9宁夏大学-披针叶黄华生物碱的提取及对小鼠的急性毒理试验

披针叶黄华生物碱的提取及对小鼠的急性毒理试验
李勇 何生虎 张永康
(宁夏大学农学院动物科学系,宁夏银川,750021)
摘 要:披针叶黄华(Thermopsis lanceolate)别名“牧马豆”是豆科野决明属植物。牧马豆是有毒植,可引起
牲畜中毒。但也是药用植物,具有兴奋呼吸,抗辐射及去痰止咳等功效。采用醇类溶剂提取法从披针叶黄
华中得到总生物碱进行了急性毒性试验,其对小鼠腹腔注射的半数致死量 LD50 为 94.83 mg/kg。
关键词:披针叶黄华;总生物碱;急性毒性试验
披针叶黄华(Thermopsis lanceolate)别名叫牧马豆或土马豆,属豆科(leguminoseae)
野决明属(Thermopsis)植物,为多年生草本植物。分布于东北、华北、内蒙古、陕西、甘
肃、宁夏、青海、新疆、四川等省区,俄罗斯、蒙古也有分布。同属植物全世界约有 30 种,
我国有 8 种及 3 变种,常见的还有高山黄华(T.alpina ledeb),紫花黄华(T.barbata Benth),
小叶野决明(T.chinensis Benth)和野决明(T.lupindides),其中高山黄华、紫花黄华和野决明为
有毒植物,全草有毒,为牧场常见有毒植物,种子易混入谷物引起人和牲畜的中毒。产生神
经系统的兴奋和气管刺激症状 [1] [2] [6] [7] 。本实验利用对披针叶黄华生物碱的提取进行的急性
毒性试验,为披针叶黄华中毒病的防治提供了一定的理论依据。
1 材料
1.1 材料
1.1.1 主要仪器 AR1140 电子天平,美国制造;回流装置,减压蒸馏装置;2XZ-2 旋片式真
空泵(浙江黄岩求精真空泵厂生产);RE52-05 型旋转蒸发仪(上海亚荣生化仪器厂);Db-2
型不锈钢电热板(苏州威尔实验用品有限公司)。
1.1.2 实验药物与试剂 披针叶黄华采自宁夏盐池县,洗净、晒干、粉碎后备用。95%乙醇
液,1mol/L 的盐酸溶液,甲醇液、氯仿、氢氧化钠、氨水、冰醋酸、次硝酸铋、碘化钾、
灭菌注射用水(石家庄四药有限公司)。所用试剂和药品均为国产分析纯和 AR 级。
1.1.3 试验动物 ICR 小鼠 100 只,体重 18—24g,雌雄各半,购于宁夏医学院实验动物中
心,实验动物均于室温下自由饮水采食,所喂饲料为全价饲料。
2 方法
2.1 披针叶黄华生物碱的提取 准确称取披针叶黄华干燥粉末 800 克,,以 95%乙醇热提,
提出液减压回收乙醇,剩余物以 1% 盐酸水溶液反复处理至残渣中检测不到生物碱。酸水
液以浓氨水碱化至 pH=9-10,以氯仿萃取至水液中检测不到生物碱,减压回收氯仿后得粗生
物碱。取少量生物碱观察其形状、颜色、水溶性,并用改良碘化铋钾试剂、碘化汞钾试剂等
做显色实验,以判断是否含有生物碱。
[3] [4] [5]
图为披针叶黄华总生物碱提取流程
披针叶黄华干草粉
↓ 甲醇热提次
甲醇液
↓ 减压回收溶剂
浸 膏
↓ 挥发到恒重,称重,1N HCL 溶解过滤
┎────────┓
酸水液 残渣(弃去)

↓氯仿萃取数次
┏────────┓
氯仿层(弃去) 酸水液
↓NaOH 碱化至 pH9-11,氯仿萃取数次
┏──────────┓
碱水液(弃去) 氯仿液
↓减压回收溶剂
总生物碱
通过上述提取流程等到浸膏 185.6g,出膏率为 23.3%,得到总生物碱的量为 15.15g,
出碱率为 1.89%。
2.2 披针叶黄华生物碱水剂的制备 定量称取披针叶黄华总生物碱若干克,分别用适量的灭
菌注射用水溶解,定量称取披针叶黄华总生物碱若干克,分别用适量的灭菌注射用水溶解,
配成适量药液后,过滤至澄清液,调节 PH 为 7 左右,配成适量药液后,高温灭菌备用。
2.3 实验分组 [8] 将小鼠随机分为预实验组和试验组两大组,预试验组为 5 组,每组 4 只,
雌雄各半,按A—E顺序编写组号;正式试验组分为 6 组,每组 10 只,雌雄各半,用字母J
—O表示,其中J组为对照组。
2.4 给药方法 [8] 本试验采用腹腔注射的方法,根据已报道的资料分别对 5 只小鼠给药,如
全死或全不死,以 0.6 位倍数向下,向上翻剂量,再给 5 只,初步摸索出动物的死亡剂量;
再以所的剂量,以 0.9 为倍数,向上向下各翻几个剂量,观察动物死亡情况,以bliss’s法计
算半数致死量。
3.结果与分析
3.1 预试验结果
表 1. 披针叶黄华生物碱对小鼠的毒性预实验结果
组别 动物数(只) 体重(g) 总碱浓度(mg/kg) 死亡数(只) 死亡率(%)
A 4 18.5 300 4 100%
B 4 20.5 250 4 100%
C 4 19.2 200 4 100%
D 4 21.2 100 4 100%
E 4 20.2 90 0 0
由预实验结果可知,小鼠半数致死量范围大致在 90—100mg/kg 之间,从而也为下一步
实验奠定了理论基础。
3.2 试验结果
表 2. 披针叶黄华生物碱对小鼠的毒性实验结果
组别 剂量 对数剂量 动物数 死亡数 死亡率 实验机率 回归机率
(mg/kg) /X (只) (只) (%) 单位(Y) 单位(Y)

