Biological, Serological, and Molecular Characterization of ... - Iresa

More documents

Recommendations

Info

éagissant avec les extraits de plantes saines a permis d’obtenir un réactif très fiable de détection du PMMoV. Une procédure modifiée basée sur l’immunocapture (IC) suivie d’une RT-PCR en une seule étape a été développée pour l’identification du PMMoV et la différentiation des pathotypes en analysant les fragments obtenus après RFLP. Cette procédure, fiable, rapide et facile à mettre en pratique pour le diagnostic, pourrait être d’une grande utilité pour les études épidémiologiques futures. La nouvelle présence en Tunisie du pathotype 1-2 du PMMoV devra obligatoirement être prise en compte par les sélectionneurs et se traduire par une réorientation de leur programme d’amélioration du piment pour la résistance aux maladies virales. Mots clefs: Piment, PMMoV, Tobamovirus, pathotype, résistance, anticorps, IC-RT-PCR, RFLP ملخص مناري-حطاب،‏ منية وآريم الزائر.‏ التشخيص البيولوجي والسر ولوجي وعبر البيولوجيا الجزئية التبقع المرمري الخفيف للفلفل (PMMoV) في تونس.‏ لفيروس .Tunisian Journal of Plant Protection 1: 1-12 .2006 تعتبر السلالات العادية لفيروس تبرقش الدخان (TMV) السبب الرئيسي للأمراض الفيروسية للفلفل (.L annuum الأآثر تواجدا في البيوت المحمية في تونس.‏ أنتج الهجين J27 الحامل لجين المقاومة الفيروسية للسلالات العادية لفيروس TMV خلال برنامج وطني لتحسين الفلفل بتونس ووقع إآثاره طيلة سنوات عديدة.‏ آما لوحظت أعراض موت موضعي حاد على ثمار الفلفل و تبرقش على الأوراق.‏ فوقع التوصل إلى عزل وتشخيص سلالتين من فيروس التبقع المرمري الخفيف للفلفل (PMMoV) وذلك بطريقة تفاعل الأمصال سميتا ELISA باستعمال مجموعة تجارية للأجسام المضادة خاصة بتشخيص هذا الفيروس.‏ اظهر التشخيص الببيولوجي المعتمد على تفاعل النمط المرضي مع النمط الوراثي،‏ أن السلالات التونسية تنتمي إلى صنف ،PMMoV حيث تصيب الفلفل الحامل لجينات مقاومة ولا تصيب الفلفل الحامل لجينات آما أنها لا تصيب نوع الطماطم.‏ وقع تحضير مصلا مضادا باستعمال سلالة وباعتماد طريقة ،ELISA تبين أن الأجسام المضادة لهذه السلالة تكشف على المادة الوراثية المماثلة على سلالة Teb24-00 وعلى المادات الوراثية للسلالات المرجعية لفيروس .PMMoV ومكًّن استبعاد الأجسام المضادة المتفاعلة مع مستخرجات النباتات السليمة من الحصول على مستحضر صالح لتشخيص فيروس .PMMoV ووقع استعمال طريقة بيولوجيا جزيئية محورة تعتمد على طريقة الحبس المناعي (IC) تليها طريقة RT-PCR في مرحلة واحدة لتشخيص فيروس PMMoV والتفريق بين الأنماط المرضية بتحليل الشظايا المتحصل عليها بعد استعمال طريقة .RFLP ويمكن أن تكون هذه الطريقة الدقيقة والسريعة والسهلة الاستعمال في التشخيص مفيدة جدا في الدراسة الوبائية لهذا الفيروس مستقبلا.‏ وتجدر الإشارة إلى وجوب الأخذ بعين الاعتبار لدى محسّني النبات بتونس،‏ تواجد هذا النمط المرضي لفيروس PMMoV(1,2) حتى يقع إعادة توجيه برامجهم البحثية في مجال التحسين الوراثي للفلفل في مقاومة الأمراض الفيروسية.‏ (Capsicum L 1 (1,2) لفيروس و L 4 L 3 .Sah11-00 و L 2 L 1 و Teb24-00 Sah11-00 آلمات مفاتيح:‏ فلفل،‏ ،PMMoV توباموفيروس،‏ نمط ممرض،‏ مقاومة،‏ أجسام مضادة،‏ RFLP ،IC-RT-PCR LITTERATURE CITED 1. Alonso, E., Garcia-Luque, I., Avila-Rincon, M.J., Wicke, B., Serra, M.T., and Diaz-Ruiz J.R. 1989. A Tobamovirus causing heavy losses in protected pepper crops in Spain. Journal of Phytopathology 125: 67-76. 