CIENCIA - Consejo Superior de Investigaciones Científicas

Dischc (li); iodo siálico, por la reacción de Ehrlich modificada
por Werner y Odin (7) y mciil peniosas, por el
méiodo de Dische y Míenles (8).
Pruebas inmunoligiras.—Las fracciones l'W, PL y S\V,
SL fueron sometidas a inmunoelectroforesis simultánea
(9, 10) empleando en los análisis sueros precipitantes de
conejo antihumano normal, ami albúmina y anli-gamaglobulina;
estos últimos conteniendo entre 0.50 y 1,25 mg
de N del anticuerpo/inl de suero inmune.
Frnrrioiinmiriilo eromalogrifico en F.cleola-relu\osa.—
Los experimentos se realizaron en columnas de 15 cni de
altura por 1,8 cm de diámetro, empleando como sistema
eluyenle un gradiente de acetato de sodio 0,01 M, pH 0,0
y cloruro de sodio I M, pH Sj. Las demás condiciones
han sido publicadas en estudios previos (1).
Las cantidades a cromatografiar se estandarizaron de
acuerdo con la sustancia predominante en cada fracción;
con este criterio se tomaron 15 mg de polipeptidos en
el caso de los precipitados y 5 mg de azúcares neutros
en el de los sobrenadantes. II trazado de las curvas se
hizo determinando la concentración de las sustancias referidas
en las fracciones parciales de 5 mi; por otra
parte la lectura especlrofotométrica de las miso.as a
280 mu permitió dibujar las curvas de absorción respectivas.
En la Tabla 1 aparecen los resultados del análisis
químico de las fracciones de Winzler y Lcvine.
RESULT/ÜMM Y DISCUSIÓN
El procedimiento de precipitación (saltingout)
aplicado al estudio de tres muestras normales
estandarizadas, ha permitido separar la proteosa
urinaria en dos fracciones «le composición
química y cromatográfica relativamente constante.
C 1 F. X C. I A
El análisis químico tle los precipitados dio
para los polipeptidos un valor promedio que es
aproximadamente 3,3 veces superior al de los
sobrenadantes (Ver Tabla I). En cambio los
hidratos de carbono, con excepción del ácido siálico,
mostraron tasas inferiores. Estas características
de los precipitados los señalan como jjertenecientes
al grupo de las glicoproteínas o glicopéptidos,
hecho que se vio afianzado por los ensayos
inmunológicos que mostraron para esta
fracción nítida precipitación de las alfa globulinas.
Fue sorprendente el hecho tle encontrar cantidades
apreciables «le ácido urónico en la porción
precipitada. Se pensó que ]>odría provenir
de algún producto de asociación entre polipeptidos
básicos y MPSA.
Cromatográficamente los precipitados (Fig.
Irt y 16) mostraron un diagrama de elución con
5 ó 6 componentes valorados ¡jor la reacción de
Folin. El trazado de las curvas por el método de
la antrona dio máximos coincidentes con los
componentes mencionados. No así con aquéllos
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observados por absorción a 280 mu que presentaron
tina heterogeneidad mayor debida a los
pigmentos urinarios.
El primer componente de los precipitados
al igual que su correspondiente en los sobrenadantes
ha presentado eventualmente características
inmunológicas tle gama globulina hecho
que unido a su baja movilidad electroforética
nos permite relacionarlo con la gama globulina
Fig. I.-Placa de agar para experimentos en duplicado
de inmiinoelciiroforesis simultánea (ÍES) adaptada al sistema
de reacción gama-anli-gama-glohulina.
descrita por Berggard (11) en los producías urinarios
no dializablcs, cuyo peso molecular fluctuaría
entre 10 000 y 15 000. Recientemente (x>rnillot
y col. (12) encontraron una gama globulina
urinaria de constante de sedimentación 2,2
S que es rica en glúcidos, y tiene un bajo poder
antigénico. Por desgracia existe en pequeña cantidad,
lo que ha limitado otras comprobaciones.
Los materiales que se eluyen con molaridades
entre 0,025 y 0,6 están relacionados inmunológicamente
con las alfaglobulinas; se encontró
por lo menos dos tipos de alfa- y un tipo de
beta- globulina. Constituyen el material peptídico
más abundante de los precipitados, destacando
por su alto contenido de ácido siálico,
característica común a las glicoproteínas.
La resolución en esta zona no es muy completa
debido a la similitud de sus propiedades
físico-químicas, factor que también se refleja en
la deficiente separación electroforética.
Finalmente, bajando el pH, se eluye el último
componente de los precipitados que parece
ser un produelo de asociación con muco|x>lisacáridos
ácidos. La posición en el cromatograma
y la baja movilidad electroforética en agar sugieren
que este mucopolisacárido es árido hia-
I urónico,