Leben_11

Empfehlungen

Info

6.8. Analyse des Produktstoffwechsels von E. coli 4pF20 und E. coli 4pF78 mit statistischen MethodenE. coli 4pF200,60,40,2PEK [1/s]AroF/G/HPEPDAH(P)P5PE. coli 4pF78AroBDHQAroD AroE AroK/L AroADHS SHIK S3P EPSP0,01,51,00,5PEK [1/s]0,0Abbildung 6.58.: Ermitteltes Pool–Effluxkapazitäts–Kriterium (PEK) von E. coli 4pF20und 4pF78 nach der Glukosepulszugabe; in der Mitte der zugehörige Verlauf desBiosynthesewegs mit Metaboliten und Enzymen; grau hinterlegte Metabolitpools indizierenden darauf folgenden limitierenden Reaktionsschritt (Bottleneck)149
6. Ergebnisse und Diskussionzwischen den beiden Stämmen beobachtet, die auch die beiden Vorläufermetaboliten PEPund P5P einschließen und was besonders für den abnehmenden PEP Pool zutraf (Abb. 6.56,rechts). Sehr starke Schwingungen wurden für die Pools von DHQ und DHS beobachtet,schwächere für Shikimat und S3P. Für die schnelle Reaktion von DAHP zu DHQ, d.h.dem Fehlen eines messbaren DAH(P) Pools, war vermutlich die Kombination aus dererhöhten AroB Konzentration und dem Fehlen des Inhibitors DAH verantwortlich. Es bleibtanzumerken, dass der erste dynamische Sprung der DHQ und DHS Pools von dem für dieGlättung gewählten FFT–Filter nicht vollständig abgedeckt werden konnte.Aus den Konzentrations–Zeit–Verläufen wurden erneut die normierten Poolgeschwindigkeiten(NPG) ermittelt, die in Abb. 6.57 (unten) dargestellt sind. Im Gegensatz zu denDaten von E. coli 4pF20 zeichneten sich die NPG Daten von 4pF78 durch signifikantephasengleiche, gedämpfte Schwingungen in den Metaboliten aus. Aufgrund des fehlendenDAH(P) Puffers wurde die Anregung aus den Vorläufermetaboliten direkt in die folgendenPools von DHQ und DHS geleitet, die im gesamten weiteren Verlauf phasengleich schwangen.Diese Schwingungen schienen auch mit P5P phasengleich zu sein, wogegen P5P und PEPjedoch genau gegenläufig zu schwingen schienen. Für S3P konnte aus den Daten ein starkeÄhnlichkeit mit dem Schwingungsverhalten von PEP abgeleitet werden, die möglicherweisemit der darauf folgenden stöchiometrischen Umsetzung von S3P und PEP zu EPSP durchdie EPSP Synthase in Verbindung gebracht werden kann.Oszillationsanalyse Das ausgeprägte Schwingungsverhalten der NPG-Daten vonDHQ und DHS wurde im zeitlichen Verlauf gedämpft, und nach etwa 15 Sekundennach dem Puls war nahezu keine Schwingung mehr zu erkennen. Mit einem Standardansatzzur Beschreibung von gedämpften Schwingungen (Gleichung 6.2), konntendie abnehmenden Amplituden von DHQ und DHS mit Regressionskoeffizienten vonR 2 DHQ = 0.91 und R2 DHS= 0.89 angepasst werden. Für DHQ wurden die Parametermit u 0DHQ = 1.353 ± 0.149s −1 , δ DHQ = 0.096 ± 0.019s −1 und für DHS mitu 0DHS =1.133 ± 0.138s −1 , δ DHS =0.105 ± 0.019s −1 bestimmt, was einer Dämpfung von38 % zwischen zwei aufeinander folgenden Amplituden entsprach. Damit wurde zwar einEindruck über die starke Dämpfung der anfänglich in der Reaktionssequenz initiiertenSchwingung erhalten, ohne jedoch eine Erklärung dafür bereitzustellen. Für Shikimat undS3P wurde kein gleichwertiges Schwingungsverhalten beobachtet, was den Schluss zulassenkonnte, dass diese beiden von einer anderen Stimulationsquelle angeregt worden waren alsdie Metaboliten DHQ und DHS.u max (t) =u 0 exp(−δt) (6.2)Korrelationsanalyse Mit den NPG Daten von E. coli 4pF78 wurde eine Korrelationsanalysein Bezug auf die Vorläufermetaboliten PEP und P5P durchgeführt, in der alle Datennach dem Puls berücksichtigt wurden (Abb. 6.59). Das Ergebnis der Analyse zeigte, dassdie Abhängigkeit von P5P mit fortschreitender Reaktionssequenz von DHQ über DHS zuShikimat und S3P abnahm, während gleichzeitig die Abhängigkeit zu PEP zunahm. DerP5P Pool war sehr stark mit DHQ (0.92) und DHS (0.77) korreliert, jedoch mit PEP fast150
