Filtros para centrífuga Amicon® Ultra-4 - Millipore
Filtros para centrífuga Amicon® Ultra-4 - Millipore
Filtros para centrífuga Amicon® Ultra-4 - Millipore
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Guía del usuario<br />
<strong>Filtros</strong> <strong>para</strong> <strong>centrífuga</strong><br />
<strong>Amicon®</strong> <strong>Ultra</strong>-4<br />
<strong>para</strong> volúmenes máximos de 4 ml<br />
Unidad Amicron® <strong>Ultra</strong>-4 10K <strong>para</strong> diagnóstico in vitro<br />
Los filtros <strong>Amicon®</strong> <strong>Ultra</strong>-4 3K, 30K, 50K y 100K<br />
son sólo <strong>para</strong> investigación, no pueden utilizarse<br />
<strong>para</strong> procedimientos diagnósticos.<br />
Español<br />
Introducción<br />
Los filtros <strong>para</strong> <strong>centrífuga</strong> <strong>Amicon®</strong> <strong>Ultra</strong>-4 proporcionan ultrafiltración rápida con capacidad <strong>para</strong><br />
elevados factores de concentración y fácil recuperación del concentrado a partir de matrices de muestras<br />
diluidas y complejas. El diseño vertical y el área de superficie disponible de la membrana proporcionan un<br />
rápido procesamiento, una gran recuperación de la muestra (normalmente superior al 90% de la disolución<br />
de partida) y capacidad de concentración por 80. El tiempo de procesamiento habitual es de 10 a 40<br />
minutos dependiendo del límite de peso molecular nominal (NMWL). El diseño vertical reduce al mínimo la<br />
polarización del soluto y el plegamiento posterior de la membrana; por otro lado, un bloqueo automático<br />
físico del filtro impide la centrifugación hasta sequedad y la posible pérdida de muestra. El concentrado<br />
se recoge del depósito <strong>para</strong> la muestra del filtro utilizando una pipeta, mientras que el ultrafiltrado se<br />
recoge en el tubo de <strong>centrífuga</strong> suministrado. El dispositivo puede centrifugarse en un rotor oscilante (<strong>para</strong><br />
rendimiento óptimo) o en un rotor de ángulo fijo. Los filtros <strong>Amicon®</strong> <strong>Ultra</strong>-4 se suministran estériles y son<br />
<strong>para</strong> un solo uso.<br />
La línea de productos <strong>Amicon®</strong> <strong>Ultra</strong>-4 abarca cinco valores de corte diferentes (límite de peso molecular<br />
nominal, NMWL, o peso molecular de corte, MWCO):<br />
● Filtro <strong>Amicon®</strong> <strong>Ultra</strong> 3K — NMWL de 3.000<br />
● Filtro <strong>Amicon®</strong> <strong>Ultra</strong> 10K — NMWL de 10.000<br />
● Filtro <strong>Amicon®</strong> <strong>Ultra</strong> 30K — NMWL de 30.000<br />
● Filtro <strong>Amicon®</strong> <strong>Ultra</strong> 50K — NMWL de 50.000<br />
● Filtro <strong>Amicon®</strong> <strong>Ultra</strong> 100K — NMWL de 100.000<br />
Los filtros <strong>Amicon®</strong> <strong>Ultra</strong>-4 10K están pensados <strong>para</strong> diagnóstico in vitro y pueden utilizarse<br />
<strong>para</strong> concentrar suero, orina, líquido cefalorraquídeo y otros líquidos corporales antes del<br />
análisis.<br />
Los filtros <strong>Amicon®</strong> <strong>Ultra</strong>-4 3K, 30K, 50K y 100K son sólo <strong>para</strong> investigación y no pueden utilizarse <strong>para</strong><br />
procedimientos diagnósticos.<br />
<strong>Filtros</strong> <strong>para</strong> <strong>centrífuga</strong> <strong>Amicon®</strong> <strong>Ultra</strong>-4<br />
1
Aplicaciones<br />
● Concentración de muestras biológicas que contengan antígenos, anticuerpos, enzimas, ácidos<br />
nucleicos (muestras de ADN o ARN monocatenarios o bicatenarios), microorganismos, eluidos de la<br />
columna y muestras purificadas<br />
● Purificación de componentes macromoleculares encontrados en extractos de cultivos tisulares y<br />
