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8SICCA, C. M.; OLIVEIRA, R. C. de; SILVA, T. L. da; CESTARI, T. M.; OLIVEIRA, D. T.; BUZALAF, M. A. R.; TAGA, R.; TAGA, E. M.;GRANJEIRO, J. M.; KINA, J. R.Avaliação microscópica e bioquímica da resposta celular a enxertos de osso cortical bovino em subcutâneo de ratos. Efeito do tamanho da partículapara cada tecido ou condição clínica, uma vez que ascaracterísticas físico-químicas de cada material e/ou dodefeito ósseo também afetam a resposta tecidual aoenxerto. Partículas grandes, mas friáveis, resultam emfragmentos pequenos que intensificam a respostainflamatória 19 . Fucini et al. 10 não encontraram diferençaestatisticamente significante no tratamento de defeitosósseos periodontais de pacientes utilizando DFDBA dediferentes tamanhos (250-500 e 850-1000µm).Certamente, estudos padronizados serão aindanecessários para se estabelecer a correta relação entre otamanho e características do material com o tipo e localdo defeito ósseo.A matriz inorgânica derivada de osso cortical bovinoé uma hidroxiapatita xenogênica, microporosa e natural,cujo similar nos Estados Unidos está aprovado pela “Foodand Drug Administration” para uso como material depreenchimento 43 . Neste trabalho, as partículas de ossocortical bovino, micro ou macrogranulares, produzidasno Brasil, proporcionaram uma resposta tecidual nosubcutâneo de ratos similar àquela descrita para o enxertoalógeno mineralizado nas mesmas condições 21 ,confirmando que o osso bovino pode ser utilizadoadequadamente como material de preenchimento.Resultados positivos relacionados com a utilizaçãode osso inorgânico bovino foram relatados anteriormente.Stephan 36 sugere o grande potencial deste tipo de materialquanto a seu emprego como carreador de proteínas efatores de crescimento, devido à capacidade deosteoblastos em culturas crescerem aderidos à suasuperfície. Yukna 43 e colaboradores relataram que o ossoinorgânico bovino em combinação com um peptídeorecombinante de 15 aminoácidos derivado do colágenoTipo I proporcionou resultados clínicos melhores que oDFDBA ou o retalho total, para o tratamento de defeitosósseos periodontais em humanos.Recentemente, Mankani et al 23 relataram que aextensão e qualidade do osso formado por células doestroma de medula óssea humana é fortementedependente da matriz carreadora dessas células. Nesteestudo demonstraram que partículas de hidroxiapatita/fosfato de cálcio com 0,1-0,25 mm de tamanhoresultavam na maior formação de osso.Nossos resultados mostram, tanto bioquimicamentequanto microscopicamente, que a resposta celular ao ossocortical bovino inorgânico desproteinizado a 100º C(Gen-Oxâ) é independe do tamanho da partícula emorfologicamente similar ao observado em enxertosalógenos em subcutâneo de ratos.ConclusãoA implantação de matriz óssea mineralizada edesproteinizada no tecido subcutâneo de ratos induz aformação de um granuloma tipo corpo estranho comrecrutamento de macrófagos e CGMIs. Os resultadosobtidos neste trabalho mostraram que o osso mineralizadobovino desproteinizado a 100°C quer micro (250-1000µm) ou macrogranular (1000-2000 µm), promove umaresposta tecidual semelhante à implantação subcutâneade osso autógeno ou alógeno mineralizado. Isto nossugeriu que os materiais testados podem ser usados comomaterial de preenchimento osteosubstitutos e comopotenciais candidatos a carreadores das proteínasmorfogenéticas do osso.AgradecimentosOs autores agradecem os servidores da FOB-USP,Ovídio dos Santos Sobrinho, Gilmar Vicente da Silva,Luiz Carlos da Silva, Erasmo Gonçalves da Silva, DanieleSanti Ceolin, pelo auxílio técnico prestado durante aexecução deste trabalho. Este trabalho foi financiado pelaFAPESP, PIBIC/CNPq, FOB-USP, PRP-USP.AbstractThe aim of this study was to investigate the cellularresponse upon implantation of micro (250-1000 µm) ormacrogranular (1000-2000 µm) particles of mineralizedbone graft produced from bovine cortical bonesdevitalized at 100ºC (Gen-Ox ® , Baumer S.A.). Particulatebone grafts were implanted at dorsal rat subcutaneouspocket and, after 10, 20, 30 and 60 days postimplantation,the reaction tissues were removed andprocessed for morphological and biochemical analysis.Morphologically, mono and multi-nucleated giant cellswere found in close apposition to the particles, resemblinga foreign body reaction, similarly to subcutaneousresponse to implants of autogenous bone or allografts.Despite the initial more intensive reaction induced bymicrogranular particles, after 60 days no significantdifferences were observed even by microscopic orbiochemical analysis. We conclude that bovine corticalbones devitalized at 100ºC could be used as bonereplacement graft materials and/or potential carriers forbone morphogenic proteins.Uniterms: Biomaterials; Bone graft; Phosphotyrosineprotein phosphatase; Acid phosphatase.
