绿竹咖啡酰辅酶A-O-甲基转移酶基因的克隆与分析 - ICBR

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绿 竹 咖 啡 酰 辅 酶 A O
甲 基 转 移 酶 基 因 的 克 隆 与 分 析
Clon in g andCharacterization ofCCoA OM T Gene from Bam busa oldham i
目 的 基 因 片 段 的 全 长 扩 增 产 物 电 泳 图 。
Bo CCoA OM Tl 基 因 ( 图 3) 的 cDNA 全 长 873b p
, 包
含
个 780b p 的 读 码 框 ,
编 码
分 子 量 约 为 288kD , 推 测 的 等 电 点 为
5.
个 259 aa 的 蛋 白 ,
189。
M a b
M
0. 5kb
1. 0kb
0. 5kb
图 1RA CE 电 泳 分 析 图
Fi g ure 1RACE p roducts checkedb y electro p horesis
N ote:a:3 ’ RA CE p roducts checked ; b:5 ’ RA CE p rodu c~ checked
图 2BoCCoAOM TlPCR 产 物 电 泳 分 析 图
Fi g
ure 2 PCR p roducts ofBoCCoAOM Tl g en e checked b y elec—
tro p horesis
l
ff
GCACCCGGATCTCGTCTCCTCGAAAACCOGCA
33 AT GGCCA CCGCGA CCGCCGAT GCGACGACGGCGACCAA GGAGCAAACCA GCGGCGGCGGC
M A T A T A D A T T A T K E Q T S G G G
93 GGCGAGCA GAAGA CGCGCCACTCCGAGGT CGGGCACAA GAGCCT GCTCCA GA GCGA CGCG
G E Q K T R H S E V G H K S L L Q S D A
153 CT CTA CCA GTA CATACT GGA GACGAGCGT GTA CCCGCGCGAGCACGAGTGCATGAA GGA G
L Y Q Y I L E T S V Y P R E H E C M K E
213 CTCCGCGA GGTCACCGCCAAGCA CCCATGGAACCTGAT GACGACGTCGGCGGACGA GGGG
L R E V T A K H p W N L M T T S A D E G
273 CA GTT CCT GAA CATGCTGCT CAA GCTCAT CGGCGCCAA GAAGA CCATGGA GATCGGCGT C
Q F L N M L L K L I G A K K T M E I G V
333 TACA CCGGCTACT CCCT CCT CGCCACCGCGCTCGCCAT CCCCGA GGACGGCA CGAT CTTG
Y T G Y S L L A T A L A I P E D G T I L
393 GCCAT GGA CATCAACCGCGAGAA CTACGA GCT CGGCCT GCCCTGCATCGAGAA GGCCGGC
A M D I N R E N Y E L G L P C I E K A G
453 GTCGCCCACAAGATCGA CTTCCOCGAGGGCCCCGCCCT CCCCGT CCTCGACCAGCT CCTC
V A H K I D F R E G P A L P V L D O L L
513 GA GGACGA GGCCAA CCA CGGCTCGTT CGA CTT CGTCTT CGTCGACGCCGACAA GGA CAA C
E D E A N H G S F D F V F V D A D K D N
573 TA CCT CAA CTACCA CGA CCGCCT GAT GAA GCTGGTCAA GGTCGGCGGCCTCGTTGGCTA C
Y L N Y H D R L M K L V K V G G L V G Y
633 GA CAA CACGCT CTGGAA CGGCTCCGTCGT GCTCCCCGCCGACGCGCCCATGCGCAA GTA C
D N T L W N G S V V L p A D A p M R K Y
693 ATCCGCTA CTACCGCGACTTCGTGCT CGA GCT CAACAAGGCCCTCGCCGCCGA CGAGCGC
I R Y Y R D F V L E L N K A L A A D E R
753 GTCGA GAT CT GCCA GCT CCCCGT CGGCGACGGCATCA CCCTCTGCCGCCGCGCCAA GT GA
V E I C Q L P V G D G I T L C R R A K
813 ACCGTCCCTCCGGCCAT CTTGGTCGCT CGACGGCGCGCGCGCCACCATGAT GCCATCGTC
图 3BoCCoAOM Tl 的 核 酸 序 列 及 其 推 导 出 的 氨 基 酸 序 列
Fi g ure 3Nucleotide se q u ence anddedu cedam ino acid se quence ofBoCCoA OM Tl

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590
分 子 植 物 育 种
M olecu lar PlantBreedin g
2.2 氨 基 酸 序 列 比 较 与 系 统 进 化 树 分 析
应 用 在 线 blast 软 件 分 析 结 果 表 明 ,
BoC—
推 测 的
CoA OM Tl 氨 基 酸 序 列 与 其 它 植 物 的 CCoAOM T 具
有 较 高 的 相 似 性 , 其 中 与 来 源 于 水 稻 (O
AY644636) 、 玉 (Ze a m a
y s . AJ242981)
、 烟 草 (Nico ~ ’
tian a tabac u m ,
AF022775) 、 杨 树 (Po
p ulu s to m e n,tosa ,
AF240466)、 蓝 J?,
~
(Eu c al yp
tu s
g lobulus ,
AFl68780) 的
con sen su s
AJ242981
AY644636
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AFl68780
心 022775
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同 类 基 因 的 氨 基 酸 序 列 的 相 似 性 均 在 80% 以 上 , 而
与 水 稻 ( 中 花 10 号 ) 的 最 高 , 达 到 90. O% 。
通 过 DNA STAR 软 件 程 序 的 比 较 结 果 , BoC—
CoA OM Tl 的 氨 基 酸 序 列 含 有 CCoAOM T 类 基 因 的 所
有 保 守 序 列 元 件 ( 图 4) , 即 A 、 B 、 C 、 D 、 E 、 F、 G 和 H 。
其 中 A 、 B 、 C 是 植 物 甲 基 转 移 酶 基 因 中 普 遍 存 在 的 ,
而 D 、 E 、 F、 G 和 H 则 是 CCoAOM T 特 有 的
。
H .
EV GH KSLL .
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T SVY PRE
60
56
35
43
36
55
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Con sensu s
AJ242981
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皤 240466
AF l68780
心 022775
AM 262870
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Consen su s
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AY644636
陋 240466
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姆 022775
AM 262870
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180
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163
156
175
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Con sen su s
AJ242981
AY644636
AF240466
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AF022775
A M 262870
EF028662
240
236
215
223
216
235
235
A
B
Con sen su s
AJ242981
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皤 240466
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断 022775
AM 262870
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