I Congresso de Biomedicina - Unifenas

UNIFENAS
Universidade José do Rosário Vellano
Curso de Biomedicina
ANAIS
l Congresso e V Simpósio de Biomedicina
ALFENAS – MG
2008

UNIFENAS
Universidade José do Rosário Vellano
Prof a . Maria do Rosário Araújo Velano
Reitora da UNIFENAS
Dr a . Larissa Araújo Velano
Vice-Reitora da UNIFENAS
Dr a . Viviane Araújo Velano Cassis
Chefe de Gabinete da Reitoria
Prof. João Batista Magalhães
Supervisor de Campi
Prof a . Daisy Fabris de Almeida Singi
Supervisora Pedagógica
Prof. Vinícius Vieira Vignoli
Supervisor de Texto e Publicações
Prof. Oswaldo Luiz Mariano
Supervisor Administrativo
Prof. Mário Sérgio de Oliveira Swertz
Surpervisor de Pesquisa e Pós-graduação
Paulo Tadeu Barroso de Sales
Gerente Financeiro
Sandra Regina Remondi
Supervisão de Avaliação
Prof a . Marlene Leite Godoy Vieira de Souza
Coordenadora de Graduação
Prof. Rogério Ramos do Prado
Coordenador de Extensão – Campus Alfenas
Profa. Luísa Barbosa Messora
Coordenadora do Curso de Biomedicina – Campus Alfenas

COMISSÃO ORGANIZADORA
Julieta Maria M. N. M. Santos
Luisa Barbosa Messora
Marcelo Reis Costa
Nelma de Mello Silva Oliveira
Silmara Paula Gouveia de Lima
COMITÊ CIENTÍFICO
Luisa Barbosa Messora
Marcelo Reis Costa
Nelma de Mello Silva Oliveira
COMISSÃO ORGANIZADORA ACADÊMICA
Cristiane da Silva dos Santos
Danylo Dosa de Paiva
Francini Marcelini Silva Neves
Helena Yukie Inohue
Juliana Cristina Pereira
Susana Linares Xisto
Apoio Institucional
Coordenação do Curso Bomedicina
Luisa Barbosa Messora
Assessoria de Divulgação
Equipe de Imprensa
Jornal da UNIFENAS / Jornal dos Lagos / TV Alfenas / Rádio Atenas
Impressão
Arte Gráfica Atenas

AGRADECIMENTO
O Congresso do Curso de Biomedicina abriu um espaço no qual alunos e professores,
num trabalho em conjunto, mostram suas pesquisas no intuito de contribuir com o
progresso científico e com a Universidade José do Rosário Vellano consolidando um dos
pilares que sustentam a nossa Universidade. Portanto, cabe o nosso agradecimento a
Reitora Prof a . Maria do Rosário Araújo Velano, a Vice–Reitora Dr a . Larissa Araújo Velano
e a Chefe de Gabinete Viviane Araújo Velano Cassis que primam pelo ensino de
qualidade, pela extensão da universidade em trabalhos a comunidade e pela pesquisa de
qualidade. E aos Supervisores de Campi João Batista Magalhães, de Texto e Publicação
Vinicius Vignoli, Pesquisa e Pós-graduação Mário Sérgio Swertz de Oliveira e a
Coordenadora de Graduação Prof a . Marlene Leite Godoy Vieira de Souza que juntos
ajudam a manter uma administração harmoniosa e eficiente. E, ainda, aos professores,
alunos e todos os funcionários que não medem esforços para realização desses eventos
que enriquece a educação continuada. E, finalmente, a Coordenadora do Curso de
Biomedicina Luisa Barbosa Messora que com sua dedicação e esforços trabalha para
realização do Congresso e Simpósio de Biomedicina.
COMITÊ CIENTÍFICO
Luísa Barbosa Messora
Nelma de Mello Silva Oliveira
Marcelo Reis Costa

16h - ENTREGA DE MATERIAL
16h30min - CERIMÔNIA DE ABERTURA
I Congresso e V Simpósio de Biomedicina
19 a 21 de novembro de 2008 – Sala de Eventos I
19 de novembro
17h - PALESTRA 1 - "Legalidades, Responsabilidades e os Campos de Atuação do Profissional
Biomédico”
Dra. Tatiana Marylin Freire Casarino
Biomédica - Delegacia do CRBM 3º região em B.H Especialista em Administração Hospitalar e
Biotecnologia Professora da UNIFENAS - Campus Boaventura B.H
9h - MINICURSO 1 – “Biomedicina e Perícia Criminal"
Dra. Bruna Libone UNESP/Botucatu
Biomédica - Perita Criminal NPC Ribeirão Preto
20 de novembro
14h - APRESENTAÇÃO DE TRABALHOS CIENTÍFICOS
17h - PALESTRA 2 - "Nutrigenômica: implicações da interação nutriente-genoma"
Dra. Fernanda Aparecida Domenici
PhD Biomédica responsável pelo Laboratório de Nutrição do Departamento de Clínica Médica da
Faculdade de Medicina USP - Ribeirão Preto
19h - PALESTRA 3 - "Atuação do Profissional Biomédico na Imagenologia"
Dra. Thais Maria Almeida Costa - Ex-aluna do curso de Biomedicina da UNIFENAS.
Especialista em Imagenologia pelo Instituto de Ensino e Pesquisa Albert Einstein
21 h - PALESTRA 4 - PALESTRA MOTIVACIONAL
21 de novembro
16h - PREMIAÇÃO DOS TRABALHOS CIENTÍFICOS
17h - PALESTRA 5 - "PCR em Tempo Real: Conceitos e Aplicações"
Dr. Robson Francisco Carvalho
PhD UNESP/Botucatu Laboratório Applied Biosystems SP
19h - PALESTRA 6 - "A Importância da Célula-Tronco no Futuro da Humanidade"
Dra. Bárbara Amélia Santana Lemos
PhD Responsável pelo Laboratório de Hematologia da Faculdade de Medicina USP -Ribeirão
Preto
21 h - PALESTRA 5 - "Pelos Caminhos do Sangue"
Dra. Ana Silvia Gouvêa de Lima
Doutora em Genética Responsável pelo Laboratório de Hematologia da Faculdade de
Medicina USP - Ribeirão Preto