Rev. FOBV.8, n. 1/2, p.1-10, jan./jun. 20009Referências bibliográficas1- ARAGONÊS, A. et al. Uso de Hidroxiapatita microgranular empulpotomia. Rev. gaucha Odont., v.40, n.6, p.349-50,1992.2- BONACHELLA, W.C. et al. Manutenção do Rebordo Alveolarcom Hidroxiapatita Microgranular. Rev. gaucha Odont.,v.40, n.3, p.212-14, 1992.3- BURSTEIN, F.D. et al. The use of porous granularhydroxyapatite in secondary orbitocranial reconstruction.Plast. Reconstr. Surg., v.100, n.4, p.869-74, 1997.4- BUZALAF. M.A.R. et al. Kinetic characterization of bovinelung low-molecular-weight protein tyrosine phosphatase.Exp. Lung. Res., v.24, n.3, p.269-72, 1998.5- CIRELLI, J.A. et al. Evaluation of anionic collagen membranesin the treatment of class II furcation lesions: na histometricanalysis in dog. Biomaterials, v.18, n.18, p.1227-34, 1997.6- COTRAN, R.S.; KUMAR, V.; COLLINS, T. Robbinspathologic basis of disease. 6 ed. Philadelphia, Saunders1999. p.50-88.7- DAMIEN, C.J.; PARSONS, J.R. Bone graft and bone graftsubstitutes: a review of current technology andapplications. J. Appl. Biomater., v.2, n.3, p.187-208, 1991.8- DAMIEN, C.J. et al. Effect of demineralized bone matrix onbone growth within a porous HA material: a histologicand histometric study. J. Biomater. Appl., v.9, n.3, p.275-88, 1995.9- DE GROOT, K. Bioceramics consisting of calcium phosphatesalts. Biomaterials, v.1, n.1, p.47-50, 1980.10- FUCINI, S.E. et al. Small versus large particles ofdemineralized freeze-dried bone allografts in humanintrabony periodontal defects. J. Periodont., v.64, n.9,p.844-7, 1996.11- GLOWACKI, J. Osteoclastic Feature of Cells that Resorb BoneImplants in Rats. Calcif. Tissue Int., v.39, n.2, p.327-31,1986.12- GRANJEIRO, J.M. et al. Características físico-químicas deHidroxiapatita para uso clínico. Rev. gaucha Odont., v.40,n.2, p.130-4, 1992.13- GRANJEIRO, J.M. et al. Purification and characterization ofa low-molecular-weight bovine kidney acid phosphatase.An. Acad. bras. Cirurg., v.69, n.4, p.451-60, 1997.14.- GRANJEIRO, J.M. et al. Bovine kidney low molecular weightacid phosphatase: FMN-dependent kinetics. Biochem.Mol. Biol. Int., v.41, n.6, p.1201-6, 1997.15- GREGHI, S.L.A.; CAMPOS JUNIOR, A. Estudo comparativoda biocompatibilidade de materiais cerâmicos diversos emtecido subcutâneo de ratos. Rev. FOB, v.2, n.4, p.73-81,1994.16- HARTREE, E.F. Determination of proteins: a modification ofthe Lowry method that give a linear photometric response.Anal. Biochem., v.48, n.2, p.422-7, 1972.17- HERCULIANI, P. P. et al. Tratamento de defeito ósseo pereneem calvária de cobaia com membrana de cortical ósseabovina liofilizada associada ou não a enxerto ósseo bovinodesmineralizado. Rev. bras. Implant. v.7, n. 2, p.7-14,2000.18- HIGASHI, T., OKAMOTO, H. Influence of particle size ofcalcium phosphate ceramics as a capping agent on theformation of a hard tissue barrier in amputated dental pulp.J. Endod., v. 22, n. 6, p.281-3, 1996.19- HIGASHI, T., OKAMOTO, H. Influence of particle size ofhydroxyapatite as a capping agent on cell proliferation ofcultured fibroblasts. J. Endod., v. 22, n. 5, p.236-9, 1996.20- JARCHO, M. Calcium phosphates ceramics as hard tissuesprosthetics. Clin. Orthop. Rel. Res., v.157, p.259-78,1981.21- KELLY, J.D.; SCHNEIDER, G.B. Morphological andhistochemical comparison of cells elcitedby ectopic bonéimplants and tibial osteoclasts. Amer. J. Anat., v.192, n.3,p.45-54, 1991.22- KETCHAM, C.M. et al. The type 5, acid phosphatase fromspleen of humans with hairy cell leukemia. J. Biol. Chem.,v.260, p.5768-76, 1985.23- MANKANI, M.H. et al. In vivo bone formation by humanbone marrow stromal cells: effect of carrier particle sizeand shape. Biotechn. Bioeng., v. 72, n. 1, p.96-107, 2001.24- MASTERS, D.H. Implants. Bone and bone substitutes. Calif.dent. Ass. J., v.16, n.1, p.56-65, 1988.25- MARX, R.E.; SAUNDERS, T.R. Reconstruction andrehabilitation of cancer patients. In: FONSECA, R.J.;DAVIS, W.H. Reconstructive preprosthetic oral andmaxillofac. Surgery. Philadelphia, saunders, 1986. p.347-428.26- MARZOLA, C. et al. Implantes de biohapatita + osseobond +membrana reabsorvível dentoflex + aglutinante dentoflex.Apresentação de casos clínicos. Rev. Bras. Cienc. Estomat.,v.1, n.2, p.51-63, 1996.27- NIMNI, M.E. Polypeptide growth factors: targeted deliverysystems. Biomaterials, v18, n.18, p.1201-25, 1997.28- OLIVEIRA, D.T. et al. Hidroxiapatita microgranular:comportamento biológico em tecido subcutâneo de ratos.Rev. Odont. UNESP, v.22, n.2, p.1997-202, 1993.29- OLIVEIRA, R.C., et al. Efeito da temperatura dedesproteinização no preparo de osso cortical bovinomicrogranular. Avaliação microscópica e bioquímica daresposta celular em subcutâneo de ratos. Rev. FOB, v. 7,n.3/4, p.85-93, 1999.30- RAMPONI, G.; STEFANI, M. Structural, catalytic, andfunctional properties of low Mr phosphotyrosine proteinphosphatases. Evidence of a long evolutionary history. Int.J. Biochem. Cell. Biol., v.29, n.2, p.279-92, 1997.
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