamente frequentar esses ambientes,
que em geral são tropicais e quentes, essa última alternativa
passa a ser a única possível para se evitar insetos hematófagos,
como os mosquitos e borrachudos.
2
Carlos Fernando S. Andrade*,
Maria José Irisarri Gutierrez e
Renato Franciosi Luchetti
UNICAMP, Departamento de
Biologia Animal
*Correspondência:
E-mail: cfeandra@unicamp.br
Os repelentes de insetos disponíveis comercialmente
podem ser divididos em duas categorias, de acordo com o
ingrediente ativo (i.a.) que possuem: substâncias químicas
sintéticas ou óleos essenciais e outras substâncias derivadas
de plantas.
DEET ([N-N]-diethyl-m-toluamide) é o princípio ativo sintético
mais conhecido como repelente de mosquitos, já sendo
usado por mais de 50 anos no mundo todo e com uma esti-

mativa anual de 200 milhões de pessoas usando DEET para
se proteger de picadas e doenças (2). Segundo a Agência
Americana de Proteção Ambiental (EPA), existem hoje cerca
de 140 produtos à base de DEET, com concentrações desse
ingrediente ativo variando entre 5 a 100%, registrados por
pelo menos 40 empresas do ramo (3,4). São,semdúvida,repel
enteseficientes e populares.
Apesar de conhecido há muito tempo, um estudo recente
indicou que existe ainda um bom debate sobre a maneira
como o DEET funciona repelindo insetos hematófagos (5).
As hipóteses anteriores sugeriam que não é o DEET, é ele
próprio, percebido pelos insetos, mas que funciona porque
mascara ou confunde o sistema olfativo dos mosquitos e
sua percepção aos odores que normalmente usa para nos
encontrar, seja o CO 2 , o ácido lático ou mesmo o 1-octen-3-
-ol. O trabalho recente publicado por SYED e LEAL (5) é mais
categórico. Eles indicam que DEET funciona como repelente
mesmo na ausência do ácido lático, demonstram que os
mosquitos conseguem perceber o odor do DEET e que essa
é a causa direta da repelência.
Nos Estados Unidos da América os produtos comerciais
OFF! ® (marca registrada da empresa SC Johnson), podem ser
encontrados no mercado em várias apresentações, indicando
em seus rótulos concentrações do ingrediente ativo DEET
variando desde baixas, entre 5 e 15%, para o “OFF! ® Family
CareInsectRepellent” (spray, aerossol e lenços), até concentrações
bem altas ou o ingrediente ativo praticamente puro,
como o “OFF! Deep Woods ® ” (Sportsmen Insect Repellent
I, spray), quepossui 98,11% de DEET (7). A mesma empresa
tem no Brasil mais de 50% do mercado de repelentes de
mosquito, comercializando seus produtos “OFF! Repelente
Aerossol Máxima Duração” (com 14,24% i.a.) e o “Repelente
OFF! Kids” (7,12% i.a.), ambos com a quantidade de DEET
relaciona no rótulo. A empresa também comercializa os produtos
“OFF! Repelente Spray Refrescante”, “OFF! Repelente
Loção Hidratante” e “ OFF! Family”, mas esses não apresentam
a concentração de DEET no rótulo.
No Brasil, os repelentes de insetos são regulamentados
como cosméticos e, de acordo com a Câmara Técnica de
Cosméticos da Agência Nacional de Vigilância Sanitária (AN-
VISA), os rótulos dos produtos devem conter apenas o tempo
necessário para sua reaplicação com base em testes de
eficácia, obedecendo sempre, quando for o caso, o número
máximo de aplicações. Com relação à concentração de
i.a., os rótulos devem apenas conter diferentes instruções de
acordo com duas faixas de concentrações: até 10% de i.a. e
entre 11% e 30%, mas a concentração exata não precisa ser
declarada.
Desde 1997 temos avaliado repelentes de mosquitos em
nossos laboratórios na Unicamp, padronizando bioensaios
com fêmeas de Aedes aegypti (mosquito da dengue) e Ae.
albopictus (mosquito tigre asiático), comparando preparados
pré-comerciais com o repelente “OFF! Loção Hidratante”,
usado como controle positivo padrão, por ter comprovado
sucesso comercial. Esse produto, que apresentava em seu
rótulo posterior a indicação de possuir “N-N-Dietiltoluamida
7,1%”, foi substituído pelo produto “OFF! Repelente de Insetos,
Novo!, Loção Hidratante com Aloe Vera”, que apresenta
no rótulo posterior o mesmo ingrediente ativo, com outro
nome (DiethylToluamide) e não menciona a sua concentração
na fórmula. Mas, de acordo com o Serviço de Atendimento
ao Consumidor (SAC) da empresa (0800-7076789), esse novo
repelente OFF! possui entre 6% e 9% de DEET. No presente
estudo nós avaliamos a eficácia em repelir mosquitos da antiga
formulação comparada com a nova.