2. Ben M’hadeb, M., Mnari-Hattab, M., Gharbi, J., & Aouni, M. 2002. Détection du virus de la mosaïque du concombre par symptomatologie, par sérologie et par RT-PCR dans le Sahel tunisien. Page 88. Recueil des 2ème Journées de l’Association Tunisienne de Biotechnologie. 20- 23 Décembre 2002. Hammamet, Tunisie. 3. Bos, L. 1969. Experience with a collection of plant viruses in leaf materiel dried and stored over calcium chloride and a discussion of literature on virus preservation. Meded Fac Landbouw Wet Rijksuniv Gent 34: 875-887. 4. Boukema, I.W. 1980. Allelism of genes controlling resistance to TMV in Capsicum. Euphytica 29: 433-439. 5. Bousalem, S., Dallot, S., and Guyader, S. 2000. The use of phylogenetic data to develop molecular tools for the detection and genotyping of Yam mosaic virus. Potential application in molecular epidemiology. Journal of Virological Methods 90: 25–36. 6. Celix, A., Lopez, A.S., Almarza, N., Guillamon, Ma., and Cerezo, E.R. 1996. Characterisation of cucurbit yellow stunting disorder virus, a Bemisia tabaci transmitted Closterovirus. Phytopathology 86: 1370-1376. Tunisian Journal of Plant Protection 10 Vol. 1, No. 1, 2006
7. Choi, S.K., Choi, J.K., Park, W.M., and Ryu, H.K. 1999. RT-PCR detection and identification of three species of cucumoviruses with a genus specific single pair of primers. Journal of Virological Methods 83: 67-73. 8. Clark, M.F. and Adams, A.N. 1977. Characteristics of the microplate method of enzyme linked immunosorbent assay for the detection of plant viruses. Journal of General Virology 34: 475-483 9. Colinet, D., Kummert, J., Lepoivre, P., and Semal, J. 1994. Identification of distinct Potyviruses in mixedly infected sweet potato by the polymerase chain reaction with degenerate primers. Phytopathology 84: 65-69. 10. Dijkstra, J. and de-Jager, C. P. 1998. Practical plant virology: protocols and exercises. Springer- Verlag, Heidelberg, New York, USA, 459 pp. 11. Gebre-Selassié, K. and Marchoux, G. 1991. Identification and characterization of Tobamovirus strains infecting L resistant genotypes of peppers in France. Journal of Phytopathology 131: 275-289. 12. Gebre-Selassié, K., Dumas, de Vaulx, Marchoux, G., & Pochard, E. 1981. Le virus de la mosaïque du tabac chez le piment. I Apparition en France du pathotype P1-2. Agronomie 1: 853- 858. 13. Gibbs, A. and Mackenzie, A. 1997. A primer pair for amplifying part of the genome of all potyvirids by RT-PCR. Journal of Virological Methods 63: 9–16. 14. Hamza, N., Mnari-Hattab, M., and Ezzaier, K. 1998. Breeding pepper cultivars for multivirus resistance in Tunisia. Pages 88. In Proceedings of the X th EUCARPIA Meeting on Genetics and Breeding of Capsicum and Eggplant, September 7- 11, 1998, Avignon, France. 15. Jacobi, V., Bachand, G.D., Hamelin, R.C., and Castello, J.D. 1998. Development of a multiplex immunocapture RT-PCR assay for detection and differentiation of tomato and tobacco mosaic Tobamoviruses. Journal of Virological Methods 74: 167-178. 16. Jammeli, A. 1986. Le virus de la mosaïque du tabac (V.M.T) dans les cultures de piment abritées en Tunisie: Ecologie et détermination des souches. Mémoire de fin d’études de troisième cycle de l’INAT, Tunisie, 99 pp. 17. Kalman, D., Palkovics, L., and Gaborjanyi, R. 2001. Characteristics of a Hungarian Pepper mild mottle tobamovirus (PMMoV) isolate. Pages 252- 255. Proceedings of the XI th EUCARPIA Meeting on Genetics and breeding of Capsicum and Eggplant, April 9-13, 2001, Antalya Turkey 18. Letschert, B., Adam, G., Lesemann, D.