Sumário
Teste do micronúcleo em células da medula óssea de roedores in vivo para
avaliação do potencial mutagênico do extrato hidroalcoólico de Tabebuia
avellanedae Lor. ex Griseb. (ipê-roxo) ...........................................................................8
Análise da atividade antimicrobiana com diferentes extratos de própolis ..................9
Prevalência da Gardnerella vaginalis e sua abordagem no diagnóstico
colpocitológico .............................................................................................................. 10
Avaliação microbiológica de salames industrializados e artesanais comercializados
na cidade de Alfenas ..................................................................................................... 11
Pesquisa de enteroparasitas helmintos e protozoários com ênfase em
Cryptosporidium spp. e Giardia spp. em alfaces (Lactuca sativa) comercializadas
na feira livre de Alfenas/MG. ......................................................................................... 12
Frequência do polimorfismo SER228SER em pacientes brasileiros com a doença de
CHRCOT-MARIE-TOOTH tipo 1 ..................................................................................... 13
Freqüência da mutação SER72 em pacientes com a doença de CHARCOT-MARIE-
TOOTH tipo 1.................................................................................................................. 14
Escalas para pacientes neurológicos .......................................................................... 15
Eletroforese de enzima multiloco (MLEE) e análises de agrupamento de Candida
albicans isolada da cavidade bucal de estudantes brasileiros saudáveis ................ 16
Comparação da mutagenicidade entre eritrócitos policromáticos (medula óssea) e
normocromáticos (sangue periférico) micronucleados obtidos no teste do
micronúcleo em roedores in vivo ................................................................................. 17
CHARCOT-MARIE-TOOTH ligada ao X (CMTX): identificação de uma nova mutação
no gene da conexina 32 ................................................................................................ 18
Diversidade genética de candida albicans e candida dublieniensis produtores de
exoenzimas provenientes da cavidade bucal de pacientes diabéticos brasileiros .. 19
Análise da mutagenicidade do extrato de Helianthus annuus Linné (girassol)
através do teste de micronúcleo in vivo. ..................................................................... 20
Ensaio de mutagenicidade do extrato de Ziziphus joazeiro Mart. empregando o
teste do micronúcleo em roedores in vivo.......................... Erro! Indicador não definido.
Padrão de colonizacão mono e policlonal de Candida albicans altamente virulenta
entre pacientes diabéticos e seus cônjuges não-diabéticos ...................................... 22

Teste do micronúcleo em células da medula óssea de roedores in vivo para
avaliação do potencial mutagênico do extrato hidroalcoólico de Tabebuia
avellanedae Lor. ex Griseb. (ipê-roxo)
CABRAL, J.H.C.¹; ALVES, V.E.¹; RESENDE, M.R.¹; FLORÊNCIO, D.¹; DA SILVA, J.J.¹;
BASSI, R.C.¹; DA SILVA, L.M.¹; NOGUEIRA, D.A. 2 ; PINTO, L.H.F.¹; LOPES, J.R.G.¹;
RODRIGUES, R.S.¹; BORIOLLO, M.F.G.¹
1. Laboratório de Genética e Biologia Molecular - UNIFENAS, Alfenas, MG, Brasil.
2. Universidade Federal de Alfenas – UNIFAL, Alfenas, MG, Brasil.
A casca do ipê-roxo (Tabebuia avellanedae) é usada na medicina popular brasileira na
forma de extrato hidroalcoólico, por via tópica. Os ensaios farmacológicos confirmaram
sua ação benéfica em inflamações da pele e mucosas. O extrato feito com água
apresentou moderada atividade antineoplásica e antimicrobiana, sendo tóxica em dose
elevada. O teste do micronúcleo em medula óssea de roedores in vivo tem sido utilizado
para a detecção de agentes clastogênicos e aneugênicos e aceito pelas agências
internacionais e instituições governamentais, como parte dos testes para se estabelecer a
avaliação e o registro de novos produtos químicos e farmacêuticos. A pesquisa contribui
para o conhecimento do potencial genotóxico do extrato, no momento inexistente. Devido
a sua potencialidade nutricional e terapêutica em humanos, analisou-se o seu potencial
mutagênico através do teste do micronúcleo em roedores in vivo, camundongos Swiss
albinus adultos jovens. Os animais foram aclimatados às condições do laboratório por 7
dias, tratados com ração comercial Labina Purina ® e água ad libitum em ambiente
climatizado a 22°C ± 3°C e ciclos de luminosidade de 12h. O tratamento foi administrado
por gavagem (100µL.10g -1 de massa corpórea) uma única vez empregando-se cinco
grupos de animais (3 machos e 3 fêmeas por grupo), e em duplicata a fim de posteriores
análises nos tempos de 24h e 48h (tratamentos de 500, 1000, 1500 e 2000mg.Kg -1 ).
Controles negativo (NaCl 0,9%) e positivo (50 mg.Kg -1 de N-Nitroso-N-ethylurea) foram
incluídos. Após os tempos de tratamento, os animais foram sacrificados, os fêmures
foram retirados e células da medula óssea foram coletadas (1mL de NaCl 0,9%),
homogeneizadas e centrifugadas (1000rpm/5min). As lâminas foram preparadas por
esfregaço, mantidas a temperatura ambiente e submetidas a coloração (Leishman
eosina-azul). Eritrócitos policromáticos (PCEs) foram analisados quanto à presença de
micronúcleos (aumento de 1000X), contados (2000 PCEs/animal) e fotografados. Os
dados foram submetidos à análise estatística de variância, em delineamento inteiramente
casualizado e esquema fatorial 7X2X2 (tratamentoXsexoXtempo), e ao teste Tukey
(P

Análise da atividade antimicrobiana com diferentes extratos de própolis
JOSÉ, T. D. S. 1 , ASSUNPÇÃO, R. 1 , OLIVEIRA N. M. S. 1 , FIORINI, J. E. 1
1.Laboratório de Biologia e Fisiologia de Microrganismos – UNIFENAS, Alfenas, MG,
Brasil.
A própolis tem origem a partir de uma substância resinosa e aromática, coletada de
caules, brotos e botões florais de plantas, a qual é transformada na colméia por enzimas
salivares de abelhas da espécie Apis mellifera. Sua utilização como antimicrobiano é uma
alternativa econômica e eficaz, além de não promover a seleção de microrganismos
patogênicos. É consenso entre os autores que a própolis é ativa principalmente contra
bactérias Gram-positivas, havendo, entretanto, atividade limitada contra bactérias Gramnegativas.
Objetivou-se avaliar a ação antimicrobiana in vitro de diferentes extratos de
própolis. Foram utilizadas três diferentes amostras de própolis, das quais duas foram de
extratos alcoólicos e uma de extrato aquoso. As espécies Bacillus cereus, B. subtilis,
Enterobacter aerogenes, Escherichia coli, Klebsiela pneumoniae, Micrococcus luteus,
Proteus mirabilis, Pseudomonas aeruginosa, Salmonella typhimurium, Staphylococcus
aureus, Staphylococcus epidermidis, Streptococcus pyogenes, Candida albicans,
Cryptococcus neoformans e Saccharomyces cerevisiae, foram submetidas à sua ação
antimicrobiana nas concentrações de 50 e 200mg/mL. Os testes foram realizados em
ágar Mueller-Hinton pela técnica de poços descrita por Bauer e Kirby. Os extratos
alcoólicos da própolis nas concentrações de 50mg e 200mg inibiram o crescimento de B.
cereus, B. subtilis, K. pneumoniae S. pyogenes, C. albicans, E. aerogenes M. luteus e S.
cerevisiae. Entretanto, não foram eficazes sobre E. coli, P. mirabilis, P. aeruginosa, S.
typhimurium, S. aureus, S. epidermidis e C. neoformans. O extrato aquoso não
apresentou efeito antimicrobiano nas concentrações testadas. Os extratos alcoólicos
apresentaram efeitos antimicrobianos satisfatórios, sobretudo no tocante às bactérias
Gram-Positivas, diferentemente do extrato aquoso. Os resultados corroboram os achados
da literatura, reafirmando o relevante potencial da própolis como antibiótico natural.
Palavras-chave: Extrato de própolis, atividade antimicrobiana, microrganismos.

