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Filtros para centrífuga Amicon® Ultra-4 - Millipore

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Guía del usuario<br />

<strong>Filtros</strong> <strong>para</strong> <strong>centrífuga</strong><br />

<strong>Amicon®</strong> <strong>Ultra</strong>-4<br />

<strong>para</strong> volúmenes máximos de 4 ml<br />

Unidad Amicron® <strong>Ultra</strong>-4 10K <strong>para</strong> diagnóstico in vitro<br />

Los filtros <strong>Amicon®</strong> <strong>Ultra</strong>-4 3K, 30K, 50K y 100K<br />

son sólo <strong>para</strong> investigación, no pueden utilizarse<br />

<strong>para</strong> procedimientos diagnósticos.<br />

Español<br />

Introducción<br />

Los filtros <strong>para</strong> <strong>centrífuga</strong> <strong>Amicon®</strong> <strong>Ultra</strong>-4 proporcionan ultrafiltración rápida con capacidad <strong>para</strong><br />

elevados factores de concentración y fácil recuperación del concentrado a partir de matrices de muestras<br />

diluidas y complejas. El diseño vertical y el área de superficie disponible de la membrana proporcionan un<br />

rápido procesamiento, una gran recuperación de la muestra (normalmente superior al 90% de la disolución<br />

de partida) y capacidad de concentración por 80. El tiempo de procesamiento habitual es de 10 a 40<br />

minutos dependiendo del límite de peso molecular nominal (NMWL). El diseño vertical reduce al mínimo la<br />

polarización del soluto y el plegamiento posterior de la membrana; por otro lado, un bloqueo automático<br />

físico del filtro impide la centrifugación hasta sequedad y la posible pérdida de muestra. El concentrado<br />

se recoge del depósito <strong>para</strong> la muestra del filtro utilizando una pipeta, mientras que el ultrafiltrado se<br />

recoge en el tubo de <strong>centrífuga</strong> suministrado. El dispositivo puede centrifugarse en un rotor oscilante (<strong>para</strong><br />

rendimiento óptimo) o en un rotor de ángulo fijo. Los filtros <strong>Amicon®</strong> <strong>Ultra</strong>-4 se suministran estériles y son<br />

<strong>para</strong> un solo uso.<br />

La línea de productos <strong>Amicon®</strong> <strong>Ultra</strong>-4 abarca cinco valores de corte diferentes (límite de peso molecular<br />

nominal, NMWL, o peso molecular de corte, MWCO):<br />

● Filtro <strong>Amicon®</strong> <strong>Ultra</strong> 3K — NMWL de 3.000<br />

● Filtro <strong>Amicon®</strong> <strong>Ultra</strong> 10K — NMWL de 10.000<br />

● Filtro <strong>Amicon®</strong> <strong>Ultra</strong> 30K — NMWL de 30.000<br />

● Filtro <strong>Amicon®</strong> <strong>Ultra</strong> 50K — NMWL de 50.000<br />

● Filtro <strong>Amicon®</strong> <strong>Ultra</strong> 100K — NMWL de 100.000<br />

Los filtros <strong>Amicon®</strong> <strong>Ultra</strong>-4 10K están pensados <strong>para</strong> diagnóstico in vitro y pueden utilizarse<br />

<strong>para</strong> concentrar suero, orina, líquido cefalorraquídeo y otros líquidos corporales antes del<br />

análisis.<br />

Los filtros <strong>Amicon®</strong> <strong>Ultra</strong>-4 3K, 30K, 50K y 100K son sólo <strong>para</strong> investigación y no pueden utilizarse <strong>para</strong><br />

procedimientos diagnósticos.<br />

<strong>Filtros</strong> <strong>para</strong> <strong>centrífuga</strong> <strong>Amicon®</strong> <strong>Ultra</strong>-4<br />

1


Aplicaciones<br />

● Concentración de muestras biológicas que contengan antígenos, anticuerpos, enzimas, ácidos<br />

nucleicos (muestras de ADN o ARN monocatenarios o bicatenarios), microorganismos, eluidos de la<br />

columna y muestras purificadas<br />

● Purificación de componentes macromoleculares encontrados en extractos de cultivos tisulares y<br />

lisados celulares, eliminación de cebadores, conectores o etiquetas moleculares de una mezcla de<br />

reacción, y retirada de proteínas antes de la HPLC<br />

● Desalinización, cambio de tampones o diafiltración<br />

Materiales suministrados<br />

La unidad <strong>Amicon®</strong> <strong>Ultra</strong>-4 se suministra con un tapón, un filtro y un tubo de <strong>centrífuga</strong>.<br />

