FLEX Monoclonal Mouse Anti-Human CD138 Klon MI15 ... - Dako

FLEX
Monoclonal Mouse
Anti-Human CD138
Klon MI15
Ready-to-Use
(Dako Autostainer/Autostainer Plus)
Kode IS642
Tilsigtet anvendelse Anvendes til in vitro-diagnostik.
Synonym for antigen Syndecan-1 (1).
Resumé
og forklaring
FLEX Monoclonal Mouse Anti-Human CD138, klon MI15, Ready-to-Use (Dako Autostainer/Autostainer Plus), er
beregnet til anvendelse ved immunhistokemi sammen med Autostainer Link-instrumenter. Antistoffet er nyttigt til
identifikation af maligniteter, der involverer terminalt differentierede plasmaceller, og det er associeret med multipelt
myelom(1, 2). Antistoffer til CD138 kan også være nyttigt til underklassificering af diffuse store B-cellelymfomer (3). Den
kliniske fortolkning af enhver farvning eller mangel på samme skal suppleres med morfologiske undersøgelser med
anvendelse af korrekte kontroller og evalueres i relation til patientens kliniske forhistorie og andre diagnostiske analyser
af en kvalificeret patolog.
CD138 er et transmembrant proteoglycan, der bærer heparinsulfater og sommetider chondroitinsulfater. Det består af et
30,5 kDa kerneprotein og fem glykosaminglycaner. CD138 hører til syndecan-familien. Den rapporterede Mr af CD138
er i området fra 85 000 til 92 000, formodentlig afhængigt af molekylets glykosaminglycan-mønster (1).
Inden for det hæmatopoietiske system er CD138 hovedsageligt begrænset til sene stadier i B-celledifferentiering. Det er
typisk udtrykt med høj celledensitet i normale og maligne plasmaceller (4, 5) og i lymfoplasmocytoide celler (4).
In modne væv udtrykkes CD138 af enkelt og flerlaget epitel, fibroblaster, flerlagede keratinocytter og endotelceller (1).
Funktionen af CD138 er stort set ukendt. Imidlertid binder den intracellulære hale af CD138 tilsyneladende cytoskelettet
sammen med cellulære komponenter (1), og den ekstracellulære del af molekylet binder tilsyneladende forskellige
ligander. Formodentlig spiller CD138 en rolle i cellulære funktioner, såsom proliferation, programmeret celledød,
cellematrix- og celle-celle-adhæsion (5), f.eks. medierer det adhæsion af myelomceller til type l kollagen (6).
CD138-ekspression er nedsat under malign transformation af forskellige epiteler (7), og antigenet forsvinder hurtigt
(udskilt) af myelomceller, der går i apoptosis. Således er CD138 en markør for levedygtige myelomceller (1, 6). CD138
går tabt ved malignisering af mange flerlagede epiteler (7). Sammen med anti-BCL-6 og anti-IRF4 kan anti-CD138 være
af værdi ved diagnosen af AIDS-relaterede non-Hodgkins lymfomer og HIV-relaterede Hodgkins lymfomer (8).
Ydermere kan anti-CD138 være en hjælp ved underklassificeringen af diffuse store B-cellelymfomer sammen med anti-
CD10, anti-BCL-6 og anti- MUM1 (3).
Se Dakos Generelle instruktioner vedrørende immunhistokemisk farvning eller detektionssystemets vejledning for IHCprocedurer
vedrørende: 1) Princip for proceduren, 2) Nødvendige materialer, der ikke medfølger, 3) Opbevaring,
4) Klargøring af prøve, 5) Farvningsprocedure, 6) Kvalitetskontrol, 7) Fejlfinding, 8) Fortolkning af farvning, 9) Generelle
begrænsninger.
Leveret reagens Monoklonalt museantistof, der er klar til brug, leveret i væskeform i en buffer, der indeholder stabiliserende protein
og 0,015 mol/L natriumazid.
Klon: MI15. Isotype: IgG1, kappa.
