Aus der Klinik für Urologie - Universität zu Lübeck

Ein weiteres triplet der Bakterien wurde je Konzentration direkt in die mit 2 ml
Szintillationsflüssigkeit (Rotiscint eco plus, Carl Roth, Karlsruhe) gefüllten Zählröhrchen
(Pony-vials, 6 ml, Canberra Packard, Frankfurt a. M.) überführt. Dieses triplet diente
jeweils der Bestimmung der Maximalaktivität.
Die Mykobakterien wurden 15 min bei 440g in der Plattenzentrifuge an den Monolayer aus
Tumorzellen anzentrifugiert und für 4 h koinkubiert. Anschließend wurden die wells durch
Eintauchen der Flachbodenplatte in eine mit PBS gefüllte Schale aufgefüllt und die Platte
über Kopf zentrifugiert (10 min, 195g).
Nachdem der Überstand vorsichtig herausgeschlagen worden war, wurden je well 100 µl
Triton-X-100/SDS hinzugefügt, um sowohl Tumorzellen als auch phagozytierte bzw.
adhärente Mykobakterien jetzt vollständig in die mit 2 ml Szintillationsflüssigkeit
(Rotiscint eco plus, Carl Roth, Karlsruhe) gefüllten Zählröhrchen (Pony-vials, 6 ml,
Canberra Packard, Frankfurt a. M.) überführen zu können. Abschließend erfolgten die
Messung der Radioaktivität in einem Beta-Counter (Tricarb, 460 M, Canberra Packard)
und die Berechnung der Adhäsion in Prozent nach der Formel :
Adhäsion (%) =
experimentielle Aktivität
MAXIMAL - AKTIVITÄT
Anschließend wurden wiederum der Mittelwert und die Standardabweichung je triplet
berechnet (Microsoft Excel ® ) und anschließend grafisch aufgetragen.
Wiederum wurden die Ergebnisse der Einzelversuche je Zellinie und Konzentration
zusammengefasst. Mit den atypischen Mykobakterien und E. coli wurde analog verfahren.
Allerdings wurden hier Bakterienkonzentrationen von 1x10 9 cfu/ml verwendet, da die
gemessene Radioaktivität sonst nicht auswertbar gewesen wäre.
Die statistische Auswertung der Zusammenfassung der Adhäsionsassays erfolgte analog zu
früheren Publikationen über den student´s t-test (Microsoft Excel ® ). Hinsichtlich der
erhobenen Daten war im Rahmen der Beratung durch das Institut für Medizinische
Biometrie und Statistik des UKL wiederum stichprobenartig die Normalverteilung der
Daten nachgewiesen worden.
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