Kammerzählung Lc Ec Tc - Labor Team W

Methode
Eine EDTA- bzw. Kapillar-Blutprobe wird mit einem Reagenz gemischt. Die zu zählenden Zellen werden dadurch angefärbt bzw. stabilisiert und allenfalls störende Zellen lysiert.
Mit einer Kolbenhubpipette bzw. Glaskapillare werden filtriertes Reagenz und Blutprobe in einem Kunststoff-Reaktionsgefäss zusammengemischt. Nach Einhaltung der
Inkubationszeit und gutem Mischen wird die Probe mit der Kolbenhubpipette in die Zählkammer eingefüllt.
Vorteile und Nachteile der Kammerzählungsmethode
Handhabung
Genauigkeit
- rasch und einfach in der Praxis durchführbare Analytik
- ausser Mikroskop, keine Gerätschaften nötig
Anwendung - rasche Überprüfungsmöglichkeit der Zellzahlen zur Abschätzung
ob der Patientenwert normal, zu hoch oder zu tief ist
Material
Vorteile Nachteile
- manuelle Methode mit vielen Fehlermöglichkeiten
- Zählung an wenigen Zellen � hohe Ungenauigkeit
- Mikroskopie: die Beurteilung der Elemente in der Kammer unterliegt subjektiven Ein-
drücken des Betrachters
- ungeeignet für die Bestimmung von Zellzahlen im pathologischen Bereich z.B. Lc/ Tc
bei Chemotherapien oder Leukämien.
Verbrauchsmaterial Art.Nr. Packung Reagenzien Art.Nr. Flasche.à Testzahl
Reaktionsgefässe à 2,2 ml M246 à 200 Leukozyten: Türk’s Lösung M241 30 ml 75 (30)*
Rund-Filterpapier ∅ 60mm M247 à 100 Erythrozyten: Dacie & Lewis Lösung M242 30 ml 15
Glaskapillare 10 µl + 50 µl* M244 à 250 Thrombozyten: Plaxan Lösung M243 30 ml 75 (30)*
Glaskapillare 20 µl* M245 à 250 *Testzahl abhängig von der Lösungspipettiermenge (a oder b) siehe Tabelle Rückseite („Pipettierschema“)
*inkl. Pipettierhilfe Artikel die mit einer M-Art.Nr. versehen sind, können Kunden der labor team w ag direkt über das Labor beziehen -> siehe Material-Bestellformular labor team w ag
weiteres Material
- Kolbenhubpipette für Reagenzien für 100-1000 µl (variabel)
- Kolbenhubpipette für Blutprobe für 10-100 µl (variabel) oder alternativ: entsprechende Fixvolumenpipetten oder Glaskapillaren 20 µl/ 50 µl/ 10 µl
- Zählkammer Neubauer improved mit geschliffenem Deckglas
- Trichter und Filterpapier zum Filtrieren der Lösung
Testansatz
EDTA
Ergebnisse können im Vergleich zu anderen Messverfahren um ca. 10% abweichen – für Verlaufskontrollen sollen daher nie mehrere verschiedene Verfahren verwendet
werden. Kapilläre Blutentnahmen stellen eine zusätzliche Fehlerquelle dar. Wenn möglich sollte immer mit venös gewonnenem EDTA-Blut gearbeitet werden.
1
Färbelösung filtrieren. Einmal wöchentlich
oder vor dem Ansatz
5
Gefäss schliessen und gut über den
Deckel kippen. 5 Min. auf Mischer
legen. ( (Thrombo: 5 Min. warten,
dann 5 Min. auf den Mischer legen)
2
Filtrierte Färbelösung in das Reaktionsgefäss
pipettieren
6
Gefäss nochmals sehr gut mischen.
Ca. 20 µl Gemisch in die Kammer
einfüllen (nicht überfüllen)
EDTA
kapillär
3
Blut aufziehen mit Pipette aus gemischtem
EDTA Blut oder mit
Kapillare direkt vom Finger
7
Sedimentation in der Zählkammer:
- Leukozyten/ Erythrozyten 2 Min.
- Thrombozyten 15 Min.*
*feuchte Kammer
EDTA
kapillär
4
Pipettenspitze bzw. Kapillare
aussen mit Papier abwischen. Blut
in die Lösung pipettieren. Pipettenspitze
/ Kapillare mit Lösung
nachspülen*
*Zum Entleeren bzw. Spülen der Kapillare
liegt eine Pipettierhilfe bei. Diese erst
nach der Kapillarfüllung mit Blut auf-
setzen. Für das Aufziehen und Wieder-
ausstossen des Reagenz-Blutgemisches
ist die Öffnung oben am Gummibalg mit
dem Zeigefinger zu schliessen.
Version 15..04.2005 – M4015

Pipettierschema und Berechnung
Auszählung
Parameter Arbeitslösung
Wo? Wie?