Prevalência da Gardnerella vaginalis e sua abordagem no diagnóstico
colpocitológico
BRAGA, C. R. B. 1 ; FERREIRA, D. S. 1 ; OLIVEIRA, M.C.S.M.A. 1 ; SILVÉRIO, A. S. D. 2
1. Acadêmicos do Curso de Biomedicina - UNIFENAS, Alfenas, MG, Brasil.
2. Professora do Curso de Biomedicina - UNIFENAS, Alfenas, MG, Brasil.
Gardnerella vaginalis (GV) é um dos microorganismos frequentemente envolvidos em
casos de vaginose. É uma bactéria anaeróbia que se desenvolve em ph alcalino,
normalmente quando há um desequilíbrio da microbiota feminina, gerado por uma
diminuição do número de lactobacilos. O diagnóstico desse microorganismo se baseia na
identificação através da coloração de Gram, de células chave, cobertas de coco-bacilos
pleomórficos Gram lábeis (GV), ou bacilos delgados e curvos. No exame Papanicolaou é
possível a realização do diagnóstico baseado em suas características morfológicas. Os
esfregaços vaginais mostram bastonetes bacilares que recobrem parcial ou totalmente as
células do trato genital feminino e aderem a sua superfície, essa disposição dos bacilos
mostra um aspecto característico das células, denominando-as de ´´Clue Cell``. Com a
finalidade de investigar a prevalência da Gardnerella vaginalis como agente causador de
vaginose bacteriana em mulheres, foi realizado um estudo com 4233 mulheres atendidas
pelo serviço de citologia clínica de um laboratório de citopatologia no período de 2000 a
2006. Realizou-se um levantamento de 4233 laudos de pacientes submetidas ao exame
Papanicolaou nesse período. Dentre as 4233 mulheres submetidas ao estudo através da
análise estatística dos dados, observou-se que 2494 (58,91%) apresentaram a
Gardnerella vaginalis como agente causador de vaginose bacteriana. Os dados obtidos
encontram-se em conformidade com a literatura, e demonstram a importância das
campanhas educativas com relação à saúde da mulher, bem como as demais doenças
de transmissão sexual. O exame citopatológico é sem duvida de suma relevância como o
método de avaliação ginecológica da paciente, permitindo a identificação de moléstias de
grande importância na oncologia e na microbiologia.
Palavras-chave: Gardnerella vaginalis, Vaginose bacteriana, Papanicolaou

Avaliação microbiológica de salames industrializados e artesanais comercializados
na cidade de Alfenas
SILVA, J. G. 1 ; OLIVEIRA, N. M. S. 1 ; FIORINI, J. E. 1
1. Laboratório de Biologia e Fisiologia de Microrganismos – UNIFENAS, Alfenas, MG,
Brasil.
Salames Industrializados e artesanais são freqüentemente responsáveis pela veiculação
de enfermidades transmitidas por alimentos, tornando-se assunto de interesse devido ao
risco que representam à saúde pública. O objetivo deste estudo foi avaliar a qualidade
microbiológica de salames industrializados e artesanais comercializados na cidade de
Alfenas - MG. Foram coletadas amostras provenientes de supermercados e realizadas
análises microbiológicas para avaliar coliformes totais (35ºC) e termotolerantes (45ºC),
bactérias mesófilas, Listeria monocytogenes e Salmonella sp. Os resultados foram
comparados com os padrões vigentes no país, para alimentos destinados ao consumo
humano. Para bactérias mesófilas, as amostras apresentaram valores médios de 10 2 a
10 6 UFC/g, portanto fora dos padrões vigentes. Todas as amostras apresentaram
ausência de Listeria monocytogenes, coliformes totais (35ºC) e fecais (45ºC). Três
amostras mostraram-se impróprias ao consumo por albergarem Salmonella sp. Concluise
que alguns tipos de salames industrializados e artesanais comercializados na cidade
de Alfenas podem apresentar risco à saúde pública, por indicarem contaminação
microbiana acima dos valores vigentes na legislação. Estes são os resultados parciais e o
trabalho encontra-se em andamento.
Palavras-chave: salames, microrganismos, enfermidades.

Pesquisa de enteroparasitas helmintos e protozoários com ênfase em
Cryptosporidium spp. e Giardia spp. em alfaces (Lactuca sativa) comercializadas
na feira livre de Alfenas/MG.
RODRIGUES, R.T. 1 ; SOUZA, A. V. 1 ; PEREIRA, M.A. 1
1. Laboratório de Parasitologia - UNIFENAS, Alfenas, MG, Brasil.
A presença de enteroparasitas helmintos e protozoários tem sido relatada em amostras
de alimentos que incluem vegetais folhosos, tais como alface (Lactuca sativa). Estes
parasitos são reconhecidos mundialmente como importantes agentes causadores de
gastroenterites em humanos e diarréia em animais. Giardia spp e Cryptosporidium spp.,
re-emergente e emergente, destacam-se pela elevada incidência de casos,
características de resistência aos tratamentos químicos e capacidade de permanência no
meio ambiente. O importante papel desses protozoários em vários surtos epidêmicos de
veiculação hídrica e alimentar coloca em evidência as hortaliças que por serem ingeridas
cruas, favorecem a aquisição de parasitoses. No Brasil, são escassos os dados sobre a
ocorrência de helmintos e protozoários, com destaque para Giardia spp. e
Cryptosporidium ssp., em vegetais folhosos como alface, alimentos frescos amplamente
consumidos pela população. O propósito deste estudo foi investigar a ocorrência de
protozoários e helmintos intestinais, em amostras de alface cultivadas na região agrícola
e comercializadas na feira livre de Alfenas/MG., assim como, investigar as condições
higiênico-sanitárias das Unidades de Produção Agrícola - UPAs estudadas (n=10). Para
tanto, as coletas foram realizadas durante seis meses consecutivos, observando períodos
que caracterizassem a acentuada sazonalidade dos parasitos. As diversas amostras de
alface, após serem lavadas com 100 mL de solução contendo Tween 80 (1 %), foram
filtradas em membranas de ésteres mistos de celulose (47 mm de diâmetro e 3 µm de
porosidade nominal), seguida de eluição mediante extração mecânica dos parasitos.
Após concentração por centrifugação (1050 x g por 10 minutos), os sedimentos
resultantes foram examinados mediante colorações temporárias e permanentes para
enteroparasitas em geral e, particularmente, pela reação de imunofluorescência direta
para cistos de Giardia spp e oocistos de Cryptosporidium spp. Também se utilizou a
técnica de centrífugo-flutuação em Sulfato de zinco, com o intuito de comparar a
eficiência de detecção destes protozoários em vegetais folhosos. A técnica de centrífugoflutuação
em Sulfato de zinco, comparada a Técnica de Filtração em Membrana,
mostrou-se ineficiente, pois não foi revelada a presença de nenhum parasito intestinal
humano ou bioindicador de contaminação fecal. A sensibilidade da técnica de Filtração
em Membrana para amostras de alface, além de revelar a presença de 4,9 % de
helmintos intestinais (Ovos de Taenia sp. e Ovos de Toxocara sp.) e 6,7 % (Cistos de
Entamoeba coli) de protozoários comensais bioindicadores. Cistos de Giardia spp. foram
encontrados em 30 % das amostras de alface, com densidade de 270 a 1380 cistos/50g.,
e, oocistos de Cryptosoridium spp. foram encontrados em 33,3 % das amostras de alface,
com densidade de 110 a 1060 cistos/50g., de folhas de vegetal além da presença de
helmintos intestinais, o que representa elevada importância em Saúde Pública, dada a
possibilidade de aquisição de giardiose e criptosporidiose, assim como as demais
enteroparasitoses. O esclarecimento sobre a dispersão destes parasitas no ambiente e o
aperfeiçoamento de procedimentos de detecção dos mesmos quer em amostras hídricas
ou alimentares são vantajosos para o entendimento da epidemiologia destes patógenos.
Palavras-chave: helminto intestinal, protozoário intestinal, Cryptosporidium spp., Giardia
spp., hortaliça, veiculação alimentar.