lisados celulares, eliminación de cebadores, conectores o etiquetas moleculares de una mezcla de<br />
reacción, y retirada de proteínas antes de la HPLC<br />
● Desalinización, cambio de tampones o diafiltración<br />
Materiales suministrados<br />
La unidad <strong>Amicon®</strong> <strong>Ultra</strong>-4 se suministra con un tapón, un filtro y un tubo de <strong>centrífuga</strong>.<br />
30,000<br />
MWCO<br />
ul<br />
500<br />
250<br />
100<br />
50<br />
4<br />
3<br />
2<br />
Tapa<br />
Filtro<br />
Equipo necesario<br />
Tubo de <strong>centrífuga</strong><br />
● Centrífuga con rotor oscilante (preferida) o rotor de ángulo fijo con pocillos/portadores donde quepan<br />
tubos de fondo cónico de 15 ml de 17 mm x 124 mm<br />
AVISO: Para evitar que se rompa la unidad durante la centrifugación, debe comprobarse ausencia de<br />
bloqueo antes de empezar a centrifugar.<br />
● Pipeta con puntas de 200 microlitros (μl) <strong>para</strong> recuperación del concentrado<br />
Idoneidad<br />
Se sugiere realizar estudios preliminares de recuperación y de retención con el fin de asegurar la idoneidad<br />
<strong>para</strong> el uso previsto. Ver la sección "Cómo cuantificar las recuperaciones".<br />
Conservación y periodo de validez de la unidad<br />
Conservar a 15–30 °C. El periodo de validez es de 3 años a partir de la fecha de fabricación. Para los números<br />
de catálogo UFC801008, UFC801024 y UFC801096, consulte la fecha de caducidad de la etiqueta del<br />
envase.<br />
2 <strong>Filtros</strong> <strong>para</strong> <strong>centrífuga</strong> <strong>Amicon®</strong> <strong>Ultra</strong>-4
Preenjuague<br />
Las membranas de ultrafiltración de las unidades <strong>Amicon®</strong> <strong>Ultra</strong>-4 contienen restos de glicerina. Si este<br />
material interfiere en el análisis, enjuague previamente el filtro con tampón o agua Milli-Q®. Si sigue<br />
habiendo interferencia, enjuague con NaOH 0,1 N seguido de un segundo centrifugado de tampón o agua<br />
Milli-Q®.<br />
AVISO: No permita que la membrana de los filtros <strong>Amicon®</strong> <strong>Ultra</strong> se seque después de haberse humedecido.<br />
Si no va a utilizar la unidad inmediatamente después del enjuagado previo, deje líquido en la<br />
membrana hasta que se utilice.<br />
Cómo utilizar los filtros <strong>para</strong> <strong>centrífuga</strong> <strong>Amicon®</strong> <strong>Ultra</strong>-4<br />
1. Coloque hasta 4 ml de muestra (3,5 ml si se está utilizando un rotor de ángulo fijo de 23°) en el filtro<br />
<strong>Amicon®</strong> <strong>Ultra</strong>.<br />
2. Coloque el filtro tapado en el rotor de la <strong>centrífuga</strong> (preferiblemente oscilante); equilibre con un<br />
dispositivo similar.<br />
3. Si utiliza un rotor oscilante, centrifugue la unidad a un máximo de 4.000 × g durante unos<br />
10-40 minutos.<br />
Si utiliza un rotor de ángulo fijo, oriente el filtro con el panel donde está la membrana mirando<br />
hacia arriba.<br />
Para los filtros <strong>Amicon®</strong> <strong>Ultra</strong> 3K, 10K, 30K y 50K, centrifugue a un máximo de 7.500 × g durante unos<br />
10–40 minutos.<br />
Para los filtros <strong>Amicon®</strong> <strong>Ultra</strong> 100K, centrifugue a un máximo de 5.000 × g durante unos<br />
10–20 minutos.<br />
NOTA: En las Figuras 1 y 2, y las Tablas 2 y 3 encontrará los tiempos de centrifugación habituales.<br />
4. Para recuperar el soluto concentrado, introduzca una pipeta en el fondo del filtro y retire la muestra<br />
utilizando un movimiento de barrido de un lado al otro <strong>para</strong> asegurar la recuperación total. El<br />
ultrafiltrado puede conservarse en el tubo de <strong>centrífuga</strong>.<br />
NOTA: Para una recuperación óptima, retire la muestra concentrada inmediatamente después de la<br />