Patientenbezogene Störfaktoren
Qualitätssicherung
- Immer Doppelbestimmung durchführen
- Die Abweichung der Resultate beider Bestimmungen sollte < 10% sein. Berechnung -> siehe Abb.1
- Regelmässige Teilnahme am externen Ringversuch (direkter Vergleich mit anderen Kammerzählungs-Teilnehmern)
- Mindestzahl auszuzählender Zellen einhalten (Variationskoeffizienten möglichst tief halten) -> siehe Abb.2
Fehlerquellen Methodik
Leukozyten – 4 grosse Eckquadrate
Erythrozyten / Thrombozyten - 4 Linien (80
Kleinstquadrate)
( HS - TS ) x 100
HS
= Abweichung in %
Verdünnung
Leukozyten Türk 1:20
Erythrozyten
Dacie +
Lewis
Thrombozyten Plaxan 1:20
andere Pipettier-Volumina bzw. Verdünnungen
HS = höhere Summe / TS = tiefere Summe Abb.1
Variante
Blut
in µl
Lösung
in µl
a) 20 380
b) 50 950
für Wertebereich
- Ec mindestens 400 Zellen (Variationskoeffizient 5%)
- Lc mindestens 100 Zellen (Variationskoeffizient 10%)
- Tc mindestens 100 Zellen (Variationskoeffizient 10%)
ausgezählte Zellen x Faktor Auszählung
normal x 0.05 = G/l x 50 Lc/µl 4 Eckquadrate
1:200 10 1990 normal x 0.01 = T/l x 10'000 Ec/µl 4 Linien (Mitte)
a) 20 380
b) 50 950
normal x 1 = G/l x 1’000 Lc/µl 4 Linien (Mitte)
Leukozyten Türk 1:100 20 1980 Lc > 50.0 G/L x 0.25 = G/l x 250 Lc/µl 4 Eckquadrate
Erythrozyten
„ „ 1:10 20 180 Lc < 4.0 G/L x 0.025 = G/l x 25 Lc/µl 4 Eckquadrate
Dacie &
Lewis
1:100 20 1980 Ec < 3.0 T/L x 0.005 = T/l x 5'000 Ec/µl 4 Linien (Mitte)
Thrombozyten Plaxan 1:100 20 1980 Tc > 450 G/L x 5 = G/l x 5’000 Tc/µl 4 Linien (Mitte)
„ „ 1:10 20 180 Tc < 100 G/L x 0.5 = G/l x 500 Tc/µl 4 Linien (Mitte)
Falsche Werte
Tendenz � / �
Ursache Vermeidung
���� Blut aussen an der Pipettenspitze bzw. Kapillare nicht abgewischt. Ergibt Pipettenspitze bzw. Kapillare nach dem Aufziehen der Blutprobe mit einem
falsches Mischverhältnis (zu viel Blut).
Papier aussen abwischen. Vorsicht: kein Blut rausziehen.
���� Absaugen von überschüssig in die Kammer eingefüllter Probe mittels Papier
(Tupfer) ergibt falsches Verhältnis zwischen Flüssigkeit und Zellen.
Kammer sauber und schnell mit korrekter Probenmenge füllen
���� Kammer nicht optimal gereinigt. Staubpartikel, Papierfusseln etc. imitieren Sorgfältige Reinigung der Kammer. Nachputzen mit Alkohol 70% und trock-
kleine Zellen wie z.B. Thrombozyten.
nen mit fusselfreiem Kleenex-Papier.
���� Deckglas nicht sauber aufgebracht (keine Newton’sche Farbringe auf den
Stegen).
Falsche Kammertiefe = falsches Probenvolumen
���� Probe beginnt in der Kammer einzutrocknen (Einlaufen von den Kammer- Sobald Sie ein Einlaufen der Ränder beobachten, müssen Sie die Kammer
rändern her).
neu einfüllen – ansonsten falsch hoher Zählwert (bis zu 50%)
���� oder ���� Die Pipettenspitze/ Kapillare wurde nicht korrekt mit Blut bzw. Lösung gefüllt
(Luftblasen oder nicht vollständige Füllung).
Pipettenspitze, Kapillare auf korrekte Füllung kontrollieren
���� oder ���� Ungenügendes Mischen der Probe mit dem Reagenz. Reaktionsgefäss gut mischen
���� oder ���� Überfüllen der Kammer mit Probematerial (läuft über den Mittelsteg in die
2. Kammer).
Falsches Probenvolumen = falscher Wert
���� oder ���� Falschen Berechnungsfaktor verwendet. Vergleiche „Pipettierschema und Berechnung“ oben
Abb.2
Leukozytenzählung
kernhaltige Vorstufen der Erythrozyten (Erythroblasten)
werden versehentlich als Lc gezählt,
dies führt zu falsch hohen Werten.
Erythrozytenzählung
Kälteagglutinine: Autoantikörper die zur Agglutination
(Verklumpung) von Erythrozyten führen.
Agglutinate führen zu falsch tiefen Werten.
Thrombozytenzählung
Thrombozytenaggregate (verklumpte Thrombozyten)
durch Entnahmefehler, ungenügende Mischung
des EDTA-Blutröhrchens bei Entnahme
oder seltener durch eine EDTA-Unverträglichkeit
des Patienten. Aggregagte führen zu falsch
tiefen Werten.