Avaliação microscópica e bioquímica da resposta celular a enxertos ...

2SICCA, C. M.; OLIVEIRA, R. C. de; SILVA, T. L. da; CESTARI, T. M.; OLIVEIRA, D. T.; BUZALAF, M. A. R.; TAGA, R.; TAGA, E. M.;GRANJEIRO, J. M.; KINA, J. R.Avaliação microscópica e bioquímica da resposta celular a enxertos de osso cortical bovino em subcutâneo de ratos. Efeito do tamanho da partículaIntroduçãoNa busca de desenvolver substitutos biológicos pararestaurar, manter ou melhorar a função de diversostecidos, um novo campo interdisciplinar tem emergidocom intenso vigor: a Engenharia de Tecidos. Váriasestratégias têm sido utilizadas nesse campo 27 , como: 1)reposição com material sintético; 2) enxertos xenogênicossubmetido à ligação cruzada para estabilização; 3) célulaspresas em câmaras de difusão, microcápsulas ou quecresceram sobre substratos reabsorvíveis; 4) substâncias,capazes de induzir células ou tecidos (fatores decrescimentos e morfogenes), destinadas e/ou implantadasno local adequado.Um dos poucos tecidos de mamíferos capazes deregeneração é o tecido ósseo. Em grande parte isto sedeve a habilidade dos fatores de crescimento emdirecionar as células-tronco para as vias condrogênica eosteogênica, e ao papel das forças mecânicas estimulandoa remodelação óssea.Contudo, grandes perdas ósseas ocasionadas pordoenças ou acidentes simplesmente não reparam. Nasdécadas recentes, temos aprendido a utilizar enxertos deoutros locais do corpo para seu tratamento. No entanto,em vários pacientes, a quantidade e qualidade do ossoque poderia ser utilizado simplesmente sãoinsuficientes 35 . Com a finalidade de superar taislimitações, vários pesquisadores em todo mundo têmbuscado materiais alternativos para substituição doenxerto autógeno.As características desejadas de um material ósseosubstitutosão: biocompatibilidade, previsibilidade eaplicação clínica sem riscos transoperatórios e seqüelaspós-operatórias mínimas, além de aceitação por parte dopaciente. Apesar de não se ter encontrado um materialque preencha todos esses requisitos, atualmente há umagrande variedade de opções para enxertos ósseos,associada a um avanço crescente no desenvolvimento eaperfeiçoamento de materiais para esse fim.Os materiais para enxerto ósseo podem serclassificados como osteogênicos, osteoindutores eosteocondutores. Os osteogênicos referem-se a materiaisorgânicos capazes de estimular a formação de ossodiretamente a partir de osteoblastos 25 . Os osteoindutoressão aqueles capazes de induzir a diferenciação de célulasmesenquimais indiferenciadas em osteoblastos oucondroblastos, aumentando a formação óssea no localou mesmo estimular a formação de osso em um sítioheterotópico 39,41 . Os materiais osteocondutores(geralmente inorgânicos) permitem a aposição de umnovo tecido ósseo na sua superfície, requerendo apresença de tecido ósseo pré-existente como fonte decélulas osteoprogenitoras 24 .Deste modo, diversos materiais têm sido empregadosna clínica odontológica em defeitos intra-ósseos, como:o enxerto alógeno mineralizado (FDBA) ou odesmineralizado liofilizado (DFDBA), e as cerâmicasbiocompatíveis como a de coral natural, fosfato de cálcioe hidroxiapatita sintética, vidros bioativos epolímeros 5,17,26,38,43,45, . Os derivados inorgânicos sintéticoscomo a hidroxiapatita e fosfato tricálcico, têm recebidogrande atenção como materiais de preenchimento,espaçadores e substitutos para os enxertos ósseos,principalmente devido a sua biocompatibilidade,bioatividade e características de osteocondução emrelação ao tecido hospedeiro 1,2,3,7,9,12,15,28,20,37 . Contudo,Stephan 36 (1999) relatou que a hidroxiapatita sintéticapossui microestrutura e tamanho do cristal muitodiferente do osso natural, o que poderia produzir respostabiológica indesejada. O osso cortical bovino é umahidroxiapatita natural de composição química,porosidade, tamanho e forma semelhantes à humana, queparece ter um comportamento mais fisiológico durante aregeneração óssea.Durante o desenvolvimento de novos biomateriais apreocupação com a forma e o tamanho do materialutilizado tem sido uma preocupação constante. Ainda émuito controverso o real papel do tamanho de partículasna resposta celular e tecidual aos enxertos ósseos 10,33 .O papel de carreador dos fatores de indução ósseapotencialmente pode ser desempenhado pelo osso bovinocortical ou medular, macro ou microgranular,desproteinizado, como já foi demonstrado em estudosclínicos 43 . Além de fornecer uma estrutura de suporte eosteocondução, podem prover também um alto conteúdode cálcio e fósforo, essenciais para a neoformação dotecido ósseo 8,32 .Continuando o estudo sistemático sobre potenciaiscarreadores para fatores de crescimento ou materiais parapreenchimento ósseo 29 , objetivamos neste trabalhocomparar a resposta tecidual ao osso inorgânico corticalbovino desproteinizado a 100°C (Gen-Ox ® , BaumerS.A.), nas formas micro (250-1000 µm) e macrogranular(1000-2000 µm), implantados em tecido subcutâneo deratos. Foi avaliada a correlação entre as característicasmicroscópicas do tecido reacional com a atividadeespecífica da fosfatase ácida de alta massa molecular (ummarcador lisossomal) e da fosfotirosina proteínafosfatase, uma classe de enzimas responsáveis pelocontrole do processo de proliferação e diferenciaçãocelular 13,14 .