Frequência do polimorfismo SER228SER em pacientes brasileiros com a doença de
CHRCOT-MARIE-TOOTH tipo 1
SILVA, F.O. 1 ; LIMA, S. P. G 1 ; BORGHETTI, V. H. S 1 ; BARREIRA, A. A. 1 ; MARQUES, W
Jr. 1
1. Departamento de Neurociências e ciências do Comportamento da Faculdade de
Medicina de Ribeirão Preto – USP.
A doença de Charcot-Marie-Tooth tipo 1 (CMT1) é a mais freqüente Neuropatia
Hereditária Sensitivo Motora, sendo um grupo heterogêneo de afecções com descrição
sempre crescente de quadros clínicos variados com diferentes tipos de herança. A
CMT1B que ocorre devido alterações no gene da proteína zero da mielina (MPZ ou P0) e
representa de 5% a 10% das CMT geral, tendo sido identificadas até o momento 123
diferentes mutações neste gene. O objetivo do presente estudo foi avaliar a freqüência do
polimorfismo Ser228Ser em pacientes brasileiros com CMT1 e em pacientes normais da
população brasileira. Foram avaliados 50 pacientes do Hospital das Clinicas da
FMRP/USP. O DNA foi extraído por método rotineiro. Após a pesquisa da duplicação
17p11.2-p.12, o gene da MPZ foi seqüenciado nas duas direções com a química Big Dye
e análise no seqüenciador automático ABI377. Em seis pacientes, foram detectadas as
transições da base C para T, transição da trinca de bases “TCC” para o “TCT” que
codificam o mesmo aminoácido, mantendo assim na posição 228 o aminoácido do grupo
polar Serina (Ser228Ser). Este polimorfismo foi descrito anteriormente por Nelis et al.
(1994); Roa et al. (1996); Bort et al. (1997) e Mersiyanova et al., (2000). Ser228Ser
parece ser a variante mais comum de MPZ, ocorrendo em várias populações. A
freqüência deste polimorfismo obtido no trabalho de Nelis et al. (1994) foi de 4,1%. A
freqüência que nós obtivemos foi ainda maior, sendo de 12% na população brasileira com
CMT1 negativos para a duplicação 17p. Nós analisamos famílias de pacientes que
apresentavam esse polimorfismo e também identificamos Ser228Ser em indivíduos
saudáveis. Analisamos 100 indivíduos normais e surpreendentemente obtivemos uma
freqüência de 39%. Com esse achado surge uma dúvida interessante, se o polimorfismo
Ser228Ser pode representar um efeito de um ancestral comum ou se faz refletir a
presença de um potencial “hot spot” no códon 228 do gene MPZ. Mais estudos também
serão necessários para esclarecer o verdadeiro efeito do polimorfismo Ser228Ser, tanto
em pacientes quanto em indivíduos normais.
Palavras-chave: Doença de Charcot-Marie-Tooth, neurociências, biologia molecular
Agência financiadora: Cnpq

Freqüência da mutação SER72 em pacientes com a doença de CHARCOT-MARIE-
TOOTH tipo 1
SILVA, F. O 1 ; LIMA, S. P.G. 1 , BORGHETTI, V. H. S. 1 ; BUENO, K. C. 1 ; BARREIRA, A.
A. 1 ; MARQUES W. Jr. 1
1. Departamento de Neurociências e ciências do Comportamento Faculdade de Medicina
de Ribeirão Preto – USP.
Mutações de ponto no gene PMP22 resultam em neuropatias desmielinizantes com uma
variedade de fenótipos como Charcot-Marie-Tooth 1 (CMT1A), Síndrome de Dejerine-
Sottas (DSS), Neuropatia Congênita Hipomielinizante (CHN) ou Neuropatia Hereditária
com Sensibilidade a Pressão Palpatória (HNPP). Muitas dessas mutações de ponto estão
no segundo domínio transmembrânico, agrupando a Ser72, que é responsável por
aproximadamente 26% das mutações encontradas neste gene e 0,6% das mutações de
CMT1. A substituição mais freqüente é a Ser72Leu, encontrada em 14 de 17 mutações
nesta posição. Este “hot spot” pode ser considerado uma estratégia para pesquisa de
mutações de ponto em neuropatias hereditárias desmielinizantes. O objetivo do presente
estudo foi avaliar a freqüência da mutação Ser72Leu em uma população de CMT1 que foi
negativa para a duplicação do cromossomo 17p11. 2. Foi testado o DNA de 200
pacientes negativos para duplicação, no Laboratório de Neurologia Aplicada e
Experimental do Departamento de Neurologia da Faculdade de Medicina de Ribeirão
Preto/USP, para a substituição Ser72Leu. O DNA foi extraído por método rotineiro. A
mutação Ser72Leu foi inicialmente pesquisada por PCR seguida por digestão com a
enzima TaqI. Mais recentemente, nós fizemos o screening desta mutação usando a
técnica de DHPLC. Nós encontramos somente uma mutação Ser72Leu dentre os 200
pacientes negativos para a duplicação. Ambas as técnicas apresentaram ser igualmente
eficientes. A freqüência estimada da mutação Ser72Leu encontrada neste estudo
apresentou resultados semelhantes à de outros trabalhos publicados. Embora, mais
estudos serão necessários para confirmar estes números. É uma estratégia importante a
pesquisa desta mutação se a duplicação é ausente e nenhuma mutação é presente no
gene da conexina32, que é responsável no mínimo por 10% dos pacientes com CMT1.
Ambas as técnicas que foram utilizadas são confiáveis, de fácil execução e de custo
efetivo, além disso, o DHPLC pode detectar outras mutações eventualmente presentes
no exon 4 do gene PMP22. Como estes pacientes têm geralmente um severo fenótipo, a
probabilidade de um resultado positivo aumenta significativamente se isto for também
considerado.
Palavras-chave: Doença de Charcot-Marie-Tooth, neurociências, biologia molecular
Agência financiadora: Cnpq

