Determinación de variabilidad genética en poblaciones ... - Inafor

DETERMINACIÓN DE LA VARIABILIDAD GENÉTICA EN CINCO POBLACIONES NATURALES DE Cedrela odorata L. UTILIZANDO LA
TÉCNICA RAPD
de estos cebadores debe ser complementario del tramo al que tienen que unirse en las
cadenas separadas del ADN molde (Rodríguez y Barrera, 2004).
En tercer paso, a una temperatura de 72ºC, una enzima ADN polimerasa
extiende los cebadores en el espacio comprendido entre ambos, sintetizando las
secuencias complementarias de las hebras del ADN molde. Para ello, la ADN
polimerasa usa desoxirribonucleósidos trifosfato (dNTPs) agregados a la mezcla de
reacción. La temperatura a la que se realiza está condicionada por aquélla a la cual
"trabaja" la enzima ADN polimerasa. Al cabo del primer ciclo de tres reacciones
(desnaturalización, apareamiento, extensión) el tramo de ADN elegido se ha duplicado y
el doble de su cantidad original se encuentra disponible para ser nuevamente replicado
en un segundo ciclo. El resultado de la aplicación de numerosos ciclos "en cadena" da
lugar a la amplificación geométrica del segmento de ADN delimitado por los cebadores
(Satz y Kornblihtt, 1993).
La necesidad de disponer de información previa acerca de la secuencia del ADN
a amplificar para diseñar oligonucleótidos, limitó inicialmente el desarrollo de
marcadores basados en la reacción de PCR en plantas. La primera solución a este
problema vino de la mano de los RAPDs (Random Amplified Polymorphic DNAs o
Fragmentos Polimórficos de ADN Amplificados Aleatoriamente) (Picca et al.,
2004).
3.4.3. RAPD (Randon Amplified Polymorhic DNA)
En 1990, Williams y colaboradores presentaron un método basado en la técnica
de PCR, en la que se utiliza cebadores arbitrarios para obtener marcadores moleculares
en cualquier tipo de genoma, denominaron a éste método como “Random Amplified
Polymorphic DNA” (RAPD) y a los polimorfismos que se producen “marcadores
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