30,000<br />

MWCO<br />

ul<br />

500<br />

250<br />

100<br />

50<br />

4<br />

3<br />

2<br />

Tapa<br />

Filtro<br />

Equipo necesario<br />

Tubo de <strong>centrífuga</strong><br />

● Centrífuga con rotor oscilante (preferida) o rotor de ángulo fijo con pocillos/portadores donde quepan<br />

tubos de fondo cónico de 15 ml de 17 mm x 124 mm<br />

AVISO: Para evitar que se rompa la unidad durante la centrifugación, debe comprobarse ausencia de<br />

bloqueo antes de empezar a centrifugar.<br />

● Pipeta con puntas de 200 microlitros (μl) <strong>para</strong> recuperación del concentrado<br />

Idoneidad<br />

Se sugiere realizar estudios preliminares de recuperación y de retención con el fin de asegurar la idoneidad<br />

<strong>para</strong> el uso previsto. Ver la sección "Cómo cuantificar las recuperaciones".<br />

Conservación y periodo de validez de la unidad<br />

Conservar a 15–30 °C. El periodo de validez es de 3 años a partir de la fecha de fabricación. Para los números<br />

de catálogo UFC801008, UFC801024 y UFC801096, consulte la fecha de caducidad de la etiqueta del<br />

envase.<br />

2 <strong>Filtros</strong> <strong>para</strong> <strong>centrífuga</strong> <strong>Amicon®</strong> <strong>Ultra</strong>-4


Preenjuague<br />

Las membranas de ultrafiltración de las unidades <strong>Amicon®</strong> <strong>Ultra</strong>-4 contienen restos de glicerina. Si este<br />

material interfiere en el análisis, enjuague previamente el filtro con tampón o agua Milli-Q®. Si sigue<br />

habiendo interferencia, enjuague con NaOH 0,1 N seguido de un segundo centrifugado de tampón o agua<br />

Milli-Q®.<br />

AVISO: No permita que la membrana de los filtros <strong>Amicon®</strong> <strong>Ultra</strong> se seque después de haberse humedecido.<br />

Si no va a utilizar la unidad inmediatamente después del enjuagado previo, deje líquido en la<br />

membrana hasta que se utilice.<br />

Cómo utilizar los filtros <strong>para</strong> <strong>centrífuga</strong> <strong>Amicon®</strong> <strong>Ultra</strong>-4<br />

1. Coloque hasta 4 ml de muestra (3,5 ml si se está utilizando un rotor de ángulo fijo de 23°) en el filtro<br />

<strong>Amicon®</strong> <strong>Ultra</strong>.<br />

2. Coloque el filtro tapado en el rotor de la <strong>centrífuga</strong> (preferiblemente oscilante); equilibre con un<br />

dispositivo similar.<br />

3. Si utiliza un rotor oscilante, centrifugue la unidad a un máximo de 4.000 × g durante unos<br />

10-40 minutos.<br />

Si utiliza un rotor de ángulo fijo, oriente el filtro con el panel donde está la membrana mirando<br />

hacia arriba.<br />

Para los filtros <strong>Amicon®</strong> <strong>Ultra</strong> 3K, 10K, 30K y 50K, centrifugue a un máximo de 7.500 × g durante unos<br />

10–40 minutos.<br />

Para los filtros <strong>Amicon®</strong> <strong>Ultra</strong> 100K, centrifugue a un máximo de 5.000 × g durante unos<br />

10–20 minutos.<br />

NOTA: En las Figuras 1 y 2, y las Tablas 2 y 3 encontrará los tiempos de centrifugación habituales.<br />

4. Para recuperar el soluto concentrado, introduzca una pipeta en el fondo del filtro y retire la muestra<br />

utilizando un movimiento de barrido de un lado al otro <strong>para</strong> asegurar la recuperación total. El<br />

ultrafiltrado puede conservarse en el tubo de <strong>centrífuga</strong>.<br />

NOTA: Para una recuperación óptima, retire la muestra concentrada inmediatamente después de la<br />

centrifugación.<br />

Desalación o diafiltración<br />

La desalación, el cambio de tampón o la diafiltración son métodos importantes <strong>para</strong> retirar las sales o los<br />

disolventes de las disoluciones que contienen biomoléculas. En el filtro <strong>Amicon®</strong> <strong>Ultra</strong>-4 pueden eliminarse<br />

las sales o cambiar los tampones concentrando la muestra y reconstituyendo luego el concentrado hasta<br />

el volumen de muestra original con cualquier disolvente deseado. El proceso de "lavado" puede repetirse<br />

hasta que se haya reducido de manera suficiente la concentración del microsoluto contaminante. Vea el<br />