centrifugación.<br />
Desalación o diafiltración<br />
La desalación, el cambio de tampón o la diafiltración son métodos importantes <strong>para</strong> retirar las sales o los<br />
disolventes de las disoluciones que contienen biomoléculas. En el filtro <strong>Amicon®</strong> <strong>Ultra</strong>-4 pueden eliminarse<br />
las sales o cambiar los tampones concentrando la muestra y reconstituyendo luego el concentrado hasta<br />
el volumen de muestra original con cualquier disolvente deseado. El proceso de "lavado" puede repetirse<br />
hasta que se haya reducido de manera suficiente la concentración del microsoluto contaminante. Vea el<br />
siguiente ejemplo.<br />
30,000<br />
MWCO<br />
4<br />
3<br />
2<br />
ul<br />
500<br />
250<br />
100<br />
50<br />
4 ml de<br />
1 mg/ml de<br />
proteína en<br />
NaCl 100 mM<br />
Centrifugar<br />
hasta<br />
concentrado<br />
30,000<br />
MWCO<br />
<strong>Filtros</strong> <strong>para</strong> <strong>centrífuga</strong> <strong>Amicon®</strong> <strong>Ultra</strong>-4<br />
ul<br />
500<br />
250<br />
100<br />
50<br />
4<br />
3<br />
2<br />
50 μl de<br />
80 mg/ml de<br />
proteína en<br />
NaCl 100 mM<br />
NaCl<br />
100 mM<br />
Añadir 3,95 ml<br />
de NaCl 10 mM o<br />
cambiar el tampón<br />
30,000<br />
MWCO<br />
4<br />
3<br />
2<br />
ul<br />
500<br />
250<br />
100<br />
50<br />
4 ml de 1 mg/ml<br />
de proteína en<br />
NaCl 11,1 mM<br />
Centrifugar<br />
hasta<br />
concentrado<br />
30,000<br />
MWCO<br />
ul<br />
500<br />
250<br />
100<br />
50<br />
4<br />
3<br />
2<br />
50 μl de<br />
80 mg/ml de<br />
proteína en<br />
NaCl 11,1 mM<br />
NaCl<br />
11,1 mM<br />
3
Rendimiento - Concentración del ADN<br />
Merck <strong>Millipore</strong> Ltd. ha determinado que el dispositivo <strong>Amicon®</strong> <strong>Ultra</strong>-4 30K proporciona el mejor<br />
equilibrio entre la recuperación y el tiempo de centrifugado <strong>para</strong> el ADN bicatenario con un contenido de<br />
pares de bases comprendido entre 137 y 1.159.<br />
Tabla 1. Recuperación típica de nucleóticos del dispositivo <strong>Amicon®</strong> <strong>Ultra</strong>-4 30K<br />
Cantidad de pares de Tiempo de centrifugado Volumen del<br />
base del ADN bicatenario (minutos)<br />
concentrado (µl) Recuperación (%)<br />
137–1.159 10 50–70 > 85<br />
Condiciones de centrifugación: Rotor de ángulo fijo, 5.000 x g, temperatura ambiente, volumen de partida de 2 ml.<br />
Rendimiento - Concentración de proteínas<br />
Caudal<br />
Los factores que afectan al caudal son la concentración de la muestra, el volumen de partida, la naturaleza<br />
química del soluto, la fuerza <strong>centrífuga</strong> relativa, el ángulo del rotor de la <strong>centrífuga</strong>, el tipo de membrana<br />
y la temperatura. Pueden utilizarse las figuras 1 y 2, y las tablas 2 y 3 <strong>para</strong> calcular el tiempo necesario<br />
<strong>para</strong> conseguir un volumen dado de filtrado o de concentrado <strong>para</strong> una variedad de marcadores proteicos.<br />
Un tiempo de centrifugación típico <strong>para</strong> una muestra de 4 ml es de aproximadamente 10 a 40 minutos<br />
(dependiendo del límite de peso molecular nominal del filtro). La mayor parte de la muestra se filtra en<br />
los 10 a 20 primeros minutos de la centrifugación, pero el menor volumen de concentrado (30-75 μl) se<br />
alcanza después de centrifugar durante 20 a 40 minutos.<br />
Figura 1. Volumen de filtrado típico frente a tiempo de centrifugación (rotor oscilante)<br />
Volumen de filtrado (ml)<br />
4.0<br />
3.5<br />
3.0<br />
2.5<br />
2.0<br />
1.5<br />
1.0<br />
0.5<br />
0.0<br />
0 5 10 15 20 25 30 35 40<br />
Tiempo de centrifugación (minutos)<br />
