ESTUDO DOS MECANISMOS ENVOLVIDOS NAS ALTERAÇÕES ...

3.1 Animais Experimentais e Indução da Dengue com o DENV-3
Material e Métodos
Para o desenvolvimento do modelo experimental de infecção pelo
DENV-3, foram utilizados camundongos da linhagem BALB/c machos com 08 a
10 semanas de idade, obtidos no Centro de Bioterismo (CEBIO) da
Universidade Federal de Minas Gerais (UFMG). Os animais foram infectados
por via intraperitoneal (i.p.) com o DENV-3 adaptado ao hospedeiro murino.
Em todos os protocolos experimentais os animais não infectados (NI) e
os animais infectados foram sacrificados no 3º e 6º dia após a inoculação. Os
animais definidos como animais não infectados receberam a injeção
intraperitoneal com salina. Todos os animais foram mantidos em micro-
isoladores, sob condições controladas de temperatura (22 ± 2°C), iluminação
(ciclo claro-escuro de 12/12 horas), e com livre acesso a água e ração.
Todos os procedimentos adotados neste estudo foram previamente
aprovados pelo Comitê de Ética em Experimentação Animal (CETEA) da
UFMG, sob número 038/10.
3.2 Vírus
Neste trabalho foi utilizado o sorotipo 3 do vírus da dengue proveniente
de um isolado clínico. O vírus foi adaptado ao hospedeiro murino, conforme
previamente descrito por Atrasheuskaya e cols. (2003) (Atrasheuskaya et al.,
2003).
De forma resumida, para a adaptação do vírus e aumento da virulência
do isolado no hospedeiro murino, o mesmo foi inicialmente injetado por via
intracerebral (i.c.) em camundongos neonatos (com dois dias de vida -
linhagem BALB/c). Os cérebros dos camundongos que apresentavam
morbidade foram retirados, no 5° dia após infecção, e um homogenato dos
mesmos foi realizado em uma solução de PBS a 10% (p/v), centrifugado (6.000
rpm; 4 o C; 1 minuto), o sobrenadante foi coletado e essa solução, novamente
injetada i.c. em novos animais. Foram realizadas 8 passagens do vírus no
cérebro de camundongos neonatos. Em seguida, animais com 2 semanas de
vida foram infectados por via intraperitoneal. O aparecimento dos sinais clínicos
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