-E., Willingmann, P., and Heinze, C. 2002. Detection and differentiation of serologically cross-reacting Tobamoviruses of economical importance by RT- PCR and RT-PCR-RFLP. Journal of Virological Methods 106: 1-10. 19. Lommel, S., M.C., Cain, A.H., and Morris, T.J. 1982. Evaluation of indirect enzyme linked immunosorbent assay for the detection of plant virus. Phytopathology 72: 1018-1022 20. Mansilla, C., Sanchez, F., and Ponz, F. 2003. The diagnosis of the tomato variant of pepino mosaic virus: an IC-RT-PCR approach. European Journal of Plant Patholology 109: 139-146. 21. Messiaen, C.M. & Maison, P. 1964. Sensibilité ou hypersensibilité au virus de la mosaïque du tabac, suivant les souches de virus, les espèces ou les variétés de plantes-hôtes et les conditions d’expériences. Compte Rendus de l’Académie d’agriculture de France tome L n° 18: 1196-1203. 22. Mnari-Hattab, M., Ezzaier, K., Gebre-Selassie, K., Marchoux, G., and Gognalon, P. 1999. Surveys of viruses affecting pepper (Capsicum annuum L.) in Tunisia. Pages 143-144. Proceedings of the 7 th International plant virus epidemiology symposium on Plant virus epidemiology: Current status and future prospects. April 11-17, 1999, Almeria, Spain. 23. Robertson, N.L., French, R., and Gray, S.M. 1991. Use of group-specific primers and the polymerase chain reaction for the detection and identification of luteoviruses. Journal of General Virology 72: 1473–1477. 24. Sagi, Z. S. and Salamon, P. 1998. Breeding white sweet pepper hybrids armed with the tobamovirus resistant allele L 4 . Page 173. Proceedings of the X th EUCARPIA Meeting on Genetics and Breeding of Capsicum and Eggplant. September 7- 11, 1998, Avignon, France. 25. Sefc, K.M., Leonhardt, W., and Steinkellner, H. 2000. Partial sequence identification of grapevine-leafroll-associated virus-1 and development of a highly sensitive IC-RT-PCR detection method. Journal of Virological Methods 86:101–106. 26. Tenllado, F., Garcia-Luque, I., Serra, M.T. and Diaz Ruiz, J.R. 1994. Rapid detection and differentiation of Tobamoviruses infecting L- resistant genotypes of pepper by RT-PCR and restriction analysis. Journal of Virological Methods 47: 165-174. 27. Tobias, I., Rast, A.T.B., and Maat, D.Z. 1982. Tobamoviruses of pepper, eggplant and tobacco: comparative host reactions and serological relationships. Netherlands Journal of Plant Pathology 88: 257-268 28. Velasco, L., Janssen, D., Ruiz-Garcia, L., Segundo, E., and Cuadrado, I.-M., 2002. The complete nucleotide sequence and development of a differential detection assay for a pepper mild mottle virus (PMMoV) isolate that overcomes L 3 resistance in pepper. Journal of Virological Tunisian Journal of Plant Protection 11 Vol. 1, No. 1, 2006
Page 1 and 2: Biological, Serological, and Molecu
Page 3 and 4: pepper J27 F1 hybrid and propagated
Page 5 and 6: A b s o r b a n c e a t 4 0 5 n m R
Page 7 and 8: 1 2 3 4 5 800 pb 570 bp 260 bp Fig.
Page 9: PMMoV(1-2) into the pathotype (1-2)

Biological, Serological, and Molecular Characterization of ... - Iresa

You also want an ePaper? Increase the reach of your titles

Delete template?

Save as template?