Abhängigkeit des Wurzelwachstums vom Lichtregime des Sprosses ...

38 Material und Methoden
Dabei ist ε der Extinktionskoeffizient [l cm -1 mol -1 ], c die Konzentration [mol l -1 ] und d die
Schichtdicke [cm] der Küvette. Unter der Annahme, dass 1 mg pro ml Chlorophyll einer
OD von 34.4 entspricht, konnte der Chlorophyll-Gehalt folgendermaßen bestimmt werden:
V
OD⋅
VKuevette⋅
-1
Chlorophyll
[mg g FG] =
V
-1
34,4 [ml mg ] ⋅ FG
Hierbei stellt VKuevette das Küvettenvolumen dar; VExtrakt das Gesamtvolumen des
ethanolischen Extraktes; VAliquot das eingesetzte Probenvolumen (jeweils in µl) und FG das
Frischgewicht des pflanzlichen Materials in mg.
2.6.3 Lösliche Kohlenhydrate
Prinzip des gekoppelten Enzymtests
Die Messung der löslichen Kohlenhydrate Glukose, Fruktose und Saccharose erfolgte
photometrisch (anthos ht2, Fa. anthos Mikrosysteme GmbH, Krefeld) bei einer
Wellenlänge von 334 nm anhand eines gekoppelten Enzymtests, wobei die Umsetzung
von NADP + zu NADPH + H + quantitativ als Erhöhung der optischen Dichte verfolgt wurde
(Jones et al. 1977).
Extrakt
Aliquot
Die Startreaktion wurde vom Enzym Glukose-6-Phosphat-Dehydrogenase katalysiert:
1. Glukose-6-Phosphat + NADP + � 6-Phosphogluconat + NADPH + H +
Sobald das gesamte Glukose-6-Phosphat in der Probe umgesetzt war, wurde das nächste
Enzym - Hexokinase - zugegeben:
2. Glukose + Fruktose + ATP � Glukose-6-Phosphat + Fruktose-6-Phosphat +
ADP
Das gebildete Glukose-6-Phosphat wurde mit dem Enzym Glukose-6-Phosphat-
Dehydrogenase weiter umgesetzt (siehe 1.), wobei ebenfalls NADPH + H + gebildet wurde.
Nach Erreichen eines konstanten Wertes der optischen Dichte konnte aus der Differenz
der Plateauwerte die Konzentration an Glukose bestimmt werden. Anschließend wurde
Phosphoglucoisomerase hinzu gegeben, die das zuvor entstandene Fruktose-6-Phosphat
wie folgt umwandelte:
3. Fruktose-6-Phosphat � Glukose-6-Phosphat
Glukose-6-Phosphat wurde, wie oben beschrieben, weiter umgesetzt (siehe 1.) und
ermöglichte somit die Quantifizierung der Fruktose-Konzentration.
Mit dem letzten Enzym Invertase wurde Saccharose gespalten:
Probe