siguiente ejemplo.<br />

30,000<br />

MWCO<br />

4<br />

3<br />

2<br />

ul<br />

500<br />

250<br />

100<br />

50<br />

4 ml de<br />

1 mg/ml de<br />

proteína en<br />

NaCl 100 mM<br />

Centrifugar<br />

hasta<br />

concentrado<br />

30,000<br />

MWCO<br />

<strong>Filtros</strong> <strong>para</strong> <strong>centrífuga</strong> <strong>Amicon®</strong> <strong>Ultra</strong>-4<br />

ul<br />

500<br />

250<br />

100<br />

50<br />

4<br />

3<br />

2<br />

50 μl de<br />

80 mg/ml de<br />

proteína en<br />

NaCl 100 mM<br />

NaCl<br />

100 mM<br />

Añadir 3,95 ml<br />

de NaCl 10 mM o<br />

cambiar el tampón<br />

30,000<br />

MWCO<br />

4<br />

3<br />

2<br />

ul<br />

500<br />

250<br />

100<br />

50<br />

4 ml de 1 mg/ml<br />

de proteína en<br />

NaCl 11,1 mM<br />

Centrifugar<br />

hasta<br />

concentrado<br />

30,000<br />

MWCO<br />

ul<br />

500<br />

250<br />

100<br />

50<br />

4<br />

3<br />

2<br />

50 μl de<br />

80 mg/ml de<br />

proteína en<br />

NaCl 11,1 mM<br />

NaCl<br />

11,1 mM<br />

3


Rendimiento - Concentración del ADN<br />

Merck <strong>Millipore</strong> Ltd. ha determinado que el dispositivo <strong>Amicon®</strong> <strong>Ultra</strong>-4 30K proporciona el mejor<br />

equilibrio entre la recuperación y el tiempo de centrifugado <strong>para</strong> el ADN bicatenario con un contenido de<br />

pares de bases comprendido entre 137 y 1.159.<br />

Tabla 1. Recuperación típica de nucleóticos del dispositivo <strong>Amicon®</strong> <strong>Ultra</strong>-4 30K<br />

Cantidad de pares de Tiempo de centrifugado Volumen del<br />

base del ADN bicatenario (minutos)<br />

concentrado (µl) Recuperación (%)<br />

137–1.159 10 50–70 > 85<br />

Condiciones de centrifugación: Rotor de ángulo fijo, 5.000 x g, temperatura ambiente, volumen de partida de 2 ml.<br />

Rendimiento - Concentración de proteínas<br />

Caudal<br />

Los factores que afectan al caudal son la concentración de la muestra, el volumen de partida, la naturaleza<br />

química del soluto, la fuerza <strong>centrífuga</strong> relativa, el ángulo del rotor de la <strong>centrífuga</strong>, el tipo de membrana<br />

y la temperatura. Pueden utilizarse las figuras 1 y 2, y las tablas 2 y 3 <strong>para</strong> calcular el tiempo necesario<br />

<strong>para</strong> conseguir un volumen dado de filtrado o de concentrado <strong>para</strong> una variedad de marcadores proteicos.<br />

Un tiempo de centrifugación típico <strong>para</strong> una muestra de 4 ml es de aproximadamente 10 a 40 minutos<br />

(dependiendo del límite de peso molecular nominal del filtro). La mayor parte de la muestra se filtra en<br />

los 10 a 20 primeros minutos de la centrifugación, pero el menor volumen de concentrado (30-75 μl) se<br />

alcanza después de centrifugar durante 20 a 40 minutos.<br />

Figura 1. Volumen de filtrado típico frente a tiempo de centrifugación (rotor oscilante)<br />

Volumen de filtrado (ml)<br />

4.0<br />

3.5<br />

3.0<br />

2.5<br />

2.0<br />

1.5<br />

1.0<br />

0.5<br />

0.0<br />

0 5 10 15 20 25 30 35 40<br />

Tiempo de centrifugación (minutos)<br />

Condiciones de centrifugación: 4.000 × g, temperatura ambiente, volumen de partida de 4 ml.<br />

Marcadores proteicos utilizados: Citocromo c <strong>para</strong> el 3K y el 10K, BSA <strong>para</strong> el 30K y el 50K,<br />

e IgG <strong>para</strong> el 100K, n = 6.<br />

4 <strong>Filtros</strong> <strong>para</strong> <strong>centrífuga</strong> <strong>Amicon®</strong> <strong>Ultra</strong>-4<br />

3K<br />

10K<br />

30K<br />

50K<br />

100K


Caudal, continuación<br />

Figura 2. Volumen de filtrado típico frente a tiempo de centrifugación (rotor de ángulo fijo)<br />

