FLEX Monoclonal Mouse Anti-Human CD138 Klon MI15 ... - Dako

Klargøring af prøve,
inklusiv nødvendige
materialer, der ikke
medfølger
Farvningsprocedure
inklusiv nødvendige
materialer, der ikke
medfølger
Fortolkning af
farvning
Præstationskarakteristika
Antistoffet kan anvendes til mærkning af paraffinindstøbte vævssnit fikseret i formalin. Vævsprøverne skal skæres i
en tykkelse på ca. 4 µm.
Det er nødvendigt at forbehandle med varmeinduceret epitop-retrieval (HIER). Der opnås optimale resultater ved at
forbehandle væv med EnVision FLEX Target Retrieval Solution, High pH (10x) (Dako Autostainer/Autostainer Plus)
(kode K8012/K8014).
Afparaffinerede snit: Forbehandling af afparaffinerede formalinfikserede, paraffinindstøbte vævssnit anbefales ved hjælp
af Dako PT Link (kode PT100/PT101). Der henvises til brugervejledningen for PT LINK.
Følg forbehandlings-proceduren, som beskrevet i indlægssedlen til EnVision FLEX Target Retrieval Solution, High pH
(10x) (Dako Autostainer/Autostainer Plus) (kode K8012/K8014). Følgende parametre bør anvendes til PT Link.
Forvarmet temperatur: 65 °C; temperatur og tid for epitop-retrieval: 97 °C i 20 (±1) minutter; afkøles til 65 °C. Fjern
Autostainer-glasstativ med objektglas fra PT Link-karret og dyp straks objektglassene i et glas/kar (f.eks. PT Link Rinse
Station, kode PT109) med fortyndet EnVision FLEX Wash Buffer (10x), (Dako Autostainer/Autostainer Plus)
(stuetemperatur) (kode K8012). Lad dem ligge i Wash Buffer i 1 – 5 minutter.
Paraffinindstøbte snit: Som alternativ klargøring af præparater kan både afparaffinering og epitop-retrieval udføres i
PT Link ved anvendelse af en ændret procedure. Se brugervejledningen til PT Link for oplysninger. Når
farvningsproceduren er fuldført, skal snittene dehydreres, renses og monteres ved hjælp af et permanent
monteringsmedie.
Vævssnittene må ikke udtørre under behandlingen eller under den efterfølgende immunhistokemiske
farvningsprocedure. Det tilrådes at anvende Dako Silanized Slides (kode S3003), så vævssnittene hænger bedre
fast på objektglassene.
Det anbefalede visualiseringssystem er EnVision FLEX+, Mouse, High pH, (Dako Autostainer/Autostainer Plus)
(kode K8012). Farvningstrinnene og inkubationstiderne forprogrammeres i softwaren til Dako Autostainer/
Autostainer Plus-instrumenter, under anvendelse af følgende protokoller:
Skabelonsprotokol: FLEXRTU2 (200 µL doseringsmængde) eller FLEXRTUS3 (300 µL doseringsmængde)
Autoprogram: CD138 (uden kontrastfarvning) eller CD138H (med kontrastfarvning).
Trinnet Auxiliary skal indstilles til “rinse buffer” ved farvningskørsler med ≤10 objektglas. Ved farvningskørsler med
>10 objektglas, skal trinnet Auxiliary indstilles til “none”. Dette sikrer sammenlignelige vasketider.
Alle inkubationstrin skal udføres ved stuetemperatur. Se brugervejledningen til det dedikerede instrument for
yderligere oplysninger. Hvis protokollerne ikke er tilgængelige på det anvendte Dako Autostainer-instrument,
kontaktes Dako's tekniske serviceafdeling.
De optimale forhold kan variere afhængigt af præparatet og klargøringsmetoder og bør fastlægges af hvert enkelt
laboratorium. Hvis den evaluerende patolog skulle ønske en anderledes farvningsintensitet, kan man kontakte en
Dako applikationsspecialist/teknisk servicespecialist for oplysninger om, hvordan protokollen omprogrammeres.
