Infomusa 11-1 (ESP) - EcoNegocios Agrícolas

vitro y por lo tanto al incorporar a los programas
productivos nuevas variedades o clones
híbridos se requiere de modificaciones
en la tecnología de micropropagación de
este género. Banerjee et al. (1986) (citados
por Afza et al. 1996) encontraron diferencias
considerables entre la formación de brotes
en diferentes clones, hecho que parece estar
correlacionado con la presencia de uno o dos
genomas B.
La propagación in vitro del cultivar
híbrido FHIA-20 (AAAB) se reveló difícil. Se
observó una conversión en plantas de los
ápices durante la fase de iniciación así como
brotes con crecimiento en forma de rosetas
y con la presencia de estructuras bulbosas
de color blanco en la fase de multiplicación,
lo que constituyó un aspecto negativo en el
incremento del coeficiente de multiplicación.
Partiendo de esta problemática y
teniendo en cuenta la necesidad de propagar
con eficiencia el cultivar FHIA-20
durante el proceso de propagación in vitro,
se hizo necesaria la búsqueda de alternativas
para el manejo de los ápices en la fase de
iniciación y de los brotes axilares (explantes)
en la fase de multiplicación.
Materiales y métodos
Para el estudio se seleccionaron plantas
jóvenes que se encontraban creciendo en
invernaderos con una altura promedio de
25.6 cm (Figura 1). Los procedimientos utilizados
para la introducción al laboratorio del
material vegetal, donde se incluye manipulación
de las plantas, desinfección de los cormos,
medios de cultivos de iniciación y
de multiplicación, así como las condiciones
de cultivo, fueron los establecidos por
Orellana (1994).
Las condiciones generales para el crecimiento
de los cultivos se efectuaron a una
temperatura de 27 ± 2ºC en cámaras de luz
natural. En todos los casos, los ápices y los
brotes se colocaron en los medios de cultivo
con la base hacia abajo.
Influencia del tamaño de los ápices
y el estado físico del medio de cultivo
en la fase de iniciación
El estudio se realizó con la finalidad de establecer
las condiciones de manejo y crecimiento
de los ápices en la fase de iniciación.
Para ello, se estudiaron los siguientes tratamientos
(Figura 2):
1. Ápices de 0.5 cm 2 cultivados en medio
líquido (testigo).
2. Ápices de 0.5 cm 2 cultivados en medio
semi-sólido.
3. Ápices de 1.0 cm 2 seccionado a la mitad y
cultivados en medio líquido.
4. Ápices de 1.0 cm 2 seccionado a la mitad y
cultivados en medio semi-sólido.
A los 20 días de iniciado el cultivo las variables
evaluadas fueron:
• Porcentaje de regeneración de los ápices.
• Porcentaje de contaminación de los
ápices.
• Porcentaje de mortalidad de los ápices.
• Número de brotes por ápice.
Se establecieron 20 repeticiones por tratamiento
y el procedimiento estadístico utilizado
para el análisis de los datos en porcentajes
fue la comparación de proporciones
ANDEVAP. El análisis de la variable “número
de brotes por ápices” se efectuó a través
de un análisis de varianza simple y la comparación
de las medias se realizó por Tukey
a 0.05%.
Se utilizaron tubos de ensayo de
14.5 x 2.0 cm con 10 ml de medio de cultivo.
Para los medios de cultivo en estado líquido
se utilizó un soporte de papel de filtro en
forma de puente donde se colocaron los
ápices. En el caso de los medios semi-sólidos
se adicionaron 2 mg.L -1 del gelificante
Gellan gum (Spectrum ®).
Las plantas obtenidas en la fase de iniciación
fueron transferidas a medios de cultivo
de multiplicación, para lo cual se individualizaron
y decapitaron. Se observó que el crecimiento
de los brotes en esta fase se presentaba
en forma de pequeñas rosetas y con
la presencia de estructuras bulbosas de
color blanco. Este comportamiento de los
brotes de FHIA-20 en la fase de multiplicación
trajo como consecuencia la reducción
de los coeficientes de multiplicación (brotes
obtenidos/brotes iniciales).