Condiciones de centrifugación: 4.000 × g, temperatura ambiente, volumen de partida de 4 ml.<br />
Marcadores proteicos utilizados: Citocromo c <strong>para</strong> el 3K y el 10K, BSA <strong>para</strong> el 30K y el 50K,<br />
e IgG <strong>para</strong> el 100K, n = 6.<br />
4 <strong>Filtros</strong> <strong>para</strong> <strong>centrífuga</strong> <strong>Amicon®</strong> <strong>Ultra</strong>-4<br />
3K<br />
10K<br />
30K<br />
50K<br />
100K
Caudal, continuación<br />
Figura 2. Volumen de filtrado típico frente a tiempo de centrifugación (rotor de ángulo fijo)<br />
Volumen de filtrado (ml)<br />
4.0<br />
3.5<br />
3.0<br />
2.5<br />
2.0<br />
1.5<br />
1.0<br />
0.5<br />
0.0<br />
0 5 10 15 20 25 30 35 40<br />
Tiempo de centrifugación (minutos)<br />
Condiciones de centrifugación: 7.500 × g <strong>para</strong> el 3K, el 10K y el 50K, 5.000 × g <strong>para</strong> el 100K, temperatura<br />
ambiente, volumen de partida, 4 ml. Marcadores proteicos utilizados: Citocromo c <strong>para</strong> el 3K y el 10K,<br />
BSA <strong>para</strong> el 30K y el 50K, e IgG <strong>para</strong> el 100K, n = 6.<br />
Tabla 2. Volumen de concentrado típico frente a tiempo de centrifugación (rotor oscilante)<br />
Volumen del concentrado (μl)<br />
Tiempo de centrifugación<br />
(minutos) filtro 3K filtro 10K filtro 30K filtro 50K filtro 100K<br />
10 1.369 176 73 32 264<br />
15 – 76 46 – 36<br />
20 478 58 37 30 33<br />
25 228 – – – –<br />
30 159 – – – –<br />
40 94 – – – –<br />
Condiciones de centrifugación: 4.000 × g, temperatura ambiente, volumen de partida de 4 ml.<br />
Marcadores proteicos utilizados: Citocromo c <strong>para</strong> el 3K y el 10K, BSA <strong>para</strong> el 30K y el 50K, e IgG <strong>para</strong> el 100K,<br />
n = 6 (valor medio de tres lotes de membrana). Los volúmenes sombreados se utilizaron <strong>para</strong> calcular la<br />
recuperación de proteínas de la tabla 5.<br />
Tabla 3. Volumen de concentrado típico frente a tiempo de centrifugación (rotor de ángulo fijo de 35°)<br />
Volumen del concentrado (μl)<br />
Tiempo de centrifugación<br />
(minutos) filtro 3K filtro 10K filtro 30K filtro 50K filtro 100K<br />
10 613 97 42 23 53<br />
15 – 54 30 – 30<br />
20 170 35 22 15 26<br />
25 118 – – – –<br />
30 92 – – – –<br />
40 62 – – – –<br />
Condiciones de centrifugación: 7.500 × g <strong>para</strong> el 3K, el 10K y el 50K, 5.000 × g <strong>para</strong> el 100K, temperatura<br />
ambiente, volumen de partida, 4 ml. Marcadores proteicos utilizados: Citocromo c <strong>para</strong> el 3K y el 10K, BSA <strong>para</strong><br />
el 30K y el 50K, e IgG <strong>para</strong> el 100K, n = 6 (valor medio de tres lotes de membrana). Los volúmenes sombreados se<br />
utilizaron <strong>para</strong> calcular la recuperación de proteínas de la tabla 5.<br />
<strong>Filtros</strong> <strong>para</strong> <strong>centrífuga</strong> <strong>Amicon®</strong> <strong>Ultra</strong>-4<br />
3K<br />
10K<br />
30K<br />
50K<br />
100K<br />
5
Retención proteica y recuperación del concentrado<br />
Las membranas utilizadas en las unidades <strong>Amicon®</strong> <strong>Ultra</strong> se caracterizan por un límite de peso molecular<br />
nominal (NMWL); es decir, por su capacidad de retención de moléculas por encima de un peso molecular<br />
específico. Los solutos con pesos moleculares próximos al NMWL pueden ser retenidos sólo parcialmente.<br />
La retención de la membrana depende del tamaño molecular y la forma del soluto. Para la mayoría de las<br />
aplicaciones, el peso molecular es un parámetro adecuado <strong>para</strong> evaluar las características de retención.<br />
Merck <strong>Millipore</strong> Ltd. recomienda utilizar una membrana con un NMWL al menos dos veces inferior al peso<br />