Volumen de filtrado (ml)<br />

4.0<br />

3.5<br />

3.0<br />

2.5<br />

2.0<br />

1.5<br />

1.0<br />

0.5<br />

0.0<br />

0 5 10 15 20 25 30 35 40<br />

Tiempo de centrifugación (minutos)<br />

Condiciones de centrifugación: 7.500 × g <strong>para</strong> el 3K, el 10K y el 50K, 5.000 × g <strong>para</strong> el 100K, temperatura<br />

ambiente, volumen de partida, 4 ml. Marcadores proteicos utilizados: Citocromo c <strong>para</strong> el 3K y el 10K,<br />

BSA <strong>para</strong> el 30K y el 50K, e IgG <strong>para</strong> el 100K, n = 6.<br />

Tabla 2. Volumen de concentrado típico frente a tiempo de centrifugación (rotor oscilante)<br />

Volumen del concentrado (μl)<br />

Tiempo de centrifugación<br />

(minutos) filtro 3K filtro 10K filtro 30K filtro 50K filtro 100K<br />

10 1.369 176 73 32 264<br />

15 – 76 46 – 36<br />

20 478 58 37 30 33<br />

25 228 – – – –<br />

30 159 – – – –<br />

40 94 – – – –<br />

Condiciones de centrifugación: 4.000 × g, temperatura ambiente, volumen de partida de 4 ml.<br />

Marcadores proteicos utilizados: Citocromo c <strong>para</strong> el 3K y el 10K, BSA <strong>para</strong> el 30K y el 50K, e IgG <strong>para</strong> el 100K,<br />

n = 6 (valor medio de tres lotes de membrana). Los volúmenes sombreados se utilizaron <strong>para</strong> calcular la<br />

recuperación de proteínas de la tabla 5.<br />

Tabla 3. Volumen de concentrado típico frente a tiempo de centrifugación (rotor de ángulo fijo de 35°)<br />

Volumen del concentrado (μl)<br />

Tiempo de centrifugación<br />

(minutos) filtro 3K filtro 10K filtro 30K filtro 50K filtro 100K<br />

10 613 97 42 23 53<br />

15 – 54 30 – 30<br />

20 170 35 22 15 26<br />

25 118 – – – –<br />

30 92 – – – –<br />

40 62 – – – –<br />

Condiciones de centrifugación: 7.500 × g <strong>para</strong> el 3K, el 10K y el 50K, 5.000 × g <strong>para</strong> el 100K, temperatura<br />

ambiente, volumen de partida, 4 ml. Marcadores proteicos utilizados: Citocromo c <strong>para</strong> el 3K y el 10K, BSA <strong>para</strong><br />

el 30K y el 50K, e IgG <strong>para</strong> el 100K, n = 6 (valor medio de tres lotes de membrana). Los volúmenes sombreados se<br />

utilizaron <strong>para</strong> calcular la recuperación de proteínas de la tabla 5.<br />

<strong>Filtros</strong> <strong>para</strong> <strong>centrífuga</strong> <strong>Amicon®</strong> <strong>Ultra</strong>-4<br />

3K<br />

10K<br />

30K<br />

50K<br />

100K<br />

5


Retención proteica y recuperación del concentrado<br />

Las membranas utilizadas en las unidades <strong>Amicon®</strong> <strong>Ultra</strong> se caracterizan por un límite de peso molecular<br />

nominal (NMWL); es decir, por su capacidad de retención de moléculas por encima de un peso molecular<br />

específico. Los solutos con pesos moleculares próximos al NMWL pueden ser retenidos sólo parcialmente.<br />

La retención de la membrana depende del tamaño molecular y la forma del soluto. Para la mayoría de las<br />

aplicaciones, el peso molecular es un parámetro adecuado <strong>para</strong> evaluar las características de retención.<br />

Merck <strong>Millipore</strong> Ltd. recomienda utilizar una membrana con un NMWL al menos dos veces inferior al peso<br />