Immunogen En blanding af U266 og XG-1 humane myelomcellelinier (2, 9).
Specificitet Antihumant CD138, klon MI15, blev samlet som anti-CD138 ved 6th International Workshop and Conference on
Human Leucocyte Differentiation Antigens (Sjette internationale workshop og konference vedrørende humane
leucocyt-differentieringsantigener) (1).
Epitopen, der er genkendt af anti-CD138, MI15, er fundet inden for ektodomænet (ekstracellulær del) af CD138kerneproteinet.
Blokeringseksperimenter har afsløret, at epitopen genkendt af MI15 tilsyneladende delvis overlapper
epitopen, der er genkendt af et andet antistof mod CD138, klon B-B4 (1, 5). Anti-CD138, MI15, reagerer kraftigt med
CD138, der er udtrykt af cellelinier afledt af multipelt myelom, såsom U266 og XG-1 (9).
Forholdsregler 1. Anvendes af professionelle brugere.
2. Produktet indeholder natriumazid (NaN3), et kemikalie, der er yderst giftigt i ren form. Selvom koncentrationen i
produktet ikke er klassificeret som farlig, kan natriumazid reagere med bly og kobber og danne meget eksplosive
ophobninger af metalazider. Efter bortskaffelse skylles med rigelige mængder vand for at hindre ophobning af
metalazid i afløb.
3. Som med alle produkter, der er afledt ud fra biologiske kilder, bør der iagttages korrekte håndteringsprocedurer.
4. Brug egnet personligt beskyttelsesudstyr for at undgå kontakt med øjne og hud.
5. Ubrugt opløsning skal bortskaffes i henhold til lokale, nationale og føderale bestemmelser.
Opbevaring Opbevares ved 2 – 8 °C. Må ikke anvendes efter udlø bsdatoen på flasken. Hvis reagenserne opbevares under
andre betingelser end de specificerede, skal betingelserne verificeres af brugeren. Der er ingen synlige tegn på, at
produktet kan være ustabilt. Der bør derfor udføres positive og negative kontroller samtidigt med patientprøver.
Kontakt Dakos tekniske serviceafdeling, hvis der observeres uventet farvning, som ikke kan forklares med
variationer i laboratorieprocedurer, og der er mistanke om et problem med antistoffet.
(117900-002) IS642/DK/SSM/07.04.08 p. 1/3
Dako Denmark A/S | Produktionsvej 42 | DK-2600 Glostrup | Denmark | Tel. +45 44 85 95 00 | Fax +45 44 85 95 95 | CVR No. 33 21 13 17

Klargøring af prøve,
inklusiv nødvendige
materialer, der ikke
medfølger
Farvningsprocedure
inklusiv nødvendige
materialer, der ikke
medfølger
Fortolkning af
farvning
Præstationskarakteristika
Antistoffet kan anvendes til mærkning af paraffinindstøbte vævssnit fikseret i formalin. Vævsprøverne skal skæres i
en tykkelse på ca. 4 µm.
Det er nødvendigt at forbehandle med varmeinduceret epitop-retrieval (HIER). Der opnås optimale resultater ved at
forbehandle væv med EnVision FLEX Target Retrieval Solution, High pH (10x) (Dako Autostainer/Autostainer Plus)
(kode K8012/K8014).
Afparaffinerede snit: Forbehandling af afparaffinerede formalinfikserede, paraffinindstøbte vævssnit anbefales ved hjælp
af Dako PT Link (kode PT100/PT101). Der henvises til brugervejledningen for PT LINK.
Følg forbehandlings-proceduren, som beskrevet i indlægssedlen til EnVision FLEX Target Retrieval Solution, High pH
(10x) (Dako Autostainer/Autostainer Plus) (kode K8012/K8014). Følgende parametre bør anvendes til PT Link.