Efecto de las dosis de
6-bencilaminopurina y el tipo
de manejo sobre el crecimiento de
los brotes en la fase de multiplicación
Con el objetivo de solucionar la problemática
presentada en el crecimiento de los brotes
durante la fase de multiplicación se
estudió la dosis de 2 mg.L -1 de 6-bencilaminopurina
(BAP), usando como control la
dosis de 4 mg.L -1 propuesta por Orellana
(1994), ambas dosis complementadas con
dos tipos de manejo de brotes.
Manejo 1. Los brotes son individualizados,
decapitados a una altura de 0.5 cm y seccionados
a la mitad.
Manejo 2. Los brotes menores de 1 cm
se dejaran en grupos de dos ó unidos a la
planta madre cuando sea el caso y no se efectuará
el decapitado. Mientras que brotes
mayores de 1 cm serán individualizados,
decapitados a esta altura y seccionados a la
mitad cuando el pseudotallo está formado
por más de tres hojas.
De esta forma quedan conformado cuatro
tratamientos:
1. Medios de cultivo de multiplicación con
4 mg.L -1 y el manejo 1 de los brotes
(testigo).
2. Medios de cultivo de multiplicación con
4 mg.L -1 y el manejo 2 de los brotes.
3. Medios de cultivo de multiplicación con
2 mg.L -1 y el manejo 1 de los brotes.
4. Medios de cultivo de multiplicación con
2 mg.L -1 y el manejo 2 de los brotes.
Las variables evaluadas fueron el número
de brotes por explante inicial y el porcentaje
de brotes con crecimiento en rosetas. Las
evaluaciones se realizaron después de tres
subcultivos cada 21 días, donde las condiciones
de cultivo se desarrollaron en cámaras
de cultivo de luz natural a una temperatura
de 27 ± 2ºC.
Se inocularon cinco explantes por frascos
de 250 ml de capacidad, que contenían 30 ml
de medio de cultivo semi-sólido (2 mg.L -1 de
Gellan gum (Spectrum ®) y se establecieron
10 repeticiones por tratamiento. Los
datos se procesaron a través de un análisis
de varianza multifactorial y la comparación
de las medias se efectuó por Tukey. Los
datos en porcentajes se analizaron de forma
similar al experimento anterior.
Resultados y discusión
Influencia del tamaño de los ápices
y el estado físico del medio de cultivo
en la fase de iniciación
La utilización en la fase de iniciación de
ápices de 1 cm 2 , seccionados a la mitad y
colocados en medio de cultivo semi-sólido,
proporcionó un 85% de regeneración a los
20 días de iniciado el cultivo in vitro. Se
observó en cada una de las secciones de ápices
la presencia de brotes axilares, los cuales
garantizaron mayor número de explantes
a la fase de multiplicación, con diferencias
estadísticamente significativas con respecto
a los restantes tratamientos (Tabla 1).
La técnica de decapitar el domo apical es
necesaria para la inducción de nuevos brotes
a partir de yemas axilares que normalmente
están suprimidas por la dominancia
apical (Ma y Shi (1972) y Swamy et al.
(1983) (citados por Afza et al. 1996)). Pérez
et al. (1998) señalan la importancia del
incremento del coeficiente de multiplicación
durante la propagación in vitro de plátanos
debido a que, por cada unidad de
aumento en este indicador, disminuyen los
costos aproximadamente en un 10%.
En el estudio solamente se observó mortalidad
en los ápices seccionados y cultivados
en medio de cultivo líquido, lo cual pudo
estar dado porque el corte efectuado a los
ápices proporcionó secciones muy pequeñas
para ser cultivadas en medios líquidos
(Tabla 1). Según Orellana (1998) existen
diferencias en el crecimiento de los tejidos
en dependencia del estado físico del
medio de cultivo; el manejo no es el mismo
cuando se utilizan medios de cultivo sólidos
y líquidos.
La incidencia de contaminantes en esta
fase no mostró diferencias significativas en
36 INFOMUSA — Vol 11, N° 1