J 90 1.9542 10 0 0.00 —— 3.6045
K 92 1.9638 10 3 30.00 4.476 4.2489
L 94 1.9731 10 5 50.00 5.000 4.8795
M 96 1.9823 10 7 70.00 5.524 5.4968
N 98 1.9912 10 9 90.00 6.2817 6.1014
O 100 2.0000 10 9 90.00 6.2817 6.6938
回归方程为:y(probit)=128.34+67.515log(D);半数致死量 LD50=94.387mg/kg
LD50 ( Feiller 校正)95% 的可信限=92.982---95.703mg/kg ; LD5=89.238mg/kg ,
LD95=99.833mg/kg。
3.3 结果观察 小鼠腹腔给药后精神委靡,拱背,蜷缩对外界刺激敏感,四肢共济失调,聚
成一堆,并时有出现间断性兴奋,有的向上跳跃,狂燥不安,全身前后抽搐而后四肢麻痹,
接着浑身抽搐,四处乱跳不久出现精神委顿直沉郁,临死前多呈现跳跃动作。
3.4 分析 通过本实验可以看到披针叶黄华生物碱毒性非常之大,小鼠的中毒症状和死亡时
间往往随着总碱含量的增大而成显著变化,即总碱剂量越大中毒症状越明显死亡时间越短。
实验证明用氯仿萃取部分生物碱含量较高,几乎是高文运 [3] [4] 等报道的 0.77% ( 30kg全草提
取总生物碱 230g)的 2.5 倍。同时在配制生物碱注射液时可以看到,披针叶黄华生物碱毒很
容易溶于水中,并不像报道的那样需用酸溶后再用碱液中和,从而减少了配制的繁琐和误差
的产生。此外,通过对提取物形状、颜色、以及水溶性的观察,并结合改良碘化铋钾试剂、
碘化汞钾试剂等做显色实验,判断得出提取物中主要成分是生物碱类物质,由此可见披针叶
黄华的毒性主要集中在生物碱部分。
参 考 文 献
[1] 达能太,李忠德,赵巧娥,杨志刚等·绵羊披针叶黄华中毒病的研究(·内蒙古·阿拉
善左旗·内部资料·2003:8 月)
[2] 陈翼胜,郑硕等.中国有毒植物[M].北京:科学出版社,1987.
[3] 高文运,李医明,朱大元.牧马豆生物碱成分研究[J].中草药,1998,29(12):796-798.
[4] 高文运,李医明,蒋山好,等.牧马豆生物碱成分研究[J]. 天然产物研究与开
发,1999,11(2):1-4.
[5] 赵宝玉,阮 娜,何生虎,董 强,李 蓉,龚 艳,张永康. 牧马豆中生物碱的提取
分离及鉴定[J]. 动物医学进展,2003,24(4):87-89
[6] 肖崇厚.中药化学[M].上海:上海科技出版社,1997.
[7] 李扬汉主编,中国杂草志,北京:中国农业出版,1998
[8]张均田.现代药理实验方法[M].北京:北京医科大学中国协和医科大学联合出版社,1998,
1412~1415
Analysis of effective constituents from thermopsis lanceolate and Acute toxiciyy
test with mice
Abstract: Thermopsis lanceolate is one of the leguminoseae plants of thermopsis.On the one
hand,thermopsis lanceolate could lead to livestocks poisoned, On the other hand, thermopsis
lanceolate is also a drug plant,which can not only do stimulation breath and radiation

hardening,but also dispelling phlegm and relieving cough. Alkaloid mixtures were isolated
from thermopsis lanceolate with systematic extraction and we have a acute toxicity to
Effective chemical components of thermopsis lanceolate with systematic extraction.The
results show that the LD50 measured by intraperitoneal injection of mice was 94.83mg/ml.
Keywords: Thermopsis lanceolate; Alkaloid mixtures; Acute toxiciyy test
作者:李勇 男 (1980—)宁夏大学农学院 2004 级研究生