Klargøring af prøve, inklusiv nødvendige materialer, der ikke medfølger Farvningsprocedure inklusiv nødvendige materialer, der ikke medfølger Fortolkning af farvning Præstationskarakteristika <strong>Anti</strong>stoffet kan anvendes til mærkning af paraffinindstøbte vævssnit fikseret i formalin. Vævsprøverne skal skæres i en tykkelse på ca. 4 µm. Det er nødvendigt at forbehandle med varmeinduceret epitop-retrieval (HIER). Der opnås optimale resultater ved at forbehandle væv med EnVision <strong>FLEX</strong> Target Retrieval Solution, High pH (10x) (<strong>Dako</strong> Autostainer/Autostainer Plus) (kode K8012/K8014). Afparaffinerede snit: Forbehandling af afparaffinerede formalinfikserede, paraffinindstøbte vævssnit anbefales ved hjælp af <strong>Dako</strong> PT Link (kode PT100/PT101). Der henvises til brugervejledningen for PT LINK. Følg forbehandlings-proceduren, som beskrevet i indlægssedlen til EnVision <strong>FLEX</strong> Target Retrieval Solution, High pH (10x) (<strong>Dako</strong> Autostainer/Autostainer Plus) (kode K8012/K8014). Følgende parametre bør anvendes til PT Link. Forvarmet temperatur: 65 °C; temperatur og tid for epitop-retrieval: 97 °C i 20 (±1) minutter; afkøles til 65 °C. Fjern Autostainer-glasstativ med objektglas fra PT Link-karret og dyp straks objektglassene i et glas/kar (f.eks. PT Link Rinse Station, kode PT109) med fortyndet EnVision <strong>FLEX</strong> Wash Buffer (10x), (<strong>Dako</strong> Autostainer/Autostainer Plus) (stuetemperatur) (kode K8012). Lad dem ligge i Wash Buffer i 1 – 5 minutter. Paraffinindstøbte snit: Som alternativ klargøring af præparater kan både afparaffinering og epitop-retrieval udføres i PT Link ved anvendelse af en ændret procedure. Se brugervejledningen til PT Link for oplysninger. Når farvningsproceduren er fuldført, skal snittene dehydreres, renses og monteres ved hjælp af et permanent monteringsmedie. Vævssnittene må ikke udtørre under behandlingen eller under den efterfølgende immunhistokemiske farvningsprocedure. Det tilrådes at anvende <strong>Dako</strong> Silanized Slides (kode S3003), så vævssnittene hænger bedre fast på objektglassene. Det anbefalede visualiseringssystem er EnVision <strong>FLEX</strong>+, <strong>Mouse</strong>, High pH, (<strong>Dako</strong> Autostainer/Autostainer Plus) (kode K8012). Farvningstrinnene og inkubationstiderne forprogrammeres i softwaren til <strong>Dako</strong> Autostainer/ Autostainer Plus-instrumenter, under anvendelse af følgende protokoller: Skabelonsprotokol: <strong>FLEX</strong>RTU2 (200 µL doseringsmængde) eller <strong>FLEX</strong>RTUS3 (300 µL doseringsmængde) Autoprogram: <strong>CD138</strong> (uden kontrastfarvning) eller <strong>CD138</strong>H (med kontrastfarvning). Trinnet Auxiliary skal indstilles til “rinse buffer” ved farvningskørsler med ≤10 objektglas. Ved farvningskørsler med >10 objektglas, skal trinnet Auxiliary indstilles til “none”. Dette sikrer sammenlignelige vasketider. Alle inkubationstrin skal udføres ved stuetemperatur. Se brugervejledningen til det dedikerede instrument for yderligere oplysninger. Hvis protokollerne ikke er tilgængelige på det anvendte <strong>Dako</strong> Autostainer-instrument, kontaktes <strong>Dako</strong>'s tekniske serviceafdeling. De optimale forhold kan variere afhængigt af præparatet og klargøringsmetoder og bør fastlægges af hvert enkelt laboratorium. Hvis den evaluerende patolog skulle ønske en anderledes farvningsintensitet, kan man kontakte en <strong>Dako</strong> applikationsspecialist/teknisk servicespecialist for oplysninger om, hvordan protokollen omprogrammeres. Kontrollér, at præstationen af den justerede protokol stadig er gyldig ved at evaluere, at farvningsmønstret er identisk med farvningsmønstret beskrevet i “Præstationskarakteristika”. Det anbefales at kontrastfarve i hæmatoxylin ved hjælp af EnVision <strong>FLEX</strong> Hematoxylin, (<strong>Dako</strong> Autostainer/Autostainer Plus) (kode K8018). Det anbefales at anvende et ikke-vandbaseret, permanent monteringsmedium. Der skal