Archivserver der Deutschen Nationalbibliothek
Archivserver der Deutschen Nationalbibliothek
Archivserver der Deutschen Nationalbibliothek
Sie wollen auch ein ePaper? Erhöhen Sie die Reichweite Ihrer Titel.
YUMPU macht aus Druck-PDFs automatisch weboptimierte ePaper, die Google liebt.
2 MATERIAL UND METHODEN<br />
2.3.1 Dünnschichtchromatographie<br />
Zur Qualitätskontrolle <strong>der</strong> Markierung wurden 10 µl des zuvor radioaktiv<br />
markierten Antikörpers auf Dünnschichtchromatographiepapier (Instant Thin Layer<br />
Chromatography<br />
TM<br />
SG (ITLC), silica gel impregnated fiber sheets, Pall<br />
Corporation, Dreieich, Deutschland) aufgetragen und eine aufsteigende<br />
Dünnschichtchromatographie mit NaCl 0,9% als Lösungsmittel durchgeführt. Das<br />
Prinzip dieser Art <strong>der</strong> Qualitätskontrolle besteht darin, dass <strong>der</strong> Antikörper bei<br />
stabiler Markierung nicht wie das Iodid mit dem Lösungsmittel mitläuft, son<strong>der</strong>n an<br />
<strong>der</strong> Startlinie verbleibt. Nach Erreichen <strong>der</strong> Lösungsmittelfront wurde die Aktivität<br />
des ITLC insgesamt sowie <strong>der</strong> unteren Hälfte gemessen. Die Aktivitätsmessung<br />
direkt vor Versuchsbeginn konnte wie unter 2.4.1 beschrieben mittels eines<br />
Aktivimeters (CRC-15R, Capintec) durchgeführt werden. Die Messung <strong>der</strong> Aktivität<br />
im Rahmen <strong>der</strong> Überprüfung <strong>der</strong> generellen Stabilität <strong>der</strong> Markierung efolgte, wie<br />
unter 2.6.3 erläutert, im Bohrloch-Detektor. Sofern <strong>der</strong> Quotient <strong>der</strong> Aktivität aus<br />
unterer Hälfte und Gesamtstreifen, das heißt <strong>der</strong> Anteil des an 131 I gebundenen<br />
Antikörpers, größer 0,9 betrug, war die radiochemischen Reinheit >90%. Wurde<br />
eine geringere radiochemische Reinheit erreicht, mußte eine neue Markierung<br />
erfolgen.<br />
2.3.2 Hochleistungsflüssigkeitschromatographie – HPLC<br />
Das Prinzip <strong>der</strong> HPLC besteht darin, dass eine mobile Phase – das Laufmittel<br />
(PBS-Puffer ph 6,8; 0,1 molar) – über eine stationären Phase – die Size-Exclusion-<br />
Harz (Bio-Sil(R) SEC 250-5, 300 mm x 7,8 mm, Bio-Rad Laboratories, Hercules,<br />
USA) – mit 0,5 ml/min gepumpt wird und dabei die zu untersuchenden<br />
Substanzen abhängig von ihrer Größe unterschiedlich stark an dieser festen<br />
Phase retardiert werden. Große Molekulargewichte sind mit entsprechend<br />
kürzeren Retentionszeiten verbunden. Das Molekulargewicht des IgG-Antikörpers<br />
beträgt 150 kDa, das des 131 I 131 Da. Am Ende <strong>der</strong> Säule wurde zum einen die<br />
Radioaktivität detektiert, zum an<strong>der</strong>en wurde das UV-Signal <strong>der</strong> Substanzen bei<br />
250 nm ermittelt. Die Untersuchungen erfolgten mittels Knauer Smartline UV-<br />
Detektor 2500 und <strong>der</strong> entsprechenden Software ClarityChrom 2.6.<br />
20
Change language