Escalas para pacientes neurológicos
SILVA, F.O. 1 , CERQUETANE, T. R. 2 , FRATESCHI, M. E. B. J. M 3
1.Centro Universitário “Barão de Mauá” e Faculdade de Medicina de Ribeirão Preto
(USP) – SP.
A observação clínica empírica não constitui mais um método aceitável sem dados
objetivos, que apóiem a tomada de decisão. A escala é uma forma de medida confiável,
fácil de ser aplicada e possibilita ao profissional de fisioterapia avaliar de modo
minucioso, fato que garante tratar da melhor forma seu paciente, gerando melhora na
evolução do quadro clínico de cada paciente. As escalas utilizadas neste estudo foram
escolhidas de acordo com sua construção, validade e confiabilidade, itens essenciais
para concluir a eficácia da escalas, acompanhando os métodos aplicados pela
comunidade científica atualmente. A partir deste direcionamento, foram determinadas as
escalas que serão aplicadas na avaliação clínica dos pacientes neurológicos. Estas são:
Asworth modificada, Barthel, GMFM, Marcha de 10 metros e NIHSS. Os objetivos deste
estudo foram: realizar estudo de caráter bibliográfico sobre escalas utilizadas em
pacientes com patologias neurológicas visando busca de melhores métodos quantitativos
de avaliação clínica; aumentar o conhecimento sobre métodos de avaliações
quantitativas, utilizar os métodos mais adequados na avaliação destes pacientes durante
prática clínica dos alunos de fisioterapia de qualquer instituição de ensino superior
brasileira e possibilitar melhora na avaliação e atendimento clínico dos pacientes
neurológicos, que apresentam as patologias mais freqüentes, estudadas anteriormente.
Foi realizada pesquisa bibliográfica, sendo desenvolvido a partir do material já elaborado,
constituído principalmente de livros e artigos científicos. A pesquisa bibliográfica é uma
pesquisa exploratória, realizada para obter conhecimentos, procurando buscar
informações publicadas em livros e documentos como catálogos, folhetos, artigos, além
de revistas e sites científicos. Durante esse procedimento foram utilizados como fontes
de dados livros referentes às escalas neurológicas, neurologia infantil e neurologia,
levantados na biblioteca Nicolau Dinamarco Spinelli (Centro Universitário “Barão de
Mauá”), na biblioteca Dr. Pedro Daniel Penha Filho da Universidade de São Paulo de
Ribeirão Preto (FMRP-USP), na biblioteca central da Universidade de Ribeirão Preto
(UNAERP) e na Universidade Paulista do Campus de Ribeirão Preto (UNIP); além de
achados bibliográficos contidos na internet através de sites de busca nacionais e
internacionais, incluindo sites de bases de dados como pubmed, scielo, lilacs e bireme;
com uso das palavras-chaves: escalas, escalas neurológicas, neurologia, neurologia
infantil, scales e neurological scales. Foram utilizados artigos e trabalhos cedidos de
acervo pessoal. A medição objetiva, em especial às escalas, fornece dados concretos
sobre as conseqüências mais comuns às patologias neurológicas: acidente vascular
cerebral (AVC) e paralisia cerebral (PC). Este trabalho permitiu elucidar de modo claro e
preciso a definição de medidas objetivas e sua importância dentro da comunidade
científica atual.
Palavras-chave: Neurologia, pediatria, escalas de avaliação

Eletroforese de enzima multiloco (MLEE) e análises de agrupamento de Candida
albicans isolada da cavidade bucal de estudantes brasileiros saudáveis
DA SILVA, J.J. 1 , BASSI, R.C. 1 , FLORÊNCIO, D. 1 , RESENDE, M.R. 1 , ALVES, V.E. 1 , DA
SILVA, L.M. 1 , RODRIGUES, R.S. 1 , BORIOLLO, M.F.G. 1
1. Laboratório de Genética e Biologia Molecular - Unifenas, Alfenas, MG, Brasil.
Candida albicans e espécies relacionadas são encontradas de forma ubíqua e comensal
na microbiota de cavidades (retal, bucal, vaginal, uretral, nasal, aural) e pele humanas.
Estas espécies são consideradas patógenos oportunistas capazes de causar infecções,
variando desde desordens mucocutâneas, não comprometedoras ao indivíduo, até
doenças invasivas, envolvendo quase todos os órgãos. O objetivo da presente pesquisa
foi avaliar a diversidade genética de C. albicans isolada da cavidade bucal de populações
de estudantes clinicamente saudáveis através de marcadores isoenzimáticos (MLEE) e
análises de agrupamento. Isolados de leveduras foram previamente identificados através
dos ensaios de formação de tubo germinativo, teste de produção de clamidoconídeos,
crescimento em meio cromogênico CHROMagar Candida ® , e testes de assimilação e
fermentação de carboidratos. Enzimas intracelulares, de leveduras previamente
cultivadas, foram extraídas em água bidestilada gelada empregando-se pérolas de vidro
e aparelho BeadBeater (Biospec Products, Inc.). Essas enzimas foram separadas em
géis de amido, sob tensão de 130 volts a 4ºC overnight, e submetidas ao processo de
revelação por métodos descritos para 11 sistemas: álcool desidrogenase, sorbitol
desidrogenase, manitol-1-fosfato desidrogenase, malato desidrogenase, isocitrato
desidrogenase, glucose desidrogenase, glucose-6-fosfato desidrogenase, aspartato
desidrogenase, catalase, peroxidase e leucina aminopeptidase. A interpretação genética
dos padrões de MLEE foi realizada seguindo a regra comumente aceita, a qual permite a
dedução da composição alélica de um organismo diplóide. A diversidade e o
relacionamento genético dentro e entre populações de isolados de C. albicans foram
determinados pelo coeficiente de distância genética de Nei e visualizados em
dendrogramas UPGMA gerados pelo método SAHN (Sequential, Agglomerative,
Hierarchic, Nonoverlapping Clustering Methods) algoritmo UPGMA (Unweighted Pair-
Group Method Using an Arithmetic Average). Essas análises foram feitas com o auxilio do
software NTSYSpc versão 2.2. Alta diversidade genética de C. albicans foi observada
em todas as populações de estudantes, com predominância de algumas linhagens.
Nenhuma correlação foi observada entre grupos de linhagens altamente relacionadas e
determinada população de estudantes. Em adição, divergências significantes entre as
freqüências genotípicas observadas e esperadas não foram detectadas (teste do
equilíbrio de Hardy-Weinberg). A existência de rotas de propagação direta e indireta
dentro e entre populações de estudantes saudáveis foi sugerida pela presente análise.
Alterações microevolucionárias foram observadas em isolados de C. albicans
provenientes de estudantes de uma mesma escola (origem geográfica). Tais resultados
vêm contribuir com os estudos sobre a diversidade e epidemiologia molecular dessa
espécie em populações de indivíduos clinicamente saudáveis. Ainda, esses dados
poderiam ser utilizados comparativamente com outras análises retrospectivas e em
andamento de C. albicans a fim de detectar a existência de grupos de leveduras
predominantes em candidíases e contribuir com o desenvolvimento de estratégias para a
prevenção de sua transmissão entre populações imunocompetentes ou
imunossuprimidas.
Palavras-chave: C. albicans, diversidade genética, estudantes saudáveis, MLEE, análises
de agrupamento.