udføres positive og negative kontroller samtidigt ved hjælp af den samme protokol som patientprøverne. Det positive kontrolvæv skal omfatte tonsil, og cellerne/strukturerne skal udvise reaktionsmønstre, som beskrevet for dette væv i “Præstationskarakteristika” i alle positive præparater. Det anbefalede negative kontrolreagens er <strong>FLEX</strong> Negative Control, <strong>Mouse</strong>, (<strong>Dako</strong> Autostainer/Autostainer Plus) (kode IS750). Celler, der mærkes af antistoffet, udviser membranfarvning. Normalt væv: I tonsillen viser plasmaceller en moderat til kraftig farvningsreaktion, mens epitelceller viser en svag til moderat farvningsreaktion. Der ses ingen betydelig reaktion med leukocytter fra normalt perifert humant blod (< 5 %), og der ses ingen betydelig reaktion i normal knoglemarv (< 5 %). <strong>CD138</strong> mærkning er fraværende fra CD34- positive stamceller (1). Unormalt væv: I knoglemarv fra patienter med multipelt myelom mærkes alle plasmacelletyper inklusive retikulære, polymorfe, asynkrone og blastiske plasmaceller (2). Referencer 1. Wijdenes J, Clément C, Klein B, Dore J-M. New B-cell CD antigens. BC29: <strong>CD138</strong> (syndecan-1) workshop panel report. In: Kishimoto T, Kikutani H, von dem Borne AEG, Goyert SM, Mason DY, Miyasaka M, et al., editors. Leucocyte typing VI. White cell differentiation antigens. Proceedings of the 6th International Workshop and Conference; 1996 Nov 10-14; Kobe, Japan. New York, London: Garland Publishing Inc.; 1997. p. 249-52. 2. Costes V, Magen V, Legouffe E, Durand L, Baldet P, Rossi J-F, et al. The <strong>MI15</strong> monoclonal antibody (antisyndecan-1) is a reliable marker for quantifying plasma cells in paraffin-embedded bone marrow biopsy specimens. Hum Pathol 1999;30:1405-11. 3. Colomo L, López-Guillermo A, Perales M, Rives S, Martínez A, Bosch F, et al. Clinical impact of the differentiation profile assessed by immunophenotyping in patients with diffuse large B-cell lymphoma. Blood 2003;101:78-84. 4. Sebestyén A, Berczi L, Mihalik R, Paku S, Matolcsy A, Kopper L. Syndecan-1 (<strong>CD138</strong>) expression in human non-Hodgkin lymphomas. Br J Haematol 1999;104:412-9. 5. Gattei V, Godeas C, Degan M, Rossi FM, Aldinucci D, Pinto A. Characterization of anti-<strong>CD138</strong> monoclonal antibodies as tools for investigating the molecular polymorphism of syndecan-1 in human lymphoma cells. Br J Haematol 1999;104:152-62. 6. Jourdan M, Ferlin M, Legouffe E, Horvathova M, Liautard J, Rossi JF, et al. The myeloma cell antigen syndecan-1 is lost by apoptotic myeloma cells. Br J Haematol 1998;100:637-46. 7. Inki P, Jalkanen M. The role of syndecan-1 in malignancies [review]. Ann Med 1996;28:63-7. 8. Carbone A, Gloghini A, Larocca LM, Capello F, Pierconti F, Canzonieri V, et al. Expression profile of (117900-002) IS642/DK/SSM/07.04.08 p. 2/3 <strong>Dako</strong> Denmark A/S | Produktionsvej 42 | DK-2600 Glostrup | Denmark | Tel. +45 44 85 95 00 | Fax +45 44 85 95 95 | CVR No. 33 21 13 17
Forklaring af symboler Katalognummer Medicinsk udstyr til in vitro diagnostik Se brugsanvisningen MUM1/IRF4, BCL-6, and <strong>CD138</strong>/syndecan-1 defines novel histogenetic subsets of human immunodeficiency virus-related lymphomas. Blood 2001; 97:744-51. 9. Horvathova M, Gaillard JP, Liautard J, Duperray C, Lavabre-Bertrand T, Bourquard P, et al. B30.6. Identification of novel and specific antigens of human plasma cells by mAb. In: Schlossman SF, Boumsell L, Gilks W, Harlan JM, Kishimoto T, Morimoto C, et al., editors. Leucocyte typing V. White cell differentiation antigens. Proceedings of the 5th International Workshop and Conference; 1993 Nov 3-7; Boston, USA. Oxford, New York, Tokyo: Oxford University Press; 1995. p. 713-4. Temperaturbegrænsning Indeholder til analyser Lotnummer Anvendes senest Producent (117900-002) IS642/DK/SSM/07.04.08 p. 3/3 <strong>Dako</strong> Denmark A/S | Produktionsvej 42 | DK-2600 Glostrup | Denmark | Tel. +45 44 85 95 00 | Fax +45 44 85 95 95 | CVR No. 33 21 13 17
Change language