Untersuchungen zu extrazellulären Enzymen bei marinen ...

Ergebnisse 23
mit Stärke ist aufgrund der ungelösten Stärkepolymere sehr trüb, wohingegen das Medium
mit Maltose klar ist.
Die Anreicherung der Amylase aus den Kulturüberstanden des Stammes Bo 10-09 (siehe
Kap. 2.3.3.3.) erfolgte mittels der Ammoniumsulfatfällung. Die Proteinkonzentrationen in den
zellfreien Kulturüberstanden waren unter der Detektionsgrenze der Methode nach Bradford
(siehe Kap. 2.3.3.5.).
3.2.2. Ammoniumsulfatfällung
Die Proteine in den Kulturüberständen, welche 1 % Maltose oder 0,5 % Stärke enthielten,
wurden bei einer 80 % igen Sättigung mit Ammoniusulfat gefällt. Die Fällung der Proteine in
dem Ansatz, welches Stärke beinhaltete, erwies sich als problematisch. Es hat sich
herausgestellt, dass Stärke bei Zugabe von Ammoniumsulfat ausfällt. Dadurch wurde nach
der Zentrifugation ein großes Stärke-Protein-Pellet erhalten.
Nach der Dialyse betrug die Proteinkonzentation in dem Ansatz mit Stärke 1,74 µg/ml und in
dem Ansatz mit Maltose 0,6 µg/ml.
3.2.3. Amylase-Aktivitätsbestimmung im SDS-Gel
Mit Hilfe der Amylase-Aktivitätsfärbung sollten die Proben auf Anwesenheit von Amylase
getestet werden. Auf diese Weise sollte überprüft werden, ob der Stamm Bo-10-09 die
Fähigkeit besitzt, sowohl bei Anwesenheit von Stärke als auch bei Anwesenheit von Maltose,
extrazelluläre Amylasen zu produzieren.
In Tab. 3.3. ist das Auftragsschema der Proben im Gel für die SDS-PAGE dargestellt.