MIKROBIOLOGISCHES PRAKTIKUM FÜR STUDIERENDE DER ...

M-9
- Durch Eingießen von sterilem destilliertem Wasser kann das Gerät gegebenenfalls
ausgekühlt werden.
Filtration
- Um eine Verunreinigung mit Luftkeimen zu verhindern, ist in einem Raum ohne Luftzug
neben einer brennenden Bunsenbrennerflamme zu arbeiten.
- Mit einer sterilen Pinzette wird ein steriler Membranfilter nach Abnehmen des Aufsatzes
auf den Filtertisch des Geräteunterteils gelegt und der Aufsatz wieder aufgesetzt.
- Eine undefinierte Menge an sterilem Wasser in den Trichter gießen und 1 ml der
Verdünnung 10 -9 dazu pipettieren
- Die Flüssigkeit absaugen, den Aufsatz entfernen und den Filter mit einer sterilen Pinzette
abnehmen.
- Den Filter mit der unsterilen Seite nach oben, luftblasenfrei in das Zentrum einer
Agarplatte legen
- Die Koloniezahl sollte zwischen 30 und 200 pro 12,5 cm 2 wirksamer Filtrationsflächen
liegen. Die maximale Belegungsdichte sollte 200 Kolonien nicht überschreiten. Bei
höherer Keimzahl muß man die Probe verdünnen.
2. Tag
- Auswertung der Keimzahlbestimmung mittels Membranfiltertechnik siehe Oberflächenplattierung
Wahrscheinlichste Keimzahl, MPN-Verfahren
Mittels des MPN-Verfahren (MPN = Most Probable Number) wird auf statistischem Wege
die „wahrscheinlichste Keimzahl“ bestimmt. Dabei werden von jeder Verdünnung mehrere
Röhrchen parallel nebeneinander beschickt. Mit steigender Zahl der Parallelen nimmt die
Genauigkeit zu. Entscheidend ist immer, daß genügend weit verdünnt worden ist und
eindeutig negative Ergebnisse vorliegen. Nach der Bebrütung werden alle Röhrchen
ausgewertet. Aus der Anzahl der positiven Röhrchen ergibt sich die Stichzahl (significant
number).
1. Tag
- MPN-Röhrchen (4,5 ml LB) werden mit 0,5 ml Probe beimpft
- Es werden pro Verdünnung 3 Parallelröhrchen angesetzt
- Für die MPN-Bestimmung werden die Verdünnungen 10 -7 – 10 -10 verwendet
2.Tag
Auswertung:
- Keimzahlangabe in MPN/ml:
- Ermittlung der Stichzahl: Anzahl der bewachsenen Röhrchen, in der Reihenfolge
fortschreitender Verdünnung geschrieben
- MPN-Index der Stichzahl aus der jeweiligen MPN-Tabelle ablesen
- Muliplikation des MPN-Index mit dem Verdünnungsfaktor
Gesamtkeimzahlbestimmung mit der Zählkammermethode:
Die Bestimmung der Gesamtkeimzahl erfolgt durch direktes Auszählen der Bakterienzellen in
einer mit 5% Formol konservierten Probe. Eine Suspension mit wird in einer Zählkammer
unter dem Mikroskop bei 400-facher Vergrößerung mit Phasenkontrast ausgezählt. Die
Zählkammer nach THOMA ist ein Glasobjektträger mit einem in einer eingeschliffenen