molecular de la proteína que se pretende concentrar. Consulte la Tabla 4.<br />

Tabla 4. Retención típica de los marcadores proteicos<br />

Marcador/Concentración<br />

Peso<br />

molecular<br />

NMWL del<br />

dispositivo<br />

% Retención<br />

rotor oscilante<br />

% Retención<br />

ángulo fijo<br />

Tiempo de<br />

centrifugado<br />

(minutos)<br />

α-Quimotripsinógeno (1 mg/ml) 25.000 3K > 95 > 95 40<br />

Citocromo c (0,25 mg/ml) 12.400 > 95 > 95 40<br />

Vitamina B-12 (0,2 mg/ml) 1.350 < 35 < 35 40<br />

α-Quimotripsinógeno (1 mg/ml) 25.000 10K > 95 > 95 15<br />

Citocromo c (0,25 mg/ml) 12.400 > 95 > 95 15<br />

Vitamina B-12 (0,2 mg/ml) 1.350 < 15 < 15 15<br />

BSA (1 mg/ml) 67.000 30K > 95 > 95 10<br />

Ovalbúmina (1 mg/ml) 45.000 > 90 > 90 10<br />

Citocromo c (0,25 mg/ml) 12.400 < 20 < 20 10<br />

Vitamina B-12 (0,2 mg/ml) 1.350 < 10 < 10 10<br />

BSA (1 mg/ml) 67.000 50K > 95 > 95 10 (SB), 5 (FA)<br />

Ovalbúmina (1 mg/ml) 45.000 ~ 60 ~ 65 10 (SB), 5 (FA)<br />

Citocromo c (0,25 mg/ml) 12.400 < 10 < 10 10 (SB), 5 (FA)<br />

Tiroglobulina (0,5 mg/ml) 677.000 100K > 95 > 95 15<br />

IgG (1 mg/ml) 156.000 > 90 > 90 15<br />

Ovalbúmina (1 mg/ml) 45.000 < 25 < 20 15<br />

Condiciones de centrifugación: Rotor oscilante (SB), 4.000 x g o rotor de ángulo fijo (FA) en 35°, 7.500 x g <strong>para</strong> el<br />

dispositivo de 3K, 10K, 30K y 50K, 5.000 x g <strong>para</strong> el de 100K, volumen de partida de 4 ml, temperatura ambiente,<br />

n = 6 (valor medio de 3 lotes de membrana). Los volúmenes sombreados se tomaron de las tablas 2 y 3.<br />

6 <strong>Filtros</strong> <strong>para</strong> <strong>centrífuga</strong> <strong>Amicon®</strong> <strong>Ultra</strong>-4


Retención proteica y recuperación del concentrado, continuación<br />

Los factores que determinan la recuperación de la muestra son la naturaleza del soluto proteico en relación<br />

con el NMWL del filtro elegido, la concentración de partida y el factor de concentración. En la Tabla 5 se<br />

indican las recuperaciones típicas <strong>para</strong> los filtros <strong>Amicon®</strong> <strong>Ultra</strong>-4.<br />

Tabla 5. Recuperación de concentrado típica<br />

Marcador/<br />

Concentración<br />

Citocromo c<br />

(0,25 mg/ml)<br />

Citocromo c<br />

(0,25 mg/ml)<br />

NMWL del<br />

dispositivo<br />

Tiempo de<br />

centrifugado<br />

(minutos)<br />

Volumen del<br />

concentrado (µl)<br />

Rotor<br />

oscilante<br />

Maximización de la recuperación de la muestra<br />

Una baja recuperación de muestra en el concentrado puede deberse a pérdidas por adsorción, exceso de<br />

concentración o paso de la muestra a través de la membrana.<br />

● Las pérdidas por adsorción dependen de la concentración del soluto, su naturaleza hidrófoba, la<br />

temperatura y el tiempo de contacto con las superficies del filtro, la composición de la muestra y el<br />

pH. Para reducir las pérdidas al mínimo, retire las muestras concentradas inmediatamente después de<br />

la centrifugación.<br />

● Si la concentración de la muestra de partida es elevada, controle el proceso de centrifugación <strong>para</strong> evitar<br />

su concentración excesiva. Esta última puede provocar precipitación y posibles pérdidas de muestra.<br />

● Si parece que la muestra va a atravesar la membrana, elija un filtro <strong>Amicon®</strong> <strong>Ultra</strong>-4 de menor NMWL.<br />

<strong>Filtros</strong> <strong>para</strong> <strong>centrífuga</strong> <strong>Amicon®</strong> <strong>Ultra</strong>-4<br />

Ángulo<br />

fijo<br />

Factor de<br />

concentración (x)<br />

Rotor<br />

oscilante<br />

Ángulo<br />

fijo<br />

Recuperación del<br />

concentrado (%)<br />

Rotor<br />

oscilante<br />

Ángulo<br />

fijo<br />

3K 40 94 62 43,5 65,0 98,2 96,7<br />

10K 15 76 54 52,3 76,6 97,3 98,5<br />

BSA (1 mg/ml) 30K 10 73 42 56,1 98,6 95,8 95,0<br />

BSA (1 mg/ml) 50K 10 32 23 137,0 177,4 98,8 92,8<br />

IgG (1 mg/ml) 100K<br />

15 (SB),<br />

10 (FA)<br />

36 53 115,9 56,8 92,2 91,3<br />

Condiciones de centrifugación: Rotor oscilante (SB), 4.000 x g o rotor de ángulo fijo (FA) en 35°, 7.500 x g <strong>para</strong> el<br />

dispositivo de 3K, 10K, 30K y 50K, 5.000 x g <strong>para</strong> el de 100K, volumen de partida de 4 ml, temperatura ambiente,<br />

n = 6 (valor medio de 3 lotes de membrana). Los volúmenes sombreados se tomaron de las tablas 2 y 3.<br />

