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Planteamiento y resultados.
1. Integridad del ADN.
2. Ajuste de los Parámetros de la Reacción.
3.1.1. La Integridad del ADN, a su vez, está determinada por el método
de extracción seleccionado y por el estado de conservación de los
extractos.
Para seleccionar el método de extracción mas adecuado, se
ensayaron tres técnicas diferentes: (Anexo 2.1)
Precipitación de proteínas en un medio con alto contenido
en sales (Salting out) (Miller et al., 1988; Cheng et al., 1995).
Ebullición en presencia de “Chelex” como resina quelante
de metales divalentes. (Walsh et al., 1991).
Extracción con Fenol-cloroformo basado en la extracción
diferencial, de la molécula de ADN (Sambrook et al., 1988).
La idoneidad del método de extracción se valoró analizando la
concentración, pureza e integridad de cada uno de los extractos
geonómicos.
La concentración se determinó midiendo la absorbancia que presenta a
260 nm; y la pureza, mediante la relación de absorbancias a 260/280 nm.
Adicionalmente se introdujo una medida a 320 nm para sustraer el fondo
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