peqGOLD HP Total RNA Kit - PEQLAB Biotechnologie GmbH

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EINLEITUNG Der peqGOLD HP Total RNA Kit kombiniert eine auf Phenol und Guanidinisothiocyanat basierende Einschritt-Flüssigphasen-Separation mit einer silikatmembran-basierenden Zentrifugationssäulenmethode, für eine einfache und effiziente Isolierung von Gesamt-RNA aus eukaryotischen Zellen und Geweben. Das im Kit enthaltene peqGOLD TriFast ist ein gebrauchsfertiges Reagenz optimal geeignet für die Lyse von verschiedenen Geweben, vor allem für fettreiche Gewebe wie z.B. Gehirn oder Fettgewebe, und inhibiert gleichzeitig effizient RNasen. Ein optimiertes Puffersystem erlaubt dabei die Aufreinigung von bis zu 100 µg nicht degradierter Gesamt-RNA mit Moleküllängen ab 200 Basen aufwärts. RNA, die mit den peqGOLD HP Total RNA Kits isoliert wurde, kann für alle Arten von Folgeexperimenten, wie RT-PCRs, Poly(A) + -RNA-Extraktionen, Northern Blots, Nuclease Protection Assays und in vitro-Translationen, weiterverwendet werden. peqGOLD HP Total RNA Kits werden wahlweise mit S- oder mit C-Säulen geliefert (Safety- Line, Best.-Nr. 12-6935-xx oder Classic-Line, Best.-Nr. 12-6936-xx). Schnappdeckel sorgen bei den Safety-Line Säulen für einen sicheren Verschluss und zusätzlichen Schutz vor Kreuzkontaminationen. Classic-Line Säulen haben keinen Deckel und erleichtern so das Handling. FUNKTIONSPRINZIP Aufzuarbeitende Zellen und Gewebe werden zunächst in TriFast Reagenz homogenisiert, wobei alle vorhandenen RNasen und sonstige Enzyme effizient inhibiert werden. Durch die Verwendung von TriFast Reagenz ist es möglich auch größere Mengen Gewebe (bis zu 100 mg Gehirn oder Fettgewebe) auf eine peqGOLD PerfectBind RNA Column zu laden und damit die RNA-Ausbeute zu erhöhen. Nach der Zugabe von Chloroform und anschließender Zentrifugation trennt sich das Homogenat in drei Phasen auf. Die RNA ist in der wässrigen Phase enthalten, die DNA in der organischen und der Interphase. Die Proteine befinden sich in der organischen Phase. Die wässrige Phase wird anschließend auf eine PerfectBind RNA Column geladen, in der die RNA-Moleküle an die enthaltene Silikamembran binden. Phenol und andere Kontaminationen können durch Waschen mit speziellen Puffern schnell und einfach entfernt werden. Die gereinigte und qualitativ sehr hochwertige RNA wird abschließend in sterilem RNase-free Water eluiert. peqGOLD HP Total RNA Art.-Nr.: 12-6935/12-6936 V.0111 PEQLAB Biotechnologie GmbH 1
KITBESTANDTEILE peqGOLD HP Total RNA Kits 5 Reinigungen 50 Reinigungen 200 Reinigungen Bestellnummer Classic-Line 12-6936-00 12-6936-01 12-6936-02 Bestellnummer Safety-Line 12-6935-00 12-6935-01 12-6935-02 Bestandteile PerfectBind RNA Columns 5 50 200 2 ml Collection Tubes 15 150 600 TriFast Reagenz 6 ml 55 ml 220 ml RNA Wash Buffer I 5 ml 50 ml 200 ml RNA Wash Buffer II (Konz.) 2 ml 20 ml 3 x 20 ml RNase-free Water 1 ml 5 ml 20 ml Arbeitsanleitung 1 1 1 LAGERUNG Alle Komponenten des peqGOLD HP Total RNA Kits, mit Ausnahme des TriFast Reagenz, sollten bei Raumtemperatur gelagert werden. Die Lagerung des TriFast Reagenz sollte bei 4 °C erfolgen. Bei Lagerung unter den angegebenen Bedingungen bleiben die Komponenten des Kits für mindestens 12 Monate ab Lieferung stabil. peqGOLD HP Total RNA Art.-Nr.: 12-6935/12-6936 V.0111 PEQLAB Biotechnologie GmbH 2
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