Forvarmet temperatur: 65 °C; temperatur og tid for epitop-retrieval: 97 °C i 20 (±1) minutter; afkøles til 65 °C. Fjern
Autostainer-glasstativ med objektglas fra PT Link-karret og dyp straks objektglassene i et glas/kar (f.eks. PT Link Rinse
Station, kode PT109) med fortyndet EnVision FLEX Wash Buffer (10x), (Dako Autostainer/Autostainer Plus)
(stuetemperatur) (kode K8012). Lad dem ligge i Wash Buffer i 1 – 5 minutter.
Paraffinindstøbte snit: Som alternativ klargøring af præparater kan både afparaffinering og epitop-retrieval udføres i
PT Link ved anvendelse af en ændret procedure. Se brugervejledningen til PT Link for oplysninger. Når
farvningsproceduren er fuldført, skal snittene dehydreres, renses og monteres ved hjælp af et permanent
monteringsmedie.
Vævssnittene må ikke udtørre under behandlingen eller under den efterfølgende immunhistokemiske
farvningsprocedure. Det tilrådes at anvende Dako Silanized Slides (kode S3003), så vævssnittene hænger bedre
fast på objektglassene.
Det anbefalede visualiseringssystem er EnVision FLEX+, Mouse, High pH, (Dako Autostainer/Autostainer Plus)
(kode K8012). Farvningstrinnene og inkubationstiderne forprogrammeres i softwaren til Dako Autostainer/
Autostainer Plus-instrumenter, under anvendelse af følgende protokoller:
Skabelonsprotokol: FLEXRTU2 (200 µL doseringsmængde) eller FLEXRTUS3 (300 µL doseringsmængde)
Autoprogram: CD138 (uden kontrastfarvning) eller CD138H (med kontrastfarvning).
Trinnet Auxiliary skal indstilles til “rinse buffer” ved farvningskørsler med ≤10 objektglas. Ved farvningskørsler med
>10 objektglas, skal trinnet Auxiliary indstilles til “none”. Dette sikrer sammenlignelige vasketider.
Alle inkubationstrin skal udføres ved stuetemperatur. Se brugervejledningen til det dedikerede instrument for
yderligere oplysninger. Hvis protokollerne ikke er tilgængelige på det anvendte Dako Autostainer-instrument,
kontaktes Dako's tekniske serviceafdeling.
De optimale forhold kan variere afhængigt af præparatet og klargøringsmetoder og bør fastlægges af hvert enkelt
laboratorium. Hvis den evaluerende patolog skulle ønske en anderledes farvningsintensitet, kan man kontakte en
Dako applikationsspecialist/teknisk servicespecialist for oplysninger om, hvordan protokollen omprogrammeres.
Kontrollér, at præstationen af den justerede protokol stadig er gyldig ved at evaluere, at farvningsmønstret er identisk
med farvningsmønstret beskrevet i “Præstationskarakteristika”.
Det anbefales at kontrastfarve i hæmatoxylin ved hjælp af EnVision FLEX Hematoxylin, (Dako
Autostainer/Autostainer Plus) (kode K8018). Det anbefales at anvende et ikke-vandbaseret, permanent
monteringsmedium.
Der skal udføres positive og negative kontroller samtidigt ved hjælp af den samme protokol som patientprøverne.
Det positive kontrolvæv skal omfatte tonsil, og cellerne/strukturerne skal udvise reaktionsmønstre, som beskrevet for
dette væv i “Præstationskarakteristika” i alle positive præparater. Det anbefalede negative kontrolreagens er FLEX
Negative Control, Mouse, (Dako Autostainer/Autostainer Plus) (kode IS750).
Celler, der mærkes af antistoffet, udviser membranfarvning.
Normalt væv: I tonsillen viser plasmaceller en moderat til kraftig farvningsreaktion, mens epitelceller viser en svag til
moderat farvningsreaktion. Der ses ingen betydelig reaktion med leukocytter fra normalt perifert humant blod
(< 5 %), og der ses ingen betydelig reaktion i normal knoglemarv (< 5 %). CD138 mærkning er fraværende fra CD34-
positive stamceller (1).
