2 Material und Methoden

14 CO 2 (≈ 1,83 * 10 6 dpm / Versuchsansatz) wurde in kleinen gasdicht verschließbaren
Glasröhrchen (≈ 0,5cm 3 ) durch Zusammengeben von 10µl 5% Perchlorsäure + 10µl 14 C-
Natriumcarbonat im Wasserbad bei 60° C und unter Anlegen eines leichten Vakuums
freigesetzt und in die Assimilationskammern eingeleitet. Die Markierung mit 14 CO 2 dauerte 5
Minuten, anschließend wurde überschüssiges 14 CO 2 durch mit 4N KOH getränkte Watte
geleitet und die Assimilationskammern wurde wieder an die Außenluft angeschlossen.
Nach definierten Translokationszeiten wurden die Blätter aus den Kammern ausgespannt
und die Wirt-Parasit-Systeme entsprechend der zu untersuchenden Fragestellung
aufgearbeitet.
2.3.2 Applikation radioaktiver Lösungen durch Auftropfen auf die Blattspreiten
Erfolgreich am Blattstiel parasitierte Blätter von Pelargonium zonale wurden 24 Stunden vor
Versuchsbeginn von der Pflanze abgetrennt, wie in 2.3.1 beschrieben, vorbehandelt und
anschließend in eine Glaskammer mit wassergesättigter Atmosphäre bei Raumtemperatur
ohne Zusatzbeleuchtung überführt. Die Applikation der radioaktiv markierten Lösungen
erfolgte am Blattgrund zwischen den Blattadern auf einer Fläche von ≈ 3cm 2 , die vorher mit
extra feinem Sandpapier leicht aufgerauht wurde. Pro Blatt wurden 5µl der zu
untersuchenden Substanz definierter Konzentration in 10mM MES/NaOH (pH 5,0)
aufgetragen. Um eine bessere Aufnahme zu erzielen, wurde die Applikationsstelle im
Abstand von 30 Minuten zweimal mit Puffer nachgefeuchtet. Nach Ablauf der
Translokationszeit wurden die Wirt-Parasit-Systeme in definierte Abschnitte (siehe 2.2)
zerteilt, deren Frischmasse bestimmt und wie unter 2.3.5 beschrieben, aufgearbeitet.
2.3.3 Applikation radioaktiver Substanzen durch Injektion
Die Versuchssysteme wurden wie unter 2.3.1 und 2.3.2 beschrieben vorbehandelt. Die
Injektion erfolgte mit einer 5 µl-Spritze mit angeschliffener Nadel entweder in das
Parenchym zwischen den Blattadern am Blattgrund in Richtung Blattstiel oder unterhalb der
Blattspreite direkt in das Parenchym des Blattstiels. Alle Substanzen wurden in 10mM
MES/NaOH (pH 5,0) appliziert. Nach dreistündiger Translokationszeit wurde das Wirt-
Parasit-System in definierte Abschnitte zerschnitten, deren Frischmasse bestimmt und wie
unter 2.3.5 beschrieben, aufgearbeitet.
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