MATERIAIS E MÉTODOS
Os testes foram conduzidos em condições controladas
de laboratório de 25 ± 2 o C de temperatura e 75 ±
5% de umidade relativa, usando-se fêmeas do mosquito
Ae. aegypti de uma colônia mantida desde 1993 (linhagem
Rockefeller, CDC, Atlanta, EUA). Os repelentes foram
avaliados em dedos humanos segundo metodologia que
desenvolvemos anteriormente (9). As mãos dos pesquisadores,
protegidas por luvas de látex, exceto por pedaços
das luvas cortados na região mediana de três dedos, são
oferecidas aos mosquitos em caixas de criação com as
dimensões 90x70x65cm. A área dos dedos exposta foi de
16cm 2 de pele. Dois dedos receberam o tratamento com
20µ de cada formulação, volume previamente estabelecido
como sendo suficiente para saturar aquela área de
pele, e o terceiro dedo permaneceu não tratado. Foram
feitas seis réplicas, sendo duas para a mão de cada um
dos pesquisadores, em dias diferentes.
Foi contado o número de tentativas de picada (quando
os mosquitos pousam e iniciam a inserção do aparelho
bucal) em cada dedo, para um período de 15 minutos. Não
se permitiu que os mosquitos ingerissem sangue, sendo
impelidos a voar assim que iniciassem a picada, pelo toque
suave de uma pena de ave presa à ponta de um bastão.
As avaliações foram feitas em três momentos após a
aplicação (AA) dos produtos. A primeira avaliação foi feita
poucos minutos após aplicados, logo que os produtos foram
absorvidos pela pele, e foi denominada Justamente
Após a Aplicação (JAA). A segunda e a terceira avaliações
foram feitas respectivamente duas e quarto horas após a
aplicação (2hAA e 4hAA), de forma a se verificar o efeito
residual dos tratamentos repelentes. Calculou-se um Índice
percentual de Proteção (IP) às picadas como sendo
IP=((DñP-DP)/DñP)x100, onde DñP é o número de picadas
em dedos não protegidos e DP é o número de picadas em
dedos protegidos (10). A análise estatística foi feita pelo
teste t-Student (p=0,05).
Os produtos avaliados foram “OFF! Repelente de Insetos
Loção Hidratante” Lote 4173001 e “OFF! Repelente de
Insetos Novo! Loção Hidratante” Lote 7089001. O registro
da avaliação foi lavrado em Livro Repel-1, páginas 152 a
155 (Série 45/2007).
3

Artigo
RESULTADOS E DISCUSSÃO
De acordo com a ANVISA (8), as entidades International
Union ofPureandAppliedChemistry (IUPAC) e a Chemical Abstract
Service (CAS), adotam as designações genéricas para
o DEET respectivamente como N,N-dietil-meta-toluamida e
N,N-dietil-3-metilbenzamida (sic). De fato, a nomenclatura
IUPAC para o DEET é [N-N]-diethyl-m-toluamide, e ambos
os rótulos (Tabela 1), tanto para o produto que saiu de linha
como para o OFF! Novo! estão, portanto, usando sinonímias.
A Tabela 1 mostra os resultados para a comparação entre
os repelentes OFF! que saiu de linha e o produto novo.
Considerando-se todas as réplicas, a média de tentativas
de picadas nos dedos não protegidos por repelentes foi alta
(160,4 picadas /15 min; DP = 20,8), indicando uma forte pressão
de ataque. Para os dedos protegidos pelos repelentes, o
teste estatístico mostrou que não houve diferença significativa
entre as avaliações JAA (t = 1; gl = 6; P = 0,1779) e 2hAA (t
= -1,6917; gl = 6; P = 0,0708), e que a proteção permitida por
ambas as formulações foi praticamente completa, alcançando
valores acima de 96%. Para a avaliação 4hAA entretanto,
houve diferença estatisticamente significativa (t = -3.0437; gl
= 6; P = 0,0113) entre as duas formulações, com o produto
OFF! antigo mostrando-se mais eficiente do que o OFF! novo.