molecular de la proteína que se pretende concentrar. Consulte la Tabla 4.<br />
Tabla 4. Retención típica de los marcadores proteicos<br />
Marcador/Concentración<br />
Peso<br />
molecular<br />
NMWL del<br />
dispositivo<br />
% Retención<br />
rotor oscilante<br />
% Retención<br />
ángulo fijo<br />
Tiempo de<br />
centrifugado<br />
(minutos)<br />
α-Quimotripsinógeno (1 mg/ml) 25.000 3K > 95 > 95 40<br />
Citocromo c (0,25 mg/ml) 12.400 > 95 > 95 40<br />
Vitamina B-12 (0,2 mg/ml) 1.350 < 35 < 35 40<br />
α-Quimotripsinógeno (1 mg/ml) 25.000 10K > 95 > 95 15<br />
Citocromo c (0,25 mg/ml) 12.400 > 95 > 95 15<br />
Vitamina B-12 (0,2 mg/ml) 1.350 < 15 < 15 15<br />
BSA (1 mg/ml) 67.000 30K > 95 > 95 10<br />
Ovalbúmina (1 mg/ml) 45.000 > 90 > 90 10<br />
Citocromo c (0,25 mg/ml) 12.400 < 20 < 20 10<br />
Vitamina B-12 (0,2 mg/ml) 1.350 < 10 < 10 10<br />
BSA (1 mg/ml) 67.000 50K > 95 > 95 10 (SB), 5 (FA)<br />
Ovalbúmina (1 mg/ml) 45.000 ~ 60 ~ 65 10 (SB), 5 (FA)<br />
Citocromo c (0,25 mg/ml) 12.400 < 10 < 10 10 (SB), 5 (FA)<br />
Tiroglobulina (0,5 mg/ml) 677.000 100K > 95 > 95 15<br />
IgG (1 mg/ml) 156.000 > 90 > 90 15<br />
Ovalbúmina (1 mg/ml) 45.000 < 25 < 20 15<br />
Condiciones de centrifugación: Rotor oscilante (SB), 4.000 x g o rotor de ángulo fijo (FA) en 35°, 7.500 x g <strong>para</strong> el<br />
dispositivo de 3K, 10K, 30K y 50K, 5.000 x g <strong>para</strong> el de 100K, volumen de partida de 4 ml, temperatura ambiente,<br />
n = 6 (valor medio de 3 lotes de membrana). Los volúmenes sombreados se tomaron de las tablas 2 y 3.<br />
6 <strong>Filtros</strong> <strong>para</strong> <strong>centrífuga</strong> <strong>Amicon®</strong> <strong>Ultra</strong>-4
Retención proteica y recuperación del concentrado, continuación<br />
Los factores que determinan la recuperación de la muestra son la naturaleza del soluto proteico en relación<br />
con el NMWL del filtro elegido, la concentración de partida y el factor de concentración. En la Tabla 5 se<br />
indican las recuperaciones típicas <strong>para</strong> los filtros <strong>Amicon®</strong> <strong>Ultra</strong>-4.<br />
Tabla 5. Recuperación de concentrado típica<br />
Marcador/<br />
Concentración<br />
Citocromo c<br />
(0,25 mg/ml)<br />
Citocromo c<br />
(0,25 mg/ml)<br />
NMWL del<br />
dispositivo<br />
Tiempo de<br />
centrifugado<br />
(minutos)<br />
Volumen del<br />
concentrado (µl)<br />
Rotor<br />
oscilante<br />
Maximización de la recuperación de la muestra<br />
Una baja recuperación de muestra en el concentrado puede deberse a pérdidas por adsorción, exceso de<br />
concentración o paso de la muestra a través de la membrana.<br />
● Las pérdidas por adsorción dependen de la concentración del soluto, su naturaleza hidrófoba, la<br />
temperatura y el tiempo de contacto con las superficies del filtro, la composición de la muestra y el<br />
pH. Para reducir las pérdidas al mínimo, retire las muestras concentradas inmediatamente después de<br />
la centrifugación.<br />
● Si la concentración de la muestra de partida es elevada, controle el proceso de centrifugación <strong>para</strong> evitar<br />
su concentración excesiva. Esta última puede provocar precipitación y posibles pérdidas de muestra.<br />
● Si parece que la muestra va a atravesar la membrana, elija un filtro <strong>Amicon®</strong> <strong>Ultra</strong>-4 de menor NMWL.<br />
<strong>Filtros</strong> <strong>para</strong> <strong>centrífuga</strong> <strong>Amicon®</strong> <strong>Ultra</strong>-4<br />
Ángulo<br />
fijo<br />
Factor de<br />
concentración (x)<br />
Rotor<br />
oscilante<br />
Ángulo<br />
fijo<br />
Recuperación del<br />
concentrado (%)<br />
Rotor<br />
oscilante<br />
Ángulo<br />
fijo<br />
3K 40 94 62 43,5 65,0 98,2 96,7<br />
10K 15 76 54 52,3 76,6 97,3 98,5<br />
