moleküler biyolojide kullanılan yöntemler
moleküler biyolojide kullanılan yöntemler
moleküler biyolojide kullanılan yöntemler
You also want an ePaper? Increase the reach of your titles
YUMPU automatically turns print PDFs into web optimized ePapers that Google loves.
Enzimlerin kullanılması:<br />
• Lizozim: bakterilerin peptidoglikan tabakasındaki β-1,4- glikozidik<br />
bağları hidroliz etmektedir. Bu enzim, özellikle Gram (+) bakteriler<br />
üzerine etkilidir.<br />
• Gram (-) bakterilerin parçalanması için hücrelerin bir süre EDTA<br />
uygulamasında tutulması gerekir. EDTA, lipopolisakkarit<br />
moleküllerini birbirine bağlayan Ca +2 iyonlarının ortamdan<br />
çekilmesini sağlamakta ve böylece lizozimin içteki peptidoglikan<br />
tabakasına ulaşmasını kolaylaştırmaktadır.<br />
• Ayrıca, tripsin, proteinaz K, gibi proteazlar ve zimoliyaz da (maya<br />
hücreleri için) bu amaçla <strong>kullanılan</strong> enzimlerdir.<br />
• Enzimatik parçalama genelde mekanik parçalamaya dayanıklı yapılar<br />
için uygulanmaktadır.<br />
AYIRMA (SEPERASYON),<br />
SAFLAŞTIRMA (PÜRİFİKASYON)<br />
VE ANALİZ YÖNTEMLERİ<br />
• Ham özüt bazı biyokimyasal analizlerde doğrudan<br />
kullanılabildiği gibi <strong>moleküler</strong> biyolojik çalışmalarda ilgilenilen<br />
molekül, hedeflenen saflık derecesine göre uygulanan<br />
<strong>yöntemler</strong>le, ham özütteki diğer moleküllerden ayrılabilir.<br />
• Bu <strong>yöntemler</strong> karışımdaki molekül gruplarının<br />
çözünme özelliklerine<br />
Kitle, yoğunluk elektriksel yük gibi fiziksel özelliklerine<br />
Veya diğer moleküllere ilgisine göre (affinite) ayrılmalarını<br />
sağlayan işlemleri kapsar<br />
Bu tekniklere hazırlayıcı (preparative ) teknikler denir.<br />
Hazırlayıcı süreç oldukça fazla miktardaki bir biyolojik materyalin<br />
saflaştırılmasına yöneliktir.<br />
19<br />
21<br />
23<br />
• Sonuç olarak, <strong>kullanılan</strong> parçalama yöntemi,<br />
amaçlanan çalışmaya, <strong>kullanılan</strong> biyolojik materyalin<br />
tipine (organizma, doku, veya hücre tipine), izole<br />
edilecek molekül grubuna, eldeki olanaklara ve kabul<br />
edilebilir etkinliğe bağlıdır.<br />
• Buna göre, fiziksel veya kimyasal <strong>yöntemler</strong>den ya da<br />
iki tipi de içeren karma <strong>yöntemler</strong>den yararlanılabilir.<br />
• Parçalama sonrasında, üzerinde çalışılacak<br />
molekül grubunu homojenattaki diğer<br />
molekülllerden ayırmaya ve saf bir şekilde elde<br />
etmeye yönelik bir seri işlem uygulanır.<br />
• Homojenattaki zar parçalarını, parçalanmamış<br />
doku veya hücreleri uzaklaştırmak amacıyla<br />
uygulanan ön ayırma işlemlerinden sonra elde<br />
edilen ve çalışılacak molekülle birlikte birçok<br />
karışıma ham özüt (crude extract) denir.<br />
• Bu <strong>yöntemler</strong>in amacı daha sonraki belirleyici analitik<br />
çalışmalar için ilgilenilen moleküllerin elde<br />
edilmesidir.<br />
• Ayırma/saflaştırma işlemlerinden sonra, üzerinde<br />
çalışılan molekülün nicel ve/veya nitel analizi<br />
yapılabilir. Örn. miktar tayini, alt tiplerinin<br />
saptanması, yapısal analiz, aktivite belirlenmesi vb.<br />
2/21/2013<br />
20<br />
22<br />
24<br />
4
Change language