Kontrollér, at præstationen af den justerede protokol stadig er gyldig ved at evaluere, at farvningsmønstret er identisk
med farvningsmønstret beskrevet i “Præstationskarakteristika”.
Det anbefales at kontrastfarve i hæmatoxylin ved hjælp af EnVision FLEX Hematoxylin, (Dako
Autostainer/Autostainer Plus) (kode K8018). Det anbefales at anvende et ikke-vandbaseret, permanent
monteringsmedium.
Der skal udføres positive og negative kontroller samtidigt ved hjælp af den samme protokol som patientprøverne.
Det positive kontrolvæv skal omfatte tonsil, og cellerne/strukturerne skal udvise reaktionsmønstre, som beskrevet for
dette væv i “Præstationskarakteristika” i alle positive præparater. Det anbefalede negative kontrolreagens er FLEX
Negative Control, Mouse, (Dako Autostainer/Autostainer Plus) (kode IS750).
Celler, der mærkes af antistoffet, udviser membranfarvning.
Normalt væv: I tonsillen viser plasmaceller en moderat til kraftig farvningsreaktion, mens epitelceller viser en svag til
moderat farvningsreaktion. Der ses ingen betydelig reaktion med leukocytter fra normalt perifert humant blod
(< 5 %), og der ses ingen betydelig reaktion i normal knoglemarv (< 5 %). CD138 mærkning er fraværende fra CD34-
positive stamceller (1).
Unormalt væv: I knoglemarv fra patienter med multipelt myelom mærkes alle plasmacelletyper inklusive retikulære,
polymorfe, asynkrone og blastiske plasmaceller (2).
Referencer 1. Wijdenes J, Clément C, Klein B, Dore J-M. New B-cell CD antigens. BC29: CD138 (syndecan-1) workshop
panel report. In: Kishimoto T, Kikutani H, von dem Borne AEG, Goyert SM, Mason DY, Miyasaka M, et al.,
editors. Leucocyte typing VI. White cell differentiation antigens. Proceedings of the 6th International Workshop
and Conference; 1996 Nov 10-14; Kobe, Japan. New York, London: Garland Publishing Inc.; 1997. p. 249-52.
2. Costes V, Magen V, Legouffe E, Durand L, Baldet P, Rossi J-F, et al. The MI15 monoclonal antibody (antisyndecan-1)
is a reliable marker for quantifying plasma cells in paraffin-embedded bone marrow biopsy
specimens. Hum Pathol 1999;30:1405-11.
3. Colomo L, López-Guillermo A, Perales M, Rives S, Martínez A, Bosch F, et al. Clinical impact of the
differentiation profile assessed by immunophenotyping in patients with diffuse large B-cell lymphoma. Blood
2003;101:78-84.
4. Sebestyén A, Berczi L, Mihalik R, Paku S, Matolcsy A, Kopper L. Syndecan-1 (CD138) expression in human
non-Hodgkin lymphomas. Br J Haematol 1999;104:412-9.
5. Gattei V, Godeas C, Degan M, Rossi FM, Aldinucci D, Pinto A. Characterization of anti-CD138 monoclonal
antibodies as tools for investigating the molecular polymorphism of syndecan-1 in human lymphoma cells. Br J
Haematol 1999;104:152-62.
6. Jourdan M, Ferlin M, Legouffe E, Horvathova M, Liautard J, Rossi JF, et al. The myeloma cell antigen
syndecan-1 is lost by apoptotic myeloma cells. Br J Haematol 1998;100:637-46.
7. Inki P, Jalkanen M. The role of syndecan-1 in malignancies [review]. Ann Med 1996;28:63-7.
8. Carbone A, Gloghini A, Larocca LM, Capello F, Pierconti F, Canzonieri V, et al. Expression profile of
(117900-002) IS642/DK/SSM/07.04.08 p. 2/3
Dako Denmark A/S | Produktionsvej 42 | DK-2600 Glostrup | Denmark | Tel. +45 44 85 95 00 | Fax +45 44 85 95 95 | CVR No. 33 21 13 17