BSA (1 mg/ml) 30K 10 73 42 56,1 98,6 95,8 95,0<br />
BSA (1 mg/ml) 50K 10 32 23 137,0 177,4 98,8 92,8<br />
IgG (1 mg/ml) 100K<br />
15 (SB),<br />
10 (FA)<br />
36 53 115,9 56,8 92,2 91,3<br />
Condiciones de centrifugación: Rotor oscilante (SB), 4.000 x g o rotor de ángulo fijo (FA) en 35°, 7.500 x g <strong>para</strong> el<br />
dispositivo de 3K, 10K, 30K y 50K, 5.000 x g <strong>para</strong> el de 100K, volumen de partida de 4 ml, temperatura ambiente,<br />
n = 6 (valor medio de 3 lotes de membrana). Los volúmenes sombreados se tomaron de las tablas 2 y 3.<br />
7
Cómo cuantificar las recuperaciones<br />
Calcule la recuperación total, el porcentaje de recuperación de concentrado y el porcentaje de recuperación<br />
de filtrado utilizando el método que se indica a continuación. El procedimiento proporciona una estrecha<br />
aproximación de las recuperaciones <strong>para</strong> las disoluciones que contienen concentraciones máximas de<br />
aproximadamente 20 mg/ml.<br />
NOTA: Las técnicas de ensayo apropiadas son la espectrofotometría de absorción, el radioinmunoensayo,<br />
el índice de refracción y la conductividad.<br />
Procedimiento de pesada directo<br />
La densidad de la mayoría de las proteínas diluidas es casi igual a la densidad del agua (es decir, 1 g/ml).<br />
Aprovechando esta propiedad, pueden cuantificarse los volúmenes de concentrado y de filtrado pesándolos<br />
y convirtiendo las unidades de gramos a mililitros. Esta técnica es válida sólo <strong>para</strong> disoluciones con<br />
concentraciones de aproximadamente 20 mg/ml o inferiores.<br />
1. Antes de usarlos, pese por se<strong>para</strong>do el filtro vacío, el tubo de <strong>centrífuga</strong> y un tubo <strong>para</strong> recogida del<br />
concentrado vacío.<br />
2. Llene el filtro con disolución y vuelva a pesarlo.<br />
3. Monte la unidad y centrifugue según las instrucciones.<br />
4. Recoja el concentrado con una pipeta y dispénselo en el tubo <strong>para</strong> recogida del concentrado<br />
previamente pesado.<br />
5. Retire el filtro del tubo de <strong>centrífuga</strong> y pese el tubo de <strong>centrífuga</strong> y el tubo de recogida del<br />
concentrado.<br />
6. Reste el peso del filtro vacío o de los tubos vacíos <strong>para</strong> calcular los pesos del material de partida, el<br />
filtrado y el concentrado.<br />
7. Ensaye el material de partida, el filtrado y el concentrado <strong>para</strong> determinar la concentración de soluto.<br />
8. Calcule las recuperaciones utilizando los datos de peso/volumen y las concentraciones medidas, de la<br />
siguiente forma:<br />
Wc × Cc % de recuperación del concentrado = 100 ×<br />
Wo × Co Wf × Cf % de recuperación del filtrado = 100 ×<br />
Wo × Co % de recuperación total = % de recuperación del concentrado + % de recuperación del filtrado<br />
W c = peso total del concentrado antes del ensayo<br />
W o = peso del material de partida original<br />
W f = peso del filtrado<br />
C c = concentración del concentrado<br />
C o = concentración del material de partida original<br />
C f = concentración del filtrado<br />
8 <strong>Filtros</strong> <strong>para</strong> <strong>centrífuga</strong> <strong>Amicon®</strong> <strong>Ultra</strong>-4
Especificaciones<br />
Volumen máximo de muestra inicial<br />
Rotores oscilantes y de ángulo fijo (45° y 35°) 4,0 ml<br />
Rotor de ángulo fijo (23°) 3,5 ml<br />
Volumen concentrado final habitual 50-100 μl<br />
Fuerza <strong>centrífuga</strong> relativa máxima<br />
Rotor oscilante 4.000 × g<br />
Rotor de ángulo fijo 7.500 × g <strong>para</strong> el NMWL de 3K, 10K, 30K y 50K<br />
Área de membrana activa 3 cm 2<br />
Dimensiones<br />
Filtro en el tubo (tapado)<br />
Filtro<br />
Materiales de fabricación<br />
Longitud: 124 mm Diámetro: 17,3 mm<br />