7


Cómo cuantificar las recuperaciones<br />

Calcule la recuperación total, el porcentaje de recuperación de concentrado y el porcentaje de recuperación<br />

de filtrado utilizando el método que se indica a continuación. El procedimiento proporciona una estrecha<br />

aproximación de las recuperaciones <strong>para</strong> las disoluciones que contienen concentraciones máximas de<br />

aproximadamente 20 mg/ml.<br />

NOTA: Las técnicas de ensayo apropiadas son la espectrofotometría de absorción, el radioinmunoensayo,<br />

el índice de refracción y la conductividad.<br />

Procedimiento de pesada directo<br />

La densidad de la mayoría de las proteínas diluidas es casi igual a la densidad del agua (es decir, 1 g/ml).<br />

Aprovechando esta propiedad, pueden cuantificarse los volúmenes de concentrado y de filtrado pesándolos<br />

y convirtiendo las unidades de gramos a mililitros. Esta técnica es válida sólo <strong>para</strong> disoluciones con<br />

concentraciones de aproximadamente 20 mg/ml o inferiores.<br />

1. Antes de usarlos, pese por se<strong>para</strong>do el filtro vacío, el tubo de <strong>centrífuga</strong> y un tubo <strong>para</strong> recogida del<br />

concentrado vacío.<br />

2. Llene el filtro con disolución y vuelva a pesarlo.<br />

3. Monte la unidad y centrifugue según las instrucciones.<br />

4. Recoja el concentrado con una pipeta y dispénselo en el tubo <strong>para</strong> recogida del concentrado<br />

previamente pesado.<br />

5. Retire el filtro del tubo de <strong>centrífuga</strong> y pese el tubo de <strong>centrífuga</strong> y el tubo de recogida del<br />

concentrado.<br />

6. Reste el peso del filtro vacío o de los tubos vacíos <strong>para</strong> calcular los pesos del material de partida, el<br />

filtrado y el concentrado.<br />

7. Ensaye el material de partida, el filtrado y el concentrado <strong>para</strong> determinar la concentración de soluto.<br />

8. Calcule las recuperaciones utilizando los datos de peso/volumen y las concentraciones medidas, de la<br />

siguiente forma:<br />

Wc × Cc % de recuperación del concentrado = 100 ×<br />

Wo × Co Wf × Cf % de recuperación del filtrado = 100 ×<br />

Wo × Co % de recuperación total = % de recuperación del concentrado + % de recuperación del filtrado<br />

W c = peso total del concentrado antes del ensayo<br />

W o = peso del material de partida original<br />

W f = peso del filtrado<br />

C c = concentración del concentrado<br />

C o = concentración del material de partida original<br />

C f = concentración del filtrado<br />

8 <strong>Filtros</strong> <strong>para</strong> <strong>centrífuga</strong> <strong>Amicon®</strong> <strong>Ultra</strong>-4


Especificaciones<br />

Volumen máximo de muestra inicial<br />

Rotores oscilantes y de ángulo fijo (45° y 35°) 4,0 ml<br />

Rotor de ángulo fijo (23°) 3,5 ml<br />

Volumen concentrado final habitual 50-100 μl<br />

Fuerza <strong>centrífuga</strong> relativa máxima<br />

Rotor oscilante 4.000 × g<br />

Rotor de ángulo fijo 7.500 × g <strong>para</strong> el NMWL de 3K, 10K, 30K y 50K<br />

Área de membrana activa 3 cm 2<br />

Dimensiones<br />

Filtro en el tubo (tapado)<br />

Filtro<br />

Materiales de fabricación<br />

Longitud: 124 mm Diámetro: 17,3 mm<br />

Longitud: 73,4 mm Diámetro: 17,2 mm<br />

Filtro Copolímero estireno-butadieno<br />

<strong>Filtros</strong> <strong>para</strong> <strong>centrífuga</strong> <strong>Amicon®</strong> <strong>Ultra</strong>-4<br />

5.000 × g <strong>para</strong> el NMWL de 100K<br />

Membrana Celulosa regenerada de baja capacidad de unión <strong>Ultra</strong>cel®<br />