Comparação da mutagenicidade entre eritrócitos policromáticos (medula óssea) e
normocromáticos (sangue periférico) micronucleados obtidos no teste do
micronúcleo em roedores in vivo
ALVES, V.E.¹; CABRAL, J.H.C.¹; RESENDE, M.R.¹; FLORÊNCIO, D¹; DA SILVA, J.J.¹;
BASSI, R.C.¹; DA COSTA, A.M.D.D.¹; FIORINI, J.E.¹; DA SILVA, L.M.¹; LOPES, J.R.G.¹;
NOGUEIRA, D. A. 2 ; BORIOLLO, M.F.G.¹
1.Laboratório de Genética e Biologia Molecular - UNIFENAS, Alfenas, MG, Brasil.
2. Universidade Federal de Alfenas, UNIFAL, Alfenas, MG, Brasil.
O teste do micronúcleo em roedores in vivo tem sido amplamente utilizado para a
detecção de agentes clastogênicos e aneugênicos e, ainda, aceito pelas agências
internacionais e instituições governamentais, como parte da bateria de testes
recomendada para se estabelecer a avaliação e o registro de novos produtos químicos e
farmacêuticos que entram anualmente no mercado mundial. Micronúcleos são analisados
em eritrócitos policromáticos de medula óssea (PCEs, eritrócitos jovens) de
camundongos ou ratos. Alternativamente em camundongo, os micronúcleos podem ser
analisados em eritrócitos normocromáticos circulantes (NCE, eritrócitos maduros), visto
que o baço de camundongo não seqüestra do sangue eritrócitos micronucleados. A
presente pesquisa compara os resultados de mutagenicidade do N-Nitroso-N-ethylurea
(controle positivo), NaCl 0,9% (controle negativo) e extrato hidroalcólico de sementes de
girassol (H. annuus Linné), obtidos a partir do teste do micronúcleo em PCEs (medula
óssea) e NCEs (sangue circulante) de roedores in vivo. Camundongos Swiss albinus
(machos e fêmeas) adultos jovens (30g a 40g) foram utilizados no teste. Antecedendo o
ensaio, esses animais foram aclimatados às condições do laboratório por 7 dias, tratados
com ração comercial Labina Purina ® e água ad libitum em ambiente climatizado a 22°C ±
3°C e ciclos de luminosidade de 12h. O tratamento foi administrado por gavagem
(100µL.10g -1 de massa corpórea) uma única vez empregando-se cinco grupos de animais
(3 machos e 3 fêmeas por grupo), e em duplicata a fim de posterior análises nos tempos
de 24h e 48h (extrato hidroalcóolico de H. annuus Linné para os tratamentos de 250, 500,
1000, 1500 e 2000mg.Kg -1 ). Controles negativo (NaCl 0,9%) e positivo (50 mg.Kg -1 de N-
Nitroso-N-ethylurea) foram incluídos. Após os tempos de tratamento, o sangue periférico
(ducto lacrimal) foi coletado por meio de capilares contendo heparina e submetido ao
esfregaço diretamente em lâmina. Então, os animais foram sacrificados por inalação de
CO 2 em câmaras de acrílico adaptadas, e os fêmures foram retirados e, rapidamente,
células da medula óssea foram coletadas (1mL de NaCI 0,9%), homogeneizadas e
centrifugadas (1000rpm/5min). Sedimentos celulares foram ressuspensos (500µL de
formol 4% em NaCI 0,9%) e cada lâmina também foi preparada por esfregaço. As
lâminas de ambos os procedimentos foram mantidas a temperatura ambiente e
submetidas a coloração (Leishman eosina-azul). PCEs e NCEs foram analisados quanto
a presença de micronúcleos (aumento de 1000X), contados (2000 PCEs e NCEs/animal)
e fotografados. Os dados foram submetidos à análise estatística de variância em
delineamento inteiramente casualizado, e ao teste Tukey (5% de significância)
empregando o software SAS ® (versão 8.01). Os resultados revelaram paridade qualitativa
dos ensaios realizados com PCEs e NCEs provenientes da medula óssea e sangue
periférico, sugerindo ausência de restrição para os ensaios do micronúcleo empregando
roedores in vivo (camundongos Swiss albinus).
Palavras-chave: mutagenicidade, eritrócitos policromáticos e normocromáticos,
micronúcleo.

CHARCOT-MARIE-TOOTH ligada ao X (CMTX): identificação de uma nova mutação
no gene da conexina 32
SILVA, F.O. 1 ; LIMA, S. P. G. 1 ; BORGHETTI, V. H. S 1 ; BARREIRA, A. A. 1 ; MARQUES, W.
Jr. 1
1. Departamento de Neurociências e Ciências do Comportamento da Faculdade de
Medicina de Ribeirão Preto – USP.
A doença de Charcot-Marie-Tooth ligada ao X (CMTX) é a segunda causa mais freqüente
de neuropatia hereditária, atrás da duplicação 17p11.2 (CMT1A). O gene responsável
pela CMTX é a conexina 32 (Cx32), tendo sido identificadas até o momento mais de 250
diferentes mutações. Em geral, os homens são mais intensamente acometidos e as
respectivas velocidades de condução (VC) situam-se em níveis intermediários (30-40
m/s), enquanto nas mulheres a neuropatia é, em geral, mais branda e a VC mais alta,
sugerindo axonopatia. Relatamos uma nova mutação no gene da Cx32 e o respectivo
fenótipo. Dois irmãos com CMT foram submetidos à avaliação clínica e eletrofisiológica.
O DNA foi extraído por método rotineiro. Após a pesquisa da duplicação 17p11.2-p.12, o
gene da Cx32 foi seqüenciado nas duas direções com a química Big Dye e análise no
sequenciador automático ABI377. Foi identificada uma mutação missense, ainda não
descrita, c.T394C (p.W132R) localizada no terceiro domínio transmembrânico (TM3) da
conexina 32, podendo esta mutação afetar a estrutura da proteína potencialmente,
modificando sua função. A mutação estava presente nos dois irmãos, tendo o caso índice
30 anos. Aos 12 anos iniciou quadro lentamente progressivo de dificuldade para marcha
e tremor em membros superiores. Seu irmão mais velho e quatro primos maternos
apresentam quadro clínico semelhante, enquanto duas primas maternas tinham apenas
pés cavos. A mãe, já falecida, sempre foi considerada normal. Ao exame, apresentava
fraqueza, hipotonia e hipotrofia de predomínio distal, mais acentuada em membros
inferiores e pés cavos. A sensibilidade profunda nos pododáctilos estava intensamente
afetada. Os reflexos profundos estavam ausentes, exceto o patelar e o triciptal que
estavam diminuídos. Havia ainda tremor postural e de ação nos membros superiores. O
exame eletroneuromiográfico evidenciou polineuropatia sensitivo-motora desmielinizante
simétrica com moderada redução das velocidades de condução (VC mediano = 33 m/s).
No caso apresentado, chama atenção o comprometimento exclusivo, ou predominante e
mais grave dos indivíduos do sexo masculino. Clinicamente merece destaque a presença
do tremor associado à mutação W132R, um achado incomum na CMTX.
Eletrofisiologicamente, a VC intermediária parece ser uma característica marcante dessa
forma de Neuropatia Hereditária Sensitivo Motora (NHSM), embora não permita distinção
com CMT1. Apesar de uma grande variedade de fenótipos terem sido descritos
associados a mutações no gene da Cx32, nosso achado confirma que a presença de
uma NHSM afetando mais intensamente indivíduos do sexo masculino associado à VC
intermediária são fortemente indicativos de CMTX. A nova mutação descrita expande
ainda mais o já enorme contingente de mutações associadas ao gene Cx32.
Palavras-chave: doença de Charcot-Marie-Tooth, neurociências, biologia molecular
Agência financiadora: Cnpq