Longitud: 73,4 mm Diámetro: 17,2 mm<br />
Filtro Copolímero estireno-butadieno<br />
<strong>Filtros</strong> <strong>para</strong> <strong>centrífuga</strong> <strong>Amicon®</strong> <strong>Ultra</strong>-4<br />
5.000 × g <strong>para</strong> el NMWL de 100K<br />
Membrana Celulosa regenerada de baja capacidad de unión <strong>Ultra</strong>cel®<br />
Tubo de filtrado Polipropileno<br />
Tapón y revestimiento Polietileno<br />
9
Compatibilidad química<br />
Los filtros <strong>Amicon®</strong> <strong>Ultra</strong> <strong>para</strong> <strong>centrífuga</strong> están pensados <strong>para</strong> su uso con líquidos biológicos y disoluciones<br />
acuosas. Antes de usarlos, verifique que la muestra es compatible desde el punto de vista químico con el<br />
dispositivo.<br />
Tabla 6. Compatibilidad química de los filtros <strong>Amicon®</strong> <strong>Ultra</strong><br />
Ácidos Concentración Concentración<br />
Ácido acético ≤ 50%* Ácido nítrico ≤ 10%<br />
Ácido clorhídrico ≤ 1,0 M Ácido sulfámico ≤ 3%<br />
Ácido fórmico ≤ 5%* Ácido sulfúrico ≤ 3%<br />
Ácido fosfórico ≤ 30% Ácido tricloroacético (TCA) ≤ 10%*<br />
Ácido láctico ≤ 50% Ácido trifluoroacético (TFA) ≤ 30%*<br />
Álcalis<br />
Hidróxido de amonio ≤ 10% Hidróxido sódico ≤ 0,5 M<br />
Alcoholes<br />
Etanol ≤ 70% Metanol ≤ 60%<br />
Isopropanol ≤ 70% n-Butanol ≤ 70%<br />
Detergentes<br />
Desoxicolato sódico ≤ 5% Dodecilsulfatosódico (SDS) ≤ 0,1%<br />
Detergente 3-CHAPS ≤ 0,1% Surfactante Nonidet P-40 ≤ 2%<br />
Detergente Alconox® ≤ 1% Surfactante Triton® X-100 ≤ 0,1%<br />
Detergente Lubrol® PX ≤ 0,1% Surfactante Tween® 20 ≤ 0,1%<br />
Detergente Tergazyme® ≤ 1%<br />
Disolvente orgánicos<br />
Acetona no recomendado Formaldehído ≤ 5%<br />
Acetonitrilo ≤ 20% Piridina no recomendado<br />
Benceno no recomendado Tetracloruro de carbono no recomendado<br />
Cloroformo no recomendado Tetrahidrofurano no recomendado<br />
Dimetilsulfóxido (DMSO) ≤ 5%* Tolueno no recomendado<br />
Etilacetato no recomendado<br />
Varios<br />
Carbonato sódico ≤ 20% Mercaptoetanol ≤ 0,1 M<br />
Dietilpirocarbonato ≤ 0,2% Polietilenglicol ≤ 10%<br />
Ditiotreitol (DTT) ≤ 0,1 M Sulfato de amonio Saturado<br />
Fenol ≤ 1% Tampón fosfato (pH 8,2) ≤ 1 M<br />
Glicerina ≤ 70% Tampón Tris (pH 8,2) ≤ 1 M<br />
HCl de guanidina ≤ 6 M Urea ≤ 8 M<br />
Imidazol ≤ 100 mM<br />
* El contacto con este producto químico puede provocar la lixiviación de los materiales del dispositivo. Se<br />
recomienda pre<strong>para</strong>r blancos del disolvente <strong>para</strong> determinar si los lixiviables provocarían posibles interferencias<br />
en el ensayo.<br />
10 <strong>Filtros</strong> <strong>para</strong> <strong>centrífuga</strong> <strong>Amicon®</strong> <strong>Ultra</strong>-4
Etiqueta del producto <strong>para</strong> diagnóstico in vitro<br />
En la siguiente tabla se definen los símbolos encontrados en las etiquetas de las unidades<br />
<strong>Amicon®</strong> <strong>Ultra</strong>-4 10K.<br />
Símbolo Definición Símbolo Definición<br />
V<br />
Información <strong>para</strong> pedido de los productos<br />
En esta sección se indican los números de catálogo de las unidades de ultrafiltración <strong>Amicon®</strong> <strong>Ultra</strong>.<br />
Encontrará la información de contacto en la sección de Asistencia técnica. Puede adquirir estos productos<br />
por internet en www.millipore.com/products.<br />
Volumen<br />
inicial<br />
(ml)<br />
Producto sanitario <strong>para</strong> diagnóstico<br />
in vitro N<br />
Volumen de<br />
concentrado<br />
final (μl) Producto<br />
0,5 15–20 <strong>Amicon®</strong><br />
<strong>Ultra</strong>-0,5<br />
device<br />
Tubos de recogida<br />
<strong>Amicon®</strong> <strong>Ultra</strong>-0,5<br />
2 15–70 Filtro prelanzamiento<br />