Seite 4 und 5:
Forschungszentrum Jülich GmbHInsti
Seite 6:
Die Menschen pflegen die Natur wie
Seite 10 und 11:
Inhaltsverzeichnis1 Einleitung 12 P
Seite 12 und 13:
Inhaltsverzeichnis6.2.4 Darstellung
Seite 14 und 15:
Abbildungsverzeichnis1.1 Trefferzah
Seite 16 und 17:
Abbildungsverzeichnis6.21 Prinzipie
Seite 18 und 19:
Abbildungsverzeichnis6.51 Fermentat
Seite 20 und 21:
Tabellenverzeichnis6.10 Ergebnisse
Seite 22 und 23:
Abkürzungen und SymboleAbk. Abkür
Seite 24 und 25:
Abk.wt (-Index)AbkürzungWildtyp-Va
Seite 26 und 27:
1. EinleitungDie Nutzung der biolog
Seite 28 und 29:
duktionseigenschaften untersucht. D
Seite 30 und 31:
2. Problemstellung und ZielsetzungE
Seite 32 und 33:
synthese hat hier möglicherweise e
Seite 34 und 35:
3. Theoretische Grundlagen3.1. Biol
Seite 36 und 37:
3.1. Biologische GrundlagenCytoplas
Seite 38 und 39:
3.1. Biologische GrundlagenFreiheit
Seite 40 und 41:
3.1. Biologische Grundlagenwichtige
Seite 42 und 43:
3.1. Biologische Grundlagenmetaboli
Seite 44 und 45:
3.2. Verfahrenstechnische Grundlage
Seite 46 und 47:
3.2. Verfahrenstechnische Grundlage
Seite 48 und 49:
3.3. Analytische Grundlagenprimär
Seite 50 und 51:
3.3. Analytische GrundlagenAb einer
Seite 52 und 53:
3.3. Analytische GrundlagenESI Spra
Seite 54 und 55:
4. Material und Methoden4.1. Biolog
Seite 56 und 57:
4.1. Biologisches SystemDie zweite
Seite 58 und 59:
Professional Workstation 6000PROSD4
Seite 60 und 61:
4.3. Aufbau und Durchführung der F
Seite 62 und 63:
Seite 64 und 65:
Seite 66 und 67:
4.5. Aufarbeitung von Metaboliten d
Seite 68 und 69:
4.5. Aufarbeitung von Metaboliten d
Seite 70 und 71:
5. Analytische Methoden5.1. Biomass
Seite 72 und 73:
5.3. Extrazelluläre AnalytikTabell
Seite 74 und 75:
5.3. Extrazelluläre AnalytikTabell
Seite 76 und 77:
5.4. Intrazelluläre AnalytikTabell
Seite 78 und 79:
Seite 80 und 81:
5.4. Intrazelluläre AnalytikAbbild
Seite 82 und 83:
Seite 84 und 85:
5.4. Intrazelluläre Analytik5.4.6.
Seite 86 und 87:
6. Ergebnisse und Diskussion6.1. En
Seite 88 und 89:
6.1. Entwicklung und Etablierung de
Seite 90 und 91:
Seite 92 und 93:
Seite 94 und 95:
Seite 96 und 97:
Seite 98 und 99:
Seite 100 und 101:
Seite 102 und 103:
Seite 104 und 105:
6.2. Darstellung und Isolierung der
Seite 106 und 107:
Seite 108 und 109:
Seite 110 und 111:
Seite 112 und 113:
6.3. Einsatz der 1 H-NMR Metabolit
Seite 114 und 115:
Seite 116 und 117:
Seite 118 und 119:
Seite 120 und 121:
Seite 122 und 123:
6.4. Identifizierung weiterer Neben
Seite 124 und 125: 6.4. Identifizierung weiterer Neben
Seite 126 und 127: 6.5. Untersuchungen zu Methanol-Que
Seite 128 und 129: 6.5. Untersuchungen zu Methanol-Que
Seite 130 und 131: 6.6. Entwicklung eines Fed-Batch Fe
Seite 146 und 147: 6.7. Glukosepulsexperimente mit L-P
Seite 168 und 169: 6.8. Analyse des Produktstoffwechse
Seite 180 und 181: 7. ZusammenfassungAm Beispiel der A
Seite 182 und 183: (10 mM) im Vergleich zum 3-Dehydroq
Seite 184 und 185: 8. Ausblick• Basierend auf den ge
Seite 186 und 187: A. FermentationsmedienA.1. Luria-Be
Seite 188 und 189: A.5. Hauptkulturmedium Nr. IBis auf
Seite 190 und 191: A.8. ChemikalienverzeichnisFür die
Seite 192 und 193: Literaturverzeichnis[1] Adachi, O.;
Seite 194 und 195: Literaturverzeichnis[26] Budzinski,
Seite 196 und 197: Literaturverzeichnis[53] Duke, C.C.
Seite 198 und 199: Literaturverzeichnis[79] Harvey, D.
Seite 200 und 201: Literaturverzeichnis[105] Leuchtenb
Seite 202 und 203: Literaturverzeichnis[130] Paiva,A.A
Seite 204 und 205: Literaturverzeichnis[156] Soga, T.;
Seite 206: Literaturverzeichnis[182] Weuster-B
Seite 209: Schriften des Forschungszentrums J
Alle anzeigen

Leben_11

Erfolgreiche ePaper selbst erstellen

Template löschen?

Als Template speichern?