Tabela 1. Índice de proteção percentual médio (Desvio Padrão) às
picadas de Aedes aegypti para os períodos Justamente Após (JAA), 2
horas (2hAA), e 4 horas (4hAA) após a aplicação de duas fórmulas de
um repelente à base de DEET.
4
Produto
(Ingrediente Ativo)*
OFF! Repelente de Insetos
(N-N-Dietiltoluamida 7.1%)
OFF! Repelente de Insetos
Novo!
(Diethyl Toluamide)
Período após a Aplicação
JAA 2hAA 4hAA
100 (0,0)a 99,2 (1,02)a 96,8 (1,53)a
99,8 (0,37)a 96,6 (3,43)a 86,9 (9,01)b
*De acordo com o rótulo
Para cada coluna, medias seguidas pela mesma letra não diferem
significativamente pelo teste de t de Student.
Ao estabelecerem também em gaiolas uma curva dose-
-resposta de mosquitos Ae. aegypti ao DEET, para uma série
de diluições, Buescheret al. (11) registraram uma curva exponencial
negativa, significando que cada incremento na concentração
permitia um incremento progressivamente menor
na proteção às picadas. Assim, para um aumento ou diminuição
em concentrações baixas, podem-se esperar variações
maiores do que quando se aumenta ou se diminui concentrações
já altas. E de acordo com Fradin (12), os repelentes
com altas concentrações de DEET são de fato melhores por
oferecerem proteções por períodos de tempo maiores, sendo
que modelos matemáticos mostram que a eficiência e persistência
em repelir são relacionadas ao logaritmo das doses.
CONCLUSÕES
Pode-se concluir então que, embora a informação do fabricante
pelo serviço de atendimento ao consumidor não tenha
sido específica, e foi de que a nova fórmula possui entre
6% e 9% i.a., de fato o produto deve possuir concentração
inferior ao produto que saiu de linha (7,1%).
R E f E R ê N C I A S
CURTIS, C.F. Personal protection methods against vectors of disease.Rev.
Med. Vet. Entomol. 80: 543-53, 1992.
FRADIN, M.S. Insect repellents.E-medicine (2002).. USA. . Acessoem Nov. 12,
2009.
KOREN G.; MATSUI D. & B. BAILEY.DEET-based insect repellents:
safety implications for children and pregnant and lactating women.
Can. Med. Assoc. J. 169: 209-212, 2003.
ANDRADE, C.F.S. Repelentes de Mosquito - Base Técnica para
Avaliação (2008). Artigos Técnicos em Ecologia Aplicada - Unicamp.
Disponível em:
Acesso em Jun. 15, 2011.
SYED, Z. & W.S. LEAL. Mosquitoes smell and avoid the insect repellent
DEET. Proc. Natl. Acad. Sci.105: 13598–13603. (2008).
Disponível em: Acesso em Ag. 22, 2010.
PICKETT, J.A.; BIRKETT, M.A. & J.G. LOGAN.DEET repels ORNery
mosquitoes. Proc. Natl. Acad. Sci. 105: 13195-13196. (2008).
Disponível em:
Acesso em Jun. 21, 2011.
OFF Insect Repellents. Which OFF! ® product with DEET is right for
you? 2009. Available at Acesso
em Ag. 22, 2009.
ANvISA.Câmara Técnica de Cosméticos – CATEC. Parecer Técnico
Nº 2. 2006.Utilização do DEET em preparações de repelentes para
insetos. Available at
Acessoem Jun. 2011.
ANDRADE, C.F.S. & v.S. BUENO.Evaluation of three laboratory
methods for the comparative test of mosquito repellents using
Aedesalbopictus (Skuse) (Diptera: Culicidae) in Brazil. The Annals of
Medical Entomology. 10: 34-40, 2001.
COMBEMALE, P.; DERUAZ, D.; vILLANOvA, D. & P. GUILLAUMONT.
Lês insectfuges ou lês répellents. Ann. Dermatol. Venereol. 119:
411-434,1992.
BUESChER, M.D.; RUTLEDGE, L.C.; WIRTZ, R.A. & J.h. NELSON.
The dose-persistence relationship of deet against Aedesaegypti.
Mosquito News 43: 364-366, 1983.
FRADIN, M.S. Mosquitoes and Mosquito Repellents: A cliniciscian´s
guide. Ann. International Medicine. 128: 931-940, 1998.