<strong>Amicon®</strong><br />
<strong>Ultra</strong>-2<br />
4 50–100 Filtro<br />
<strong>Amicon®</strong><br />
<strong>Ultra</strong>-4<br />
15 150–300 Filtro<br />
<strong>Amicon®</strong><br />
<strong>Ultra</strong>-15<br />
<strong>Filtros</strong> <strong>para</strong> <strong>centrífuga</strong> <strong>Amicon®</strong> <strong>Ultra</strong>-4<br />
Cant./<br />
Env. 3K 10K 30K 50K 100K<br />
8<br />
24<br />
96<br />
500<br />
UFC500308<br />
UFC500324<br />
UFC500396<br />
UFC5003BK<br />
96 UFC50VL96<br />
UFC501008<br />
UFC501024<br />
UFC501096<br />
UFC5010BK<br />
UFC503008<br />
UFC503024<br />
UFC503096<br />
UFC5030BK<br />
UFC505008<br />
UFC505024<br />
UFC505096<br />
UFC5050BK<br />
UFC510008<br />
UFC510024<br />
UFC510096<br />
UFC5100BK<br />
24 UFC200324PL UFC201024PL UFC203024PL UFC205024PL UFC210024PL<br />
8<br />
24<br />
96<br />
8<br />
24<br />
96<br />
UFC800308<br />
UFC800324<br />
UFC800396<br />
UFC900308<br />
UFC900324<br />
UFC900396<br />
UFC801008*<br />
UFC801024*<br />
UFC801096*<br />
UFC901008*<br />
UFC901024*<br />
UFC901096*<br />
Fecha de fabricación<br />
h Número de catálogo M Fabricante<br />
D No reutilizar l Limitación de temperatura<br />
H Fecha caducidad d Producto no estéril<br />
g Código de lote C<br />
Marca de conformidad con la CE<br />
UFC803008<br />
UFC803024<br />
UFC803096<br />
UFC903008<br />
UFC903024<br />
UFC903096<br />
UFC805008<br />
UFC805024<br />
UFC805096<br />
UFC905008<br />
UFC905024<br />
UFC905096<br />
UFC810008<br />
UFC810024<br />
UFC810096<br />
UFC910008<br />
UFC910024<br />
UFC910096<br />
* Los filtros <strong>Amicon®</strong> <strong>Ultra</strong>-4 y <strong>Ultra</strong>-15 10K son <strong>para</strong><br />
diagnóstico in vitro. Todos los demás dispositivos son sólo<br />
<strong>para</strong> investigación.<br />
11
Aviso<br />
La información contenida en este documento está sujeta a cambios sin previo aviso y no debe interpretarse<br />
como un compromiso por parte de Merck <strong>Millipore</strong> Ltd. (“<strong>Millipore</strong>”) ni de ninguna de sus empresas<br />
afiliadas. Ni Merck <strong>Millipore</strong> Ltd. ni ninguna de sus empresas afiliadas acepta responsabilidad alguna por<br />
cualquier error que pudiera aparecer en este documento.<br />
Asistencia técnica<br />
Para más información, póngase en contacto con su oficina más próxima. Encontrará información de<br />
contacto actualizada <strong>para</strong> todo el mundo en nuestra página Web www.millipore.com/offices. También<br />
puede visitar el apartado correspondiente al servicio técnico en nuestra página Web<br />
www.millipore.com/techservice.<br />
Garantía<br />
La garantía aplicable a los productos indicados en esta publicación puede encontrarse en<br />
www.millipore.com/terms (en los “Términos y condiciones de venta” aplicables a su transacción de compra).<br />
Fabricado en Irlanda<br />
Merck <strong>Millipore</strong> Ltd.<br />
Tullagreen,<br />
Carrigtwohill,<br />
Co. Cork, IRL<br />
El logotipo M es una marca comercial de Merck KGaA, Darmstadt, Alemania.<br />
<strong>Millipore</strong>, Amicon, Milli-Q y <strong>Ultra</strong>cel son marcas registradas de Merck KGaA.<br />
Alconox y Tergazyme son marcas registradas de Alconox, Inc.<br />
Lubrol es una marca registrada de Imperial Chemical Industries PLC.<br />
Nonidet es una marca comercial de Royal Dutch/Shell Group.<br />
Triton es una marca registrada de Union Carbide Corp.<br />
Tween es una marca registrada de ICI Americas Inc.<br />
© 2012 EMD <strong>Millipore</strong> Corporation. Todos los derechos reservados.<br />
PR03521TR, Rev. A, Español, 03/12<br />
12 <strong>Filtros</strong> <strong>para</strong> <strong>centrífuga</strong> <strong>Amicon®</strong> <strong>Ultra</strong>-4