4. Oznaczanie zawartości związków fenolowych w materiale ...

More documents

Recommendations

Info

4. Laboratorium przyrodnicze – Oznaczanie zawartości związków fenolowych w materiale roślinnym 1.2. Ekstrakcja W czasie ekstrakcji i innych etapów izolacji polifenoli należy chronić próbkę przed działaniem światła i tlenu. Naczynia należy osłaniać folią aluminiową, jeśli to możliwe, czynności wykonywać bez dostępu światła. Ekstrakcję i hydrolizę wykonywać w atmosferze gazu obojętnego, np. azotu. Przechowywać ekstrakty w ciemności, najlepiej w temperaturze -20ºC. Ekstrakcja kaszy gryczanej Około 100 mg rozdrobnionej (na mąkę) kaszy gryczanej odważyć z dokładnością do 0,5 mg do naczynka zakręcanego o pojemności 4 ml, dodać 1 ml 1% roztworu kwasu octowego w metanolu, przestrzeń nad cieczą przedmuchać azotem i zamknąć naczynko. Zawinąć naczynko folią aluminiową i wstawić do łaźni lodowo-wodnej. Całość umieścić w łaźni ultradźwiękowej i ekstrahować przez 3 min. Po 3 min sprawdzić, czy w łaźni znajduje się lód, jeśli brak, uzupełnić i ekstrahować następne 3 min. Próbkę z ekstraktem pozostawić do dekantacji w ciemności. Ekstrakcja skórek i nasion winogron czerwonych Skórki i nasiona owoców czerwonych winogron oddzielono w sokowirówce a następnie zliofilizowano, zabezpieczając przed światłem. Do czasu analizy przechowywano w temperaturze -20ºC . Około 20 mg rozdrobnionego liofilizatu odważyć z dokładnością do 0,5 mg w naczynku zakręcanym o pojemności 4 ml, dodać 1 ml 1% roztworu kwasu octowego w metanolu, przestrzeń nad cieczą przedmuchać azotem i zamknąć naczynko. Zawinąć naczynko folią aluminiową i wstawić do łaźni lodowo-wodnej. Całość umieścić w łaźni ultradźwiękowej i ekstrahować przez 3 min. Po 3 min sprawdzić, czy w łaźni znajduje się lód, jeśli brak, uzupełnić i ekstrahować następne 3 min. Próbkę z ekstraktem pozostawić do dekantacji w ciemności. Ekstrakcja czerwonej kapusty i czerwonej cebuli Około 100 mg rozdrobnionej (posiekanej lub rozgniecionej) czerwonej cebuli (kapusty) odważyć z dokładnością do 0,5 mg w naczynku zakręcanym, dodać 1 ml metanolu zawierającego 1% kwasu octowego, usunąć powietrze z naczynka azotem i zamknąć. Zawinąć naczynko folią aluminiową i wstawić do łaźni lodowo-wodnej. Całość umieścić w łaźni ultradźwiękowej i ekstrahować przez 3 min. Po 3 min sprawdzić, czy w łaźni znajduje się lód, jeśli brak, uzupełnić i ekstrahować następne 3 min. Próbkę z ekstraktem pozostawić do dekantacji w ciemności. Szkło i sprzęt laboratoryjny do p.1.2: 4 naczynka zakręcane o pojemności 4 ml, moździerz porcelanowy, łopatka dentystyczna, pipety miarowe o pojemności 0,1 ml; 1 ml, folia aluminiowa, 14
4. Laboratorium przyrodnicze – Oznaczanie zawartości związków fenolowych w materiale roślinnym naczynie na łaźnię lodowo-wodną. 1.3. Oznaczanie całkowitej zawartości fenoli metodą Folina-Ciocalteu'a (F-C) Ekstrakty z badanych surowców po zdekantowaniu nadają się do oznaczania fenoli. Wykonanie krzywej kalibracyjnej dla roztworu wzorca - kwasu galusowego a) Przygotowanie wzorcowego roztworu kwasu galusowego: 5 mg kwasu galusowego odważyć w naczynku zakręcanym, rozpuścić w 100 µl etanolu, następnie dodać 900 µl wody, wymieszać i zamknąć. Szkło i sprzęt laboratoryjny do p. 1.3.a: 1 naczynko zakręcane o poj. 4 ml, łopatka dentystyczna, pipeta miarowa o poj. 0,1 ml, pipeta miarowa o poj.1 ml. b) Przygotowanie odpowiednich rozcieńczeń roztworu kwasu galusowego, dla uzyskania roztworów kalibracyjnych o stężeniach: 0; 0,05; 0,15; 0,25; 0,35 i 0,50 mg/ml. W tym celu do naczynek o poj. 4 ml umieścić odpowiednie objętości roztworu wzorcowego kwasu galusowego a następnie dodać tyle destylowanej wody, by całkowita objętość każdego roztworu kalibracyjnego roztworu wynosiła 1 ml. c) Do osobnych naczynek (o poj. 4 ml) pobrać po 20 µl z każdego roztworu kalibracyjnego, dodać po 1,58 ml wody, następnie po 100 µl odczynnika Folina- Ciocalteu'a, dobrze wymieszać i pozostawić na czas min 0,5 min do maks. 8,0 min, następnie dodać po 300 µl nasyconego roztworu węglanu sodu, wymieszać i wstawić do termostatu ustawionego na 40ºC na 30 min (do uzyskania trwałego, charakterystycznego, niebieskiego koloru). Mierzyć absorbancję przy 765 i 735 nm wobec ślepej próby (0 µl roztworu kwasu galusowego). Szkło i sprzęt laboratoryjny do p. 1.3.b i 1.3.c: 12 naczynek zakręcanych o poj. 4 ml, pipeta miarowa o poj. 0,1 ml, pipeta miarowa o poj.1 ml, pipeta miarowa o poj.2 ml. d) Pomiar absorbancji badanych ekstraktów Do osobnych naczynek (o poj. 4 ml) pobrać po 20 µl z roztworu każdego badanego ekstraktu, dodać po 1,58 ml destylowanej wody, następnie po 100 µl odczynnika Folina - Ciocalteu'a, dobrze wymieszać i pozostawić na 0,5 do 8,0 min, następnie dodać po 300 µl roztworu węglanu sodu i 15
Page 1 and 2: 4. Laboratorium przyrodnicze - Ozna
Page 13: 4. Laboratorium przyrodnicze - Ozna

4. Oznaczanie zawartości związków fenolowych w materiale ...

You also want an ePaper? Increase the reach of your titles

Delete template?

Save as template?