Unormalt væv: I knoglemarv fra patienter med multipelt myelom mærkes alle plasmacelletyper inklusive retikulære,
polymorfe, asynkrone og blastiske plasmaceller (2).
Referencer 1. Wijdenes J, Clément C, Klein B, Dore J-M. New B-cell CD antigens. BC29: CD138 (syndecan-1) workshop
panel report. In: Kishimoto T, Kikutani H, von dem Borne AEG, Goyert SM, Mason DY, Miyasaka M, et al.,
editors. Leucocyte typing VI. White cell differentiation antigens. Proceedings of the 6th International Workshop
and Conference; 1996 Nov 10-14; Kobe, Japan. New York, London: Garland Publishing Inc.; 1997. p. 249-52.
2. Costes V, Magen V, Legouffe E, Durand L, Baldet P, Rossi J-F, et al. The MI15 monoclonal antibody (antisyndecan-1)
is a reliable marker for quantifying plasma cells in paraffin-embedded bone marrow biopsy
specimens. Hum Pathol 1999;30:1405-11.
3. Colomo L, López-Guillermo A, Perales M, Rives S, Martínez A, Bosch F, et al. Clinical impact of the
differentiation profile assessed by immunophenotyping in patients with diffuse large B-cell lymphoma. Blood
2003;101:78-84.
4. Sebestyén A, Berczi L, Mihalik R, Paku S, Matolcsy A, Kopper L. Syndecan-1 (CD138) expression in human
non-Hodgkin lymphomas. Br J Haematol 1999;104:412-9.
5. Gattei V, Godeas C, Degan M, Rossi FM, Aldinucci D, Pinto A. Characterization of anti-CD138 monoclonal
antibodies as tools for investigating the molecular polymorphism of syndecan-1 in human lymphoma cells. Br J
Haematol 1999;104:152-62.
6. Jourdan M, Ferlin M, Legouffe E, Horvathova M, Liautard J, Rossi JF, et al. The myeloma cell antigen
syndecan-1 is lost by apoptotic myeloma cells. Br J Haematol 1998;100:637-46.
7. Inki P, Jalkanen M. The role of syndecan-1 in malignancies [review]. Ann Med 1996;28:63-7.
8. Carbone A, Gloghini A, Larocca LM, Capello F, Pierconti F, Canzonieri V, et al. Expression profile of
(117900-002) IS642/DK/SSM/07.04.08 p. 2/3
Dako Denmark A/S | Produktionsvej 42 | DK-2600 Glostrup | Denmark | Tel. +45 44 85 95 00 | Fax +45 44 85 95 95 | CVR No. 33 21 13 17

Forklaring af symboler
Katalognummer
Medicinsk udstyr til in vitro
diagnostik
Se brugsanvisningen
MUM1/IRF4, BCL-6, and CD138/syndecan-1 defines novel histogenetic subsets of human immunodeficiency
virus-related lymphomas. Blood 2001; 97:744-51.
9. Horvathova M, Gaillard JP, Liautard J, Duperray C, Lavabre-Bertrand T, Bourquard P, et al. B30.6.
Identification of novel and specific antigens of human plasma cells by mAb. In: Schlossman SF, Boumsell L,
Gilks W, Harlan JM, Kishimoto T, Morimoto C, et al., editors. Leucocyte typing V. White cell differentiation
antigens. Proceedings of the 5th International Workshop and Conference; 1993 Nov 3-7; Boston, USA. Oxford,
New York, Tokyo: Oxford University Press; 1995. p. 713-4.
Temperaturbegrænsning
Indeholder til analyser
Lotnummer
Anvendes senest
Producent
(117900-002) IS642/DK/SSM/07.04.08 p. 3/3
Dako Denmark A/S | Produktionsvej 42 | DK-2600 Glostrup | Denmark | Tel. +45 44 85 95 00 | Fax +45 44 85 95 95 | CVR No. 33 21 13 17