moleküler biyolojide kullanılan yöntemler

Vakum altında santrifüjleme
• Bu yöntem bir çok biyolojik örneğin kurutulmasında
kullanılabilir.
• Örnek önce bir organik çözücüde veya suda çözündürülür.
• Çözücü santrifüjde vakum altında uçurulur ve böylece örneğin
tüpün dibinde çökelti halinde kalması sağlanır.
• Bu yöntem hızlı olması, ön dondurma işlemine gerek
olmaması, örneğin tamamının kazanılması ve sudan başka
çözücülerin de kullanılabilmesi bakımında liyofilizasyondan
daha avantajlıdır
4. Çöktürme
• Bu yolla ayırma, su veya başka çözücü içeren bir
ortamda istenilen ya da istenmeyen moleküllerin
çöktürülerek katı halde ayrılması temeline dayanır.
• Amonyum ve sodyum sülfat proteinleri çöktürmekte
kullanılan organik tuzlardır.
• Nükleik asitler için ise izopropanol ve etanol kullanılır.
6. Santrifüjleme
Bu yöntem santrifüj adı verilen aletler yardımıyla, yüksek hızda döndürülerek
merkezkaç kuvveti oluşturulan bir alanda partiküllerin davranış temeline
dayanır.
Makromolekül halindeki bir partikül veya bir hücre organeli yüksek hızda
döndürüldüğünde bir santrifüj kuvvetinin etkisinde kalır.
Santrifüj kuvveti (F) şu şekilde ifade edilir:
F= mω 2 r
F=santrifüj kuvveti
m= çökelen partikülün kütlesi
ω= dönümün açısal hızı (radyan/sn)
r= göç eden partiküllerin merkezdeki dönüm eksenine olan uzaklığı (cm)
43
45
47
5. Enzim uygulaması
• Ayırma işleminde enzim kullanımıyla, örneğin
proteinlerin proteazlarla, nükleik asitlerin de
nükleazlarla parçalanarak ortamdan
uzaklaştırılması mümkünddür.
• Çökelen bir partikül üzerindeki kuvvet, dönüm
hızı ve partikülün dönüm eksenine uzaklığı ile
artar. F değerinin, yerçekimi kuvvetiyle (g) ilgili
olarak RCF (göreceli yer çekimi kuvveti)
kullanılır.
• RCF= 1.119 x rpm x r
• RCF , örneğin dakikadaki dönüm sayısı (rpm)
ve çökelen partikülün dönüm eksenine uzaklığı
ile değişir. 48
2/21/2013
44
46
8