Diversidade genética de candida albicans e candida dublieniensis produtores de
exoenzimas provenientes da cavidade bucal de pacientes diabéticos brasileiros
BASSI, R.C. 1 ; SPOLIDÓRIO, D.M.P. 1 ; BORIOLLO, M.F.G. 1
1. Laboratório de Genética e Biologia Molecular - UNIFENAS, Alfenas, MG, Brasil.
Pacientes diabéticos apresentam elevadas suscetibilidades às espécies de Candida,
especialmente C. albicans, com elevados índices de candidíases bucal. A presente
pesquisa investigou a diversidade genética e a virulência de isolados bucais de C.
albicans e C. dubliniensis provenientes pacientes com diagnósticos de diabetes mellitos
sob controle clínico. O estudo envolveu 54 pacientes provenientes das Unidades de
Atendimento do Programa Saúde da Família - Ministério da Saúde do Brasil -, do
município de Limeira, estado de São Paulo. A diversidade genética e a virulência foram
avaliadas por marcadores isoenzimáticos (MLEE) e análises de agrupamento e pelos
testes de produção de aspartil proteinases e fosfolipases em meios de cultura
microbiológicos específicos, respectivamente. Espécies de Candida foram observadas
em 79,9% dos pacientes, sendo 70,4% deles colonizados por C. albicans com ou sem
associação a outras espécies do gênero, incluindo C. tropicalis, C. krusei e C.
dubliniensis. Um total de 84 linhagens (ETs – Electrophoretic Types) em 189 isolados de
C. albicans e 6 isolados de C. dubliniensis foram encontrados. A maioria dos pacientes
Candida–positivo (92,1%) compartilhou isolados altamente relacionados, porém nãoidênticos
com pacientes diabéticos não-relacionados, independentemente do gênero do
paciente. Entretanto, clusters gênero-específicos e menores também foram observados,
os quais demonstraram um modo mono- ou policlonal de colonização bucal em um
mesmo paciente. Atividades exoenzimáticas de aspartil poteinases e fosfolipases
ocorreram em 100% e 92,6% dos isolados de C. albicans, respectivamente sem qualquer
correlação com o gênero do paciente, ET (electrophoretic type), e clusters de isolados
altamente relacionados. Os resultados sugerem a ocorrência bucal de linhagens (ETs)
altamente relacionadas e não-idênticas de C. albicans, capazes de produzir altos níveis
de exoenzimas, entre a maioria dos pacientes portadores de diabetes mellitos nãorelacionados
sob controle clínico, independentemente do gênero.
Palavras-chave: C. albicans, C. dubliniensis, diabetes mellitus, virulência, MLEE.

Análise da mutagenicidade do extrato de Helianthus annuus Linné (girassol)
através do teste de micronúcleo in vivo.
FLORÊNCIO, D 1 ; RESENDE, M.R. 1 ; ALVES, V.E. 1 ; DA SILVA, J.J 1 ; BASSI, R.C. 1 ; D.A.,
COSTA, A.M.D.D. 1 ; FIORINI, J.E. 2 ; DA SILVA, L.M. 1 ; NOGUEIRA, D.A. 3 ; BORIOLLO,
M.F.G. 1
1. Laboratório de Genética e Biologia Molecular - UNIFENAS, Alfenas, MG, Brasil.
2. 1. Laboratório de Biologia e Fisiologia de Microrganismos – UNIFENAS, Alfenas, MG,
Brasil.
3. Universidade Federal de Alfenas – UNIFAL, Alfenas, MG, Brasil.
O extrato ou óleo da semente de H. annuus Linné (Família Asteraceae) possui amplas
indicações como suplemento nutricional e como agente antioxidante. Relatos apontam
efeitos benéficos ao sistema cardiovascular e no combate a radicais livres. O teste do
micronúcleo em medula óssea de roedores in vivo tem sido amplamente utilizado para a
detecção de agentes clastogênicos e aneugênicos e, ainda, aceito pelas agências
internacionais e instituições governamentais, como parte da bateria de testes
recomendada para se estabelecer a avaliação e o registro de novos produtos químicos e
farmacêuticos que entram anualmente no mercado mundial. A presente pesquisa vem
contribuir para o conhecimento do potencial genotóxico desse extrato, até o presente
momento inexistente. Devido a sua potencialidade nutricional e terapêutica em humanos,
analisou-se o seu potencial mutagênico através do teste do micronúcleo em roedores in
vivo. Camundongos Swiss albinus (machos e fêmeas) adultos jovens (30g a 40g) foram
utilizados no teste. Antecedendo o ensaio, esses animais foram aclimatados às
condições do laboratório por 7 dias, tratados com ração comercial Labina Purina ® e água
ad libitum em ambiente climatizado a 22°C ± 3°C e ciclos de luminosidade de 12h. O
tratamento foi administrado por gavagem (100µL.10g -1 de massa corpórea) uma única
vez empregando-se cinco grupos de animais (3 machos e 3 fêmeas por grupo), e em
duplicata a fim de posterior análises nos tempos de 24h e 48h (tratamentos de 250, 500,
1000, 1500 e 2000mg.Kg -1 ). Controles negativo (NaCl 0,9%) e positivo (50 mg.Kg -1 de N-
Nitroso-N-ethylurea) foram incluídos. Após os tempos de tratamento, os animais foram
sacrificados por inalação de CO 2 em câmaras de acrílico adaptadas. Os fêmures foram
retirados e, rapidamente, células da medula óssea foram coletadas (1mL de NaCI 0,9%),
homogeneizadas e centrifugadas (1000rpm/5min). Sedimentos celulares foram
ressuspensos (500µL de formol 4% em NaCI 0,9%). As lâminas foram preparadas por
esfregaço, mantidas a temperatura ambiente e submetidas a coloração (Leishman
eosina-azul). Eritrócitos policromáticos (PCEs) foram analisados quanto a presença de
micronúcleos (aumento de 1000×), contados (2000 PCEs/animal) e fotografados. Os
dados foram submetidos à análise estatística de variância, em delineamento inteiramente
casualizado e esquema fatorial 7×2×2 (tratamento×sexo×tempo), e ao teste Tukey (5% de
significância) empregando o software SAS ® (versão 8.01). Os resultados revelaram
diferenças estatísticas significativas do número/índice percentual de PCEs
micronucleados entre o grupo de animais do controle positivo (ENU 50 mg.Kg -1 ) e
controle negativo (NaCl 0,9%), bem como controle positivo e tratamentos (250-
2000mg.Kg -1 ) com o extrato. Entretanto, essas diferenças não foram observadas entre o
grupo de animais do controle negativo e o grupo de animais tratados com o extrato e,
ainda, entre os sexos e os tempos de tratamento (24-48h), sugerindo que o extrato
hidroalcóolico de sementes de H. annuus Linné não apresenta potencial clastogênico
e/ou aneugênico.
Palavras-chave: Helianthus annuus Linné (girassol), extrato hidroalcoólico, teste do
micronúcleo, mutagênese, girassol.