Tubo de filtrado Polipropileno<br />

Tapón y revestimiento Polietileno<br />

9


Compatibilidad química<br />

Los filtros <strong>Amicon®</strong> <strong>Ultra</strong> <strong>para</strong> <strong>centrífuga</strong> están pensados <strong>para</strong> su uso con líquidos biológicos y disoluciones<br />

acuosas. Antes de usarlos, verifique que la muestra es compatible desde el punto de vista químico con el<br />

dispositivo.<br />

Tabla 6. Compatibilidad química de los filtros <strong>Amicon®</strong> <strong>Ultra</strong><br />

Ácidos Concentración Concentración<br />

Ácido acético ≤ 50%* Ácido nítrico ≤ 10%<br />

Ácido clorhídrico ≤ 1,0 M Ácido sulfámico ≤ 3%<br />

Ácido fórmico ≤ 5%* Ácido sulfúrico ≤ 3%<br />

Ácido fosfórico ≤ 30% Ácido tricloroacético (TCA) ≤ 10%*<br />

Ácido láctico ≤ 50% Ácido trifluoroacético (TFA) ≤ 30%*<br />

Álcalis<br />

Hidróxido de amonio ≤ 10% Hidróxido sódico ≤ 0,5 M<br />

Alcoholes<br />

Etanol ≤ 70% Metanol ≤ 60%<br />

Isopropanol ≤ 70% n-Butanol ≤ 70%<br />

Detergentes<br />

Desoxicolato sódico ≤ 5% Dodecilsulfatosódico (SDS) ≤ 0,1%<br />

Detergente 3-CHAPS ≤ 0,1% Surfactante Nonidet P-40 ≤ 2%<br />

Detergente Alconox® ≤ 1% Surfactante Triton® X-100 ≤ 0,1%<br />

Detergente Lubrol® PX ≤ 0,1% Surfactante Tween® 20 ≤ 0,1%<br />

Detergente Tergazyme® ≤ 1%<br />

Disolvente orgánicos<br />

Acetona no recomendado Formaldehído ≤ 5%<br />

Acetonitrilo ≤ 20% Piridina no recomendado<br />

Benceno no recomendado Tetracloruro de carbono no recomendado<br />

Cloroformo no recomendado Tetrahidrofurano no recomendado<br />

Dimetilsulfóxido (DMSO) ≤ 5%* Tolueno no recomendado<br />

Etilacetato no recomendado<br />

Varios<br />

Carbonato sódico ≤ 20% Mercaptoetanol ≤ 0,1 M<br />

Dietilpirocarbonato ≤ 0,2% Polietilenglicol ≤ 10%<br />

Ditiotreitol (DTT) ≤ 0,1 M Sulfato de amonio Saturado<br />

Fenol ≤ 1% Tampón fosfato (pH 8,2) ≤ 1 M<br />

Glicerina ≤ 70% Tampón Tris (pH 8,2) ≤ 1 M<br />

HCl de guanidina ≤ 6 M Urea ≤ 8 M<br />

Imidazol ≤ 100 mM<br />

* El contacto con este producto químico puede provocar la lixiviación de los materiales del dispositivo. Se<br />

recomienda pre<strong>para</strong>r blancos del disolvente <strong>para</strong> determinar si los lixiviables provocarían posibles interferencias<br />

en el ensayo.<br />

10 <strong>Filtros</strong> <strong>para</strong> <strong>centrífuga</strong> <strong>Amicon®</strong> <strong>Ultra</strong>-4


Etiqueta del producto <strong>para</strong> diagnóstico in vitro<br />

En la siguiente tabla se definen los símbolos encontrados en las etiquetas de las unidades<br />

<strong>Amicon®</strong> <strong>Ultra</strong>-4 10K.<br />

Símbolo Definición Símbolo Definición<br />

V<br />

Información <strong>para</strong> pedido de los productos<br />

En esta sección se indican los números de catálogo de las unidades de ultrafiltración <strong>Amicon®</strong> <strong>Ultra</strong>.<br />

Encontrará la información de contacto en la sección de Asistencia técnica. Puede adquirir estos productos<br />

por internet en www.millipore.com/products.<br />

Volumen<br />

inicial<br />

(ml)<br />

Producto sanitario <strong>para</strong> diagnóstico<br />

in vitro N<br />

Volumen de<br />

concentrado<br />

final (μl) Producto<br />

0,5 15–20 <strong>Amicon®</strong><br />

<strong>Ultra</strong>-0,5<br />

device<br />

Tubos de recogida<br />

<strong>Amicon®</strong> <strong>Ultra</strong>-0,5<br />

2 15–70 Filtro prelanzamiento<br />

<strong>Amicon®</strong><br />

<strong>Ultra</strong>-2<br />

4 50–100 Filtro<br />

<strong>Amicon®</strong><br />

<strong>Ultra</strong>-4<br />

15 150–300 Filtro<br />

<strong>Amicon®</strong><br />

<strong>Ultra</strong>-15<br />

<strong>Filtros</strong> <strong>para</strong> <strong>centrífuga</strong> <strong>Amicon®</strong> <strong>Ultra</strong>-4<br />

