подсекция «цикл наук о живом

Ломоносов-2008 «Химия» Цикл наук о живом
Изучение протеолиза гемагглютининавируса гриппа штамма A/Puerto Rico/8/34
Смирнова Ю. А. 1 , Кордюкова Л.В. 2 , Серебрякова М.В. 3 , Баратова Л.А. 2 , Филиппова
И.Ю. 4 , Лысогорская Е.Н. 4
1 Факультет Биоинженерии и Биоинформатики, Московский государственный
университет им. М.В. Ломоносова, Москва, Россия
E–mail: yulya_82@list.ru
2 НИИ физико-химической биологии им. А.Н. Белозерского, Московский
Государственный Университет им. М.В. Ломоносова; Москва, Россия;
E–mail: kord@belozersky.msu.ru
3 Институт Физико-Химической Медицины, ул. Малая Пироговская, 1а, Москва, Россия;
E–mail: mserebr@mail.ru
4 Химический факультет, Московский Государственный Университет им. М.В.
Ломоносова; Москва, Россия
Изучен протеолиз вирионов вируса гриппа штамма A/Puerto Rico/8/34 (подтип
Н1N1) ферментами различных классов с целью разработки подхода для изучения
структурной организации и взаимодействия основных белковых компонентов оболочки
вириона: трансмембранного гомотримерного гликопротеина гемагглютинина (НА) и
матриксного белка М1, образующего слой под липидной мембраной. Среди
тестированных протеолитических ферментов и ферментных препаратов (термолизин,
трипсин, химотрипсин, субтилизин Карлсберг, проназа, папаин, бромелаин)
цистеиновые протеиназы бромелаин и папаин, а также ферментный препарат проназа
эффективно удаляли эктодомены НА, в то время как химотрипсин, трипсин и
субтилизин Карлсберг – лишь частично. Методом MALDI-TOF-МС-анализа были
локализованы сайты гидролиза НА различными ферментными препаратами. Бромелаин,
папаин, трипсин и проназа расщепляли полипептидную цепь после остатка K177,
расположенного перед трансмембранным доменом (НА2 185–211). Субтилизин
Карлсберг гидролизовал пептидную связь в других соседних точках – после L178
(основной сайт), либо V176. Гидролитическая активность бромелаина, измеренная по
высокоспецифичному хромогенному субстрату цистеиновых протеиназ Glp-Phe-AlapNA,
в присутствии 5 мМ β-меркаптоэтанола была почти в три раза выше, чем в
присутствии 50 мМ. Однако для полного удаления эктодоменов НА высоко- и
низкоактивным ферментом требовались одинаковые промежутки времени. В отсутствии
восстанавливающего реагента удаление НА бромелаином происходило несколько
медленнее и сопровождалось значительной фрагментацией белка М1. Изучен характер
ингибирующего воздействия специфического ингибитора цистеиновых протеиназ E-64
и HgCl2 на гидролиз бромелаином белков HA и М1.
Полученные субвирусные частицы могут быть использованы для выделения Сконцевого
сегмента НА2-цепи, включающего трансмембранный домен (TMD) и
цитоплазматический «хвост», а также для изучения роли и характера взаимодействия
цитоплазматического участка гемагглютинина с белком М1 в составе вирионов.
Работа поддержана грантами РФФИ №06-04-48728 и №06-03-33056.
300