Ensaio de mutagenicidade do extrato de Ziziphus joazeiro Mart. empregando o
teste do micronúcleo em roedores in vivo
RESENDE, M.R.¹, ALVES, V.E.¹, CABRAL, J.H.C¹, FLORÊNCIO, D¹, DA SILVA, J.J.¹,
BASSI, R.C.¹; DA COSTA, A.M.D.D.¹, FIORINI, J.E.¹, DA SILVA, L.M.¹, NOGUEIRA,
D.A.², PINTO, L.H.F¹, LOPES, J.R.G¹, BORIOLLO, M.FG.¹
1.Laboratório de Genética e Biologia Molecular - UNIFENAS, Alfenas, MG, Brasil.
2. Universidade Federal de Alfenas - UNIFAL, Alfenas, MG, Brasil.
Cascas e folhas de Ziziphus joazeiro Mart. (raspa-de-juá) são tradicionalmente usadas na
medicina popular do nordeste, na forma de extrato feito com água, usado por via oral
para alívio de problemas gástricos, e externamente para limpeza dos cabelos e dos
dentes e para clarear a pele do rosto, sendo referido inclusive como tonico capilar,
anticaspa e remédio útil nas doenças da pele. O teste do micronúcleo em medula óssea
de roedores in vivo tem sido amplamente utilizado para a detecção de agentes
clastogênicos e aneugênicos e, ainda, aceito pelas agências internacionais e instituições
governamentais, como parte da bateria de testes recomendada para se estabelecer a
avaliação e o registro de novos produtos químicos e farmacêuticos que entram
anualmente no mercado mundial. A presente pesquisa vem contribuir para o
conhecimento do potencial genotóxico desse extrato, até o presente momento
inexistente. Devido a sua potencialidade nutricional e terapêutica em humanos, analisouse
o seu potencial mutagênico através do teste do micronúcleo em roedores in vivo.
Camundongos Swiss albinus (machos e fêmeas) adultos jovens (30g a 40g) foram
utilizados no teste. Antecedendo o ensaio, esses animais foram aclimatados às
condições do laboratório por 7 dias, tratados com ração comercial Labina Purina ® e água
ad libitum em ambiente climatizado a 22°C ± 3°C e ciclos de luminosidade de 12h. O
tratamento foi administrado por gavagem (100µL.10g -1 de massa corpórea) uma única
vez empregando-se cinco grupos de animais (3 machos e 3 fêmeas por grupo), e em
duplicata a fim de posteriores análises nos tempos de 24h e 48h (tratamentos de 500,
1000, 1500 e 2000mg.Kg -1 ). Controles negativo (NaCl 0,9%) e positivo (50 mg.Kg -1 de N-
Nitroso-N-ethylurea) foram incluídos. Após os tempos de tratamento, os animais foram
sacrificados por inalação de CO 2 em câmaras de acrílico adaptadas. Os fêmures foram
retirados e, rapidamente, células da medula óssea foram coletadas (1mL de NaCI 0,9%),
homogeneizadas e centrifugadas (1000rpm/5min). Sedimentos celulares foram
ressuspensos (500µL de formol 4% em NaCI 0,9%). As lâminas foram preparadas por
esfregaço, mantidas a temperatura ambiente e submetidas a coloração (Leishman
eosina-azul). Eritrócitos policromáticos (PCEs) foram analisados quanto a presença de
micronúcleos (aumento de 1000X), contados (2000 PCEs/animal) e fotografados. Os
dados foram submetidos à análise estatística de variância, em delineamento inteiramente
casualizado e esquema fatorial 7X2X2 (tratamentoXsexoXtempo), e ao teste Tukey (5%
de significância) empregando o software SAS ® (versão 8.01). Os resultados revelaram
diferenças estatísticas significativas do número/índice percentual de PCEs
micronucleados entre o grupo de animais do controle positivo (ENU 50 mg.Kg -1 ) e
controle negativo (NaCl 0,9%) ou todos os tratamentos realizados. Portanto, sugere-se
ausência de potencial clastogênico e/ou aneugênico do extrato de Ziziphus joazeiro Mart.
Palavras-chave: extrato de Ziziphus joazeiro Mart. (raspa-de-juá), micronúcleo,
genotoxidade.

Padrão de colonizacão mono e policlonal de Candida albicans altamente virulenta
entre pacientes diabéticos e seus cônjuges não-diabéticos
BORIOLLO, M.F.G. 1 ; BASSI, R.C. 1 ; SPOLIDÓRIO, D. M. P. 1
1. Laboratório de Genética e Biologia Molecular, Universidade de Alfenas,
Alfenas, MG, Brasil.
Infecções bucais por espécies de Candida podem ser freqüentes e severas em pacientes
com diabetes mellitus. Essas espécies têm desenvolvido mecanismos específicos de
virulência que conferem habilidades para colonizar as superfícies dos hospedeiros, e
invadir tecidos profundos ou evadir as defesas dos hospedeiros. A presente pesquisa
investigou o perfil de colonização bucal por C. albicans, associada ou não a outras
espécies do gênero, e sua habilidade de virulência e transmissão entre pacientes com
diagnóstico clínico de diabetes mellitos e seus cônjuges não-diabéticos. Amostras bucais
de 52 casais foram plaqueadas diretamente sobre meio cromogênico a fim de avaliar a
homogeneidade populacional das espécies de Candida. A detecção de linhagens de C.
albicans strains (Electrophoretic Types - ETs) e seus relacionamentos genéticos foram
estabelecidos por marcadores isoenzimáticos (MLEE) e análises de agrupamento. A
virulência dos isolados de C. albicans foi avaliada pelos testes de proteinases e
fosfolipases usando métodos de cultura microbiológicos específicos. Em 12 casais
(23,1%), ambos os cônjuges mostraram colonização por C. albicans exclusivamente
(9,6%) ou em associação (13,5%), incluindo C. tropicalis, C. krusei, C. dubliniensis e
Candida spp. Em trinta e três casais (63,4%), apenas um dos cônjuges foi colonizado por
C. albicans (i.e., 19 pacientes diabéticos versus 14 cônjuges não-diabéticos). Espécies de
Candida não-albicans foram observadas em ambos os cônjuges de três casais (5,7%), e
a ausência de colonização por essas leveduras ocorreu em quatro casais (7,7%). MLEE
revelou 52 linhagens entre 119 isolados de C. albicans e 6 isolados de C. dubliniensis.
Linhagens idênticas (1,9% dos casais / 8,3% dos casais C. albicans-positivos) ou
altamente relacionadas (13,5% dos casais / 58,3% dos casais C. albicans-positivos)
foram observadas em ambos os cônjuges de oito casais, enquanto que linhagens
moderadamente relacionadas ou relacionadas geneticamente à distância ocorreram entre
cônjuges de quatro casais (7,7% dos casais / 33,4% dos casais C. albicans-positivos).
Em adição, casais ou cônjuges não-relacionados também mostraram um padrão de
colonização por linhagens idênticas ou altamente relacionadas. A habilidade de virulência
foi observada em acima de 90% dos isolados testados independentemente das
características genéticas do patógeno ou clínicas do hospedeiro. A colonização bucal
simultânea por espécies de Candida, especialmente C. albicans, entre pacientes
diabéticos e seus respectivos cônjuges foi relativamente baixa (12 de 52 casais), porém
na maioria desses casos a transmissão e a adaptação/microevolução de linhagens
podem ocorrer entre cônjuges relacionados (8 de 12 casais). Independentemente dessa
colonização simultânea, a maioria dos pacientes diabéticos (34 de 52) e dos seus
cônjuges não-diabéticos (29 de 52) podem representar uma fonte de transmissão e, em
condições de imunossupressão, apresentar sintomatologia clínica infecciosa proveniente
de uma variabilidade de linhagens oportunistas de C. albicans, altamente virulentas, bem
como outras espécies de Candida menos freqüentes.
Palavras-chave: C. albicans, transmissibilidade bucal, diabetes mellitus, virulência,
MLEE.