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Formação de complexos do TR e TR:RXR com coativador e
a modulação pelos ligantes
Vitorino, M.T. 1 , Fattori, J. 1 , Campos, J. L. O. 1 , Alves, B.S.C. 1 , and Figueira, A.
C. M. 1
Laboratório Nacional de Biociências - Campinas SP Brazil
A regulação da transcrição gênica é controlada por receptores nucleares (RNs) e
é responsável por governar eventos como desenvolvimento, metabolismo e diferenciação,
por exemplo. O receptor de hormônio tiroideano (TR) é um destes RNs,
que controla diversos aspectos do metabolismo basal. Tais receptores atuam como
homo ou heterodímero, sendo modulado pelo ligante cognato T3. Um dos parceiros
do TR na formação do heterodímero é o RXR, um RN considerado promíscuo, por
interagir com vários receptores na formação de heterodímeros. Neste trabalho foi
caracterizado o homodímero de TR e o heterodímero com RXR, na ausência e
presença de cada um dos agonistas, T3 e ácido 9-cis retinóico (RXR), com o objetivo
de descobrir a base molecular da modulação da transcrição pelos ligantes.
Além disso, também foram caracterizados complexos maiores, como homo e heterodímeros,
na presença de uma proteína coativadora, GRIP 1. É importante mencionar
que o coativador utilizado nesta abordagem não foi apenas um peptídeo, tal
como na maioria dos estudos envolvendo RNs e coativadores, mas uma construção
da proteína contendo 250 aminoácidos, abrangendo os três motivos de interação
com RNs (LXXLL). Utilizando anisotropia de fluorescência, SAXS e ensaios celulares
de transativação, foi realizado um estudo sistemático sobre o TR, TR-RXR,
TR-CoA e TR-RXR-CoA na presença de T3 e ácido 9-cis retinóico. A partir dos
resultados obtidos foi possível discutir sobre a formação de homo e heterodímero
e sobre a estequiometria no recrutamento do coativador. Mais ainda, as afinidades
medidas por fluorescência mostraram que a adição do ácido 9-cis retinóico não
interfere na ligaçção a elementos responsivos do DNA, resultado que vai contra a
alguns trabalhos da literatura. Os resultados dos ensaios de transativação celular
foram condizentes com os resultados de anisotropia, indicando que o ácido 9-cis
retinóico não interfere na transativação. Pelos resultados de SAXS observou-se que
o coativador GRIP 1 estabiliza estruturalmente o heterodímero TR-RXR, conforme
visto nas curvas de Kratky. Este estudo traz informação molecular, funcional e estrutural
sobre a formação do complexo entre homo e heterodímero do TR, com
coativador e ligantes e como os ligantes podem modular este processo. Tais resultados
podem contribuir para a melhor compreensão das bases moleculares da
ativação do TR.
Acknowledgements: Os autores agradecem o suporte financeiro da FAPESP.
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