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Planteamiento y resultados.
Se valoraron, a intervalos regulares de 3, 6, 9, 15 y 21 meses, la
integridad y concentración del ADN de 18 extractos genómicos almacenados a
4º C durante un periodo de casi 2 años.
Los resultados mostraron que los extractos pueden ser utilizados
durante un periodo máximo de 9 meses. Pasado este tiempo, y aunque la
concentración de ADN permanece prácticamente constante, su integridad se ve
alterada significativamente.
3.1.2. Ajuste de los parámetros de la reacción. (Anexo 2.1)
Con respecto a la enzima el Fragmento Stoffel de la Taq polimerasa,
existe acuerdo unánime en que esta enzima, obtenida a partir de la Taq
polimerasa por modificación genética, mejora la reproducibilidad en la reacción,
y, aunque no se conoce la causa concreta, se apunta a una mayor estabilidad
térmica, menor velocidad de procesamiento (10 veces menor que la Taq
polimerasa) y / o el amplio rango de iones magnesio (2 -10 mM) en el cual
trabaja. (Lawyer et al., 1988; 1993). El resto de los componentes de la
reacción, aunque se estudiaron diferentes concentraciones de Mg y dNTPs, se
fijaron finalmente dentro de los rangos recomendados: 4 mM de Mg y 0,2 mM
de cada dNTPs y 2 U del enzima.
En relación a las concentraciones optimas de ADN y primer utilizadas
en la reacción, existen opiniones contradictorias. Nosotros hemos estudiado un
amplio rango de concentraciones, desde 1 a 100 ng/25 ul de ADN y desde 1 a
8,5 pM de primer. Los resultados nos indujeron a elegir, inicialmente, 15 ng/25
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