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Planteamiento y resultados.
exposiciones agudas y crónicas. En este proceso hubo que optimizar las
concentraciones de ADN molde y cebador mas adecuadas para incrementar la
sensibilidad del ensayo y evitar la presencia de falsos positivos.
Se utilizaron dos compuestos genotóxicos de referencia, la Mitomicina C
(MMC) como mutágeno directo, (Anexo 2.2 y 2.4) y el Benzo(a)Pireno (BaP)
como mutágeno indirecto (Anexos 3.1 y 3.2).
MMC es un mutágeno de acción directa, ampliamente conocido por su
acción mutagénica y clastogénica. En función de la dosis y del periodo de
exposición, éste compuesto provoca, tanto “in vivo” como “in vitro”, sustitución
de bases, incremento en el intercambio de cromátidas hermanas, aberraciones
cromosómicas y formación de micronúcleos. (IARC)
Los estudios de exposiciones agudas realizadas con MMC, (1 y 0,5 µg/ml
durante 4 y 4, 6 y 8 h respectivamente) nos condujeron a ajustar tanto las
concentraciones de ADN molde, (de 15 a 5 ng / 25 µl) como las de cebador (de
5 a 4 pM). Las condiciones finalmente fijadas resultaron óptimas en la
detección de mutaciones, incluso para primers que generan un número muy
diferente de productos finales (de una a seis bandas).
El BaP, se seleccionó como compuesto de referencia, en estudios
agudos y en exposiciones prolongadas. La elección de dicho compuesto,
además de por su relevancia ambiental, se basó en que es un mutágeno de
acción indirecta, es decir, los productos activos son sus metabolitos.
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