Cant./<br />

Env. 3K 10K 30K 50K 100K<br />

8<br />

24<br />

96<br />

500<br />

UFC500308<br />

UFC500324<br />

UFC500396<br />

UFC5003BK<br />

96 UFC50VL96<br />

UFC501008<br />

UFC501024<br />

UFC501096<br />

UFC5010BK<br />

UFC503008<br />

UFC503024<br />

UFC503096<br />

UFC5030BK<br />

UFC505008<br />

UFC505024<br />

UFC505096<br />

UFC5050BK<br />

UFC510008<br />

UFC510024<br />

UFC510096<br />

UFC5100BK<br />

24 UFC200324PL UFC201024PL UFC203024PL UFC205024PL UFC210024PL<br />

8<br />

24<br />

96<br />

8<br />

24<br />

96<br />

UFC800308<br />

UFC800324<br />

UFC800396<br />

UFC900308<br />

UFC900324<br />

UFC900396<br />

UFC801008*<br />

UFC801024*<br />

UFC801096*<br />

UFC901008*<br />

UFC901024*<br />

UFC901096*<br />

Fecha de fabricación<br />

h Número de catálogo M Fabricante<br />

D No reutilizar l Limitación de temperatura<br />

H Fecha caducidad d Producto no estéril<br />

g Código de lote C<br />

Marca de conformidad con la CE<br />

UFC803008<br />

UFC803024<br />

UFC803096<br />

UFC903008<br />

UFC903024<br />

UFC903096<br />

UFC805008<br />

UFC805024<br />

UFC805096<br />

UFC905008<br />

UFC905024<br />

UFC905096<br />

UFC810008<br />

UFC810024<br />

UFC810096<br />

UFC910008<br />

UFC910024<br />

UFC910096<br />

* Los filtros <strong>Amicon®</strong> <strong>Ultra</strong>-4 y <strong>Ultra</strong>-15 10K son <strong>para</strong><br />

diagnóstico in vitro. Todos los demás dispositivos son sólo<br />

<strong>para</strong> investigación.<br />

11


Aviso<br />

La información contenida en este documento está sujeta a cambios sin previo aviso y no debe interpretarse<br />

como un compromiso por parte de Merck <strong>Millipore</strong> Ltd. (“<strong>Millipore</strong>”) ni de ninguna de sus empresas<br />

afiliadas. Ni Merck <strong>Millipore</strong> Ltd. ni ninguna de sus empresas afiliadas acepta responsabilidad alguna por<br />

cualquier error que pudiera aparecer en este documento.<br />

Asistencia técnica<br />

Para más información, póngase en contacto con su oficina más próxima. Encontrará información de<br />

contacto actualizada <strong>para</strong> todo el mundo en nuestra página Web www.millipore.com/offices. También<br />

puede visitar el apartado correspondiente al servicio técnico en nuestra página Web<br />

www.millipore.com/techservice.<br />

Garantía<br />

La garantía aplicable a los productos indicados en esta publicación puede encontrarse en<br />

www.millipore.com/terms (en los “Términos y condiciones de venta” aplicables a su transacción de compra).<br />

Fabricado en Irlanda<br />

Merck <strong>Millipore</strong> Ltd.<br />

Tullagreen,<br />

Carrigtwohill,<br />

Co. Cork, IRL<br />

El logotipo M es una marca comercial de Merck KGaA, Darmstadt, Alemania.<br />

<strong>Millipore</strong>, Amicon, Milli-Q y <strong>Ultra</strong>cel son marcas registradas de Merck KGaA.<br />

Alconox y Tergazyme son marcas registradas de Alconox, Inc.<br />

Lubrol es una marca registrada de Imperial Chemical Industries PLC.<br />

Nonidet es una marca comercial de Royal Dutch/Shell Group.<br />

Triton es una marca registrada de Union Carbide Corp.<br />

Tween es una marca registrada de ICI Americas Inc.<br />

© 2012 EMD <strong>Millipore</strong> Corporation. Todos los derechos reservados.<br />

PR03521TR, Rev. A, Español, 03/12<br />

12 <strong>Filtros</strong> <strong>para</strong> <strong>centrífuga</strong> <strong>Amicon®</strong> <strong>Ultra</strong>-4

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