Info - Leica Biosystems
Info - Leica Biosystems
Info - Leica Biosystems
Create successful ePaper yourself
Turn your PDF publications into a flip-book with our unique Google optimized e-Paper software.
Immunhistokemisk metodologi för användning av Novocastra TM<br />
antikroppar på fryst muskelvävnad.<br />
Reagens som krävs men ej tillhandahålls<br />
1. Standardlösningar som används inom immunhistokemi.<br />
2. 50 mM Trisbuffrad saltlösning (TBS) pH 7,6.<br />
3. Antikroppsutspädningsmedel – normalt serum optimalt spätt i TBS .<br />
4. Normala sera från de arter i vilka den sekundära antikroppen odlas.<br />
5. Sekundär peroxidaskonjugerad antikropp – använd enligt tillverkarens rekommendationer.<br />
6. 3,3’ Diaminobenzidin tetrahydroklorid (DAB) – bered och använd enligt tillverkarens rekommendationer.<br />
7. Monteringsmedel – bered enligt tillverkarens rekommendationer.<br />
Utrustning som krävs men ej tillhandahålls<br />
1 .Inkubator inställd på 25 o C.<br />
2. Allmän immunhistokemisk laboratorieutrustning.<br />
3. Elektrisk fläkt för lufttorkning av objektglas.<br />
Antigenåtervinningslösningar (se Rekommendationer vid användning)<br />
Gäller ej frysta snitt.<br />
Metodologi<br />
Innan denna metodologi tillämpas måste användare utbildas i immunhistokemiska tekniker. Användare bör fastställa optimal spädning<br />
för antikroppar. Alla steg utförs om inget annat anges vid rumstemperatur på 25 o C .<br />
1. Skär och montera 4–10 μm snitt på objektglas täckta med ett lämpligt vävnadsklister och lufttorka i minst en timme.<br />
2. Inkubera snitten med optimalt spädd primär antikropp (se Rekommendationer vid användning).<br />
3. Tvätta snitten i TBS-buffert i 2 x 5 minuter och gunga försiktigt.<br />
4. Inkubera snitten i lämplig peroxidaskonjugerad sekundär antikropp.<br />
5. Tvätta snitten i TBS-buffert i 2 x 5 minuter och gunga försiktigt.<br />
6. Inkubera objektglasen i DAB.<br />
7. Skölj objektglasen i rent vatten.<br />
8. Dehydratisera, klargör och montera snitten.<br />
Rättelser av tidigare utgivning<br />
Gäller ej.<br />
Utgivningsdatum<br />
5 februari 2004 (CEprotocol/Frozen Muscle).<br